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Practicas de Microbiología

Recuento de cada una de las prácticas desarrolladas en Laboratorio.
by

Cesar Gaviria

on 16 November 2012

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Transcript of Practicas de Microbiología

PRÁCTICAS DE MICROBIOLOGÍA Cesar Gaviria Q. 110576
Juan Ferrin 410524
Julian Lozano 408024
David Muñoz 510540 Bioseguridad y esterilización de las herramientas del Laboratorio de Microbiología Asas La bioseguridad es la aplicación de técnicas para evitar riesgos del personal con microorganismos patogenicos. La esterilización es la eliminación o muerte de todos los microorganismos que puedan estar presentes en un objeto. Conclusión de la práctica Al esterilizar los materiales y desinfectar el sitio de trabajo podemos obtener un trabajo seguro y ordenado, evitando perdidas y riesgos de cualquier clase. ¿Qué se realizó en la práctica? Preparar las herramientas para una previa esterilización y posteriormente se procedió a cultivar la bacteria en agar Nutritivo y el hongo en agar Sabouraud. ¿Cuál fue el objetivo? Conocer los aspectos básicos de bioseguridad y aplicar la preparación de materiales para esterilización teniendo en cuenta las caracteristicas de cada material. Técnicas de microscopia y uso correcto del microscopio binocular compuesto El objetivo de la práctica fue reconocer cada una de las partes que constituyen al microscopio asi como el uso adecuado de este. ¿Qué se realizó en la práctica? Primero se identifico cada una de las partes del microscopio asi como su función, posteriormente se procedio a observar unas muestras utilizando los diferentes enfoques que posee el microscopio. Gracias a los diferentes enfoques que posee el microscopio se pudo observar la complejidad estructural de cierto microorganismos. 5X 10X 40X 100X Conclusión de la práctica

A partir de esta experiencia con el microscopio, además de reconocer sus partes y ganar destrezas en su uso, nos permitió ganar una mayor capacidad de observación y comprensión de la realidad. Pudimos constatar que a medida que vemos mas cerca un organismo, nos damos cuenta de la complejidad de este. Preparación de medios de cultivo El objetivo de la práctica fue reconocer y preparar medios cultivo que facilitan el estudio e investigación en laboratorio de microorganismos. Ademas se prepararon algunos medio de cultivo teniendo en cuenta las intrucciones para cada tipo de agar. Lo que se realizo en laboratorio... Se preparó Agar Sabouraud en 30 tubos de ensayo inclinado teniendo en cuenta que cada tubo se le adicionara 8ml, ademas tambien se tuvo presente la formula ya estabalecida para cada tipo de agar.

A. Sabouraud: 65g por cada 1000ml 65g x 245 ml/1000ml= 15.92g Conclusión
Gracias a la preparacion de diferentes tipos de agar se puede hacer seguimiento del crecimiento poblacional de un microorganismo de interés. Técnicas de recuento de Microorganismos Objetivo de esta práctica fue desarrollar habilidades para el recuento de poblaciones de microorganismos. Conclusión ¿Qué se realizó en
laboratorio? Se utilizarón dos métodos para la cuantificación de microorganismos. Método directo: Camara Neubauer
Método indirecto: Escala o patrones de MarFaland Es una técnica basada en turbidimetría donde se inocula la bacteria una o varias veces en un tubo de ensayo con solución salina con el objetivo de ajustar la concentración para luego ser comparada con la muestra patron ya preparada, permitiendonos establecer la densidad poblacional de la bacteria en UFC por ml. Esta parte se realiza en un portaobjetos el cual tiene impresa una cuadricula graduada de 25 cuadros grandes, posteriorme se procede a inocular y se calcula la población.

Concentración de celulas/ml= n x 25 x 50 x 1000
n= número de celulas por cuadro Teniendo en cuenta que el cultivo bacteriano estaba en Caldo Nutritivo de 24h. 16.24*25*50*1000 = 2*10 ^7 UFM/ml Resultado En el método óptico de turbimetria se logro la obtener el mismo grado de turbidez que la muestra el cual tenia una concentración 1.2x10^(9 ). Resultado Preparación de disoluciones: consistió en diluir 1ml de la bacteria sembrada en Caldo Nutritivo en un tubo a la cual se la llamo sln madre. Cultivo bacteriano en Caldo Nutritivo 1ml 1ml 1ml 1ml 1ml 10* 1ml 1ml 10^0 10^-1 10^-2 10^-3 0.5ml Superficie Profundidad El estudio cuantitativo de las poblaciones de microorganismos presentes en un material es sumamente importante para determinar la calidad como en el caso de estudios alimenticios, farmaceuticos o del medio ambiente. Técnicas de siembra para hongos y bacterias El objetivo de la práctica fue efectuar las diferentes técnicas de siembra, así como adquirir la mayor destreza en cada técnica para aplicarla en la bacteria y el hongo.

