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Expression de gènes rapportée par GUS

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by

Iris Grosjean

on 8 December 2013

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Transcript of Expression de gènes rapportée par GUS

Expression du gène rapporteur uidA
Pour la maudite somme de...
...37,5€ par binome, un total de 150€ dont 80% pour l'expérience
in planta
et 20% pour le dosage
Dosage de l'expression du GI
Observer l'expression du gène uidA. Qualitatif

Déterminer le taux d'expression du gène uidA.
Quantitatif


Principe
Mesure du
produit coloré
ou
fluorescent
obtenu après
dégradation
d'une pro-molécule, par l'enzyme GUS. La séquence ADNc codante cette enzyme est sous le contrôle d'un promoteur constitutif.

GUS fusions:
beta-glucuronidase
as a sensitive and versatile gene
fusion
marker
, in higher plants. R.A. Jefferson, T. A. Kavanagh, and M. W. Bevan EMBO J.
1987
December 20; 6(13): 3901–3907.
. Extraction des protéines
. Doser les protéines
. Réaction enzymatique
. Doser le produit de réaction
Résultats attendus
Devis expériences
A nous de jouer (=travailler sérieusement)
Construction :
Fusion transcriptionnelle

Dans des lignées transgéniques d'
Arabidopsis thaliana

Détection de l'activité enzymatique
Détection
Résultats attendus
Pas de coloration = * pas de transgène (PCR sur l'ADNg)
* "silencing" Transgène, mais absence de traduction
* Hétérochromatine
Iris Grosjean
Sandra Micaletto
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