Ténica por agotamiento o estría cruzada
Por cuadrantes
Masiva
Estria
Mixta
Puncion
En liquido Técnicas de siembra para la bacteria Ténicas de siembra para el hongo Esta técnica consiste en tomar una del
micelio y por una punción suave inoculamos en el agar. Conclusíon Cada técnica de siembra facilita al investigador ser mucho mas objetivo en sus estudios para el desarrollo de las ciencias. Tinciones simples y compuestas para bacterias El objetivo de la práctica fue observar las principales estructuras de la bacteria con la cual se ha trabajado durante el semestre. Tinción de Gram: es una técnica que permite clasificar a las células en dos grandes grupos de acuerdo a la tinción o coloración de la pared celular del microorganismo. Preparación del frotis Bacillus Gram Positiva Tinción de Gram Tinción de esporas En la práctica
Para la bacteria de estudio las endosporas quedaron teñidas de color verde. Se utiliza para teñir las estructuras de resistencia llamadas endosporas bacterianas. Sobre el portaobjetos con la preparación se echa verde malaquita que tiñe las células de verde. Luego se lava con agua destilada con lo que las células se quedan incoloras y las endosporas permanecen verde. Finalmente se usa la safranina para obtener bacterias de color rosa mientras que las endosporas continúan con su color verde del verde malaquita. Resultado Tinción de capsulas En un portaobjetos se deposita una gota de tinta china
Se inocula y se mezcla a lo largo del portaobjetos
Se deja secar al aire.
Posteriormente se cubre con safranina por 10 segundos.
Se retira el exceso de colorante con agua y se deja secar al ambiente.
Observar Bacillus Gram Positivas con capsulas Tinción de flagelos Se prepara una suspension poco densa de bacterias en agua.
Agregamos 2 gotas de esta suspension sobre un extremo del portaobjetos y se deja secar.
Se cubre la suspension con el reactivo Leifson durante 5-15 minutos.
Cuando se forme un precipitado, se enjuaga con agua destilada, Las tinciones nos ayudan a tener una visualización adecuada y detallada de las bacterias, con el propósito de observar su morfología, forma, desplazamiento y clasificación Conclusión Metabolismo Bacteriano El objetivo de la práctica fue realizar las diferentes pruebas bioquímicas, utilizadas para la identificación de género y especie de la bacteria. Conclusión En la prueba de antibiograma el efecto de
los antibioticos fue moderado, presentandose un halo de innhibición de 6mm en promedio. Las diferentes pruebas bioquímicas permitieron tener un acercamiento del tipo de bacteria que es objeto de estudio, es por ello que podemos decir que la bacteria tiene forma de Bacilo, es aerobia facultativa, no fermenta carbohidratos. Comparando los resultados del metabolismo bacteriano con la tabla de Cowan's para identificación de bacterias heterotrofas se puede decir que la bacteria pertenece al genero Bacillus Observación y reconocimiento
de hongos El objetivo de la práctica consistió en reconocer la morfología del hongo, el cual fue objeto de investigación durante el semestre. Montaje en portaobjetos Se coloca una gota del reactivo Lactofenol.
Se agrega un poco del hongo en el portaobjetos homogenizando con el reactivo y posteriormente se cubre con cubreobjetos.
Se observa en 40X. Impronta Colocando una gota de azul de lactofenol en un portaobjetos y suavemente se presiona la cinta sobre el hongo cultivado por la parte adhesiva de la misma. Luego proceder a pegar la cinta con la muestra del hongo en el portaobjetos para seguir con las observaciones respectivas por medio del microscopio. Hifas septadas o tabicadas Conclusión Las diferentes metodologías
permitieron observar algunas
estructuras como las hifas, las esporas, pero se tuvo dificultad en la clasificación del mecelio. Resultado Final Investigativo Gracias a las siguientes pruebas como: la Reacción de Gram, morfología, catalasa, oxidasa, fermentación de glucosa, movilidad y esporas se pudo determinar con la ayuda de la tabla de Cowan's el genero de bacteria a la cual pertenece la bacteria que fue obejto de estudio durante el semestre. En la técnica de microcultivo para el hongo se pudo indentificar estructuras como las esporas, la cual nos permitio acercarnos más a la clasificación e interpretación del hongo. Dominio: Bacteria
Clase: Bacilli
Familia: Bacillaceae
Genero: Bacillus http://es.wikipedia.org/wiki/Bacillus Hifas tabicadas Esporas de la forma Slecosporas y pertenece
la clase Deuteromycetes. Bibliografía Rojas Triviño. Conceptos y Prácticas de Microbiología General. Universidad Nacional de Colombia, 2011.

Barreto, Miriam. 1994. Manual Practico de Microbiología General. Canoabo Carpenter, Philip 1969. Microbiología 2da Edición. Editorial.

Castaño-Zapata, J. y del Rio Mendoza, L. 1997. Manual para el diagnóstico de hongos, bacterias, virus y nematodos fitopatógenicos. Zamorano-Universidad de Caldas. 210 p.
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