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STR

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by

태준 설태준

on 3 July 2013

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Transcript of STR

STR을 이용한 범인 찾기
배경
Topic
가설
4.실험 계획
(1)준비

1)먼저 주인을 찾을 머리카락 시료 X를
실험군
으로 준비한다.

2)대조군으로 각각 다른 사람에게서 채취(
조작 변인
)한 머리카락 시료 4개를 준비한다. 각 머리카락엔 모근이 붙어있어야 한다.
(2)모근세포 DNA 추출 및 DNA 증폭
6) PCR cycler를 이용하여 다음처럼 PCR을 수행한다.
(3)DNA를 PAGE 전기영동해 비교한다.

1)10% acrylamide 겔을 만든다.

2) 겔을 넣은 후 겔이 굳어지면 전기영동키트를 세팅한다.

3)첫번째 well에 DNA ladder marker를 loading 하고, 두번째에 X의 시료를 loading 하며,나머지 well에 각각의 대조군DNA 시료를 loading한다.


1214 설태준
현대 법의학 및 친족 확인에서 유전적 프로필을 구성하기 위해 쓰이는 방법인 STR 분석을 진행하여
대립유전자의 다양성과 DNA 반복서열을 이해하고 법의학에서 분자생물학이 이용되는 방법을 안다.

2.목표
:What is STR?
1.DNA 서열의 유형
짧은 연쇄 반복서열(
S
hort
T
andem
R
epeat)
2.대립유전자의 개념
3.STR marker
미국 국립표준기술연구소
과학 교육 및 학습 센터 STRBASE(www.cstl.nist.gov/strbase/)
2bp~10bp길이 염기쌍 반복
intron에서 나타나 junk DNA로 불리기도
대부분 반복횟수는 대립유전자에 특징적인 것(polymorphism)
사람의 genome에서 지금까지 알려진 STR 서열은 10,000가지가 넘음
STR조사를 통해:
1.특정 좌위에서 얼마나 많은 횟수로 특정 STR 서열이 반복되는지를 관찰해 보면 개인의 독특한 특징

2.개인이 가지고 있는 대립유전자의 종류와 유전자형을 알아 낼 수 있으며, 한 집단 내에서의 다양한 대립유전자의 종류 및 분포 양상을 조사

법의학에서 유전적 프로필을 결정하는데 가장 널리 사용되는 방법!




STR의 염기서열과 그 반복 횟수는 사람마다 다르고 동일 인물은 같으므로
1)여러사람의 머리카락을 PCR로 증폭하여 PAGE로 전기 영동시 분리된 DNA 절편의 위치가 각각 다르게 나타날 것이며
2)우리가 찾고자하는 머리카락X와 동일한 전기영동 결과의 머리카락이 나타난다면 그 머리카락의 주인과 머리카락 X의 주인은 동일 인물일 것이다.
이때 X의 전기영동 결과와 일치하는 밴드의 주인의 시료가
실험군
으로서 개인마다 STR이 달라 다른 이와는 전기영동 결과가 다르지만 같은 사람의 유전자는 STR이 같아 전기영동 결과도 같을 것이라는 가설을 증명하기 위한 것이고,

나머지는 이와 비교하기 위한
대조군
이 된다.
모발 상태만으로 개인을 식별할 수 없게 모발의 길이와 색깔, 영양상태 등은 동일하게 한다(
통제 변인
).
1)각 머리카락의 모근 부분을 잘라 모근이 밑으로 가게 튜브에 넣고 lysis buffer를 첨가, 원심분리기에 잠깐 돌려 모근이 buffer에 잠기게 한다.
-lysis buffer는 세포내 화합물 분석을 위한 buffer
튜브는 X의 시료와 대조군의 시료를 구분하여 섞이지 않게한다.
2) 튜브를 95℃ heating block에 넣고 20분간 incubation한다.
3)튜브를 식히고 HEPES를 약간 넣어 원심 분리기 에서 12000rpm으로 5분간 돌린다.
4)PCR master mix를 만들어 PCR 튜브에 넣는다.Taq polymerase는 온도에 민감하므로 만지지 않도록 하고 빨리 실험하여 변성을 막는다.
5) 같은 튜브에 냉장고에 보관해 두었던 시료를 넣는다.
Tm=4(G+C)+2(A+T)
4)120V에서 약 한 시간 동안 영동한다.

5)전기영동이 끝난 후, 완충용액을 버리고 겔을 빼내어, 찢어지지 않도록 유리판에서 조심히 분리한다.

6)TBE buffer와 EtBr를 넣은 용기에 겔을 담근 뒤, 20분간 겔 염색을 진행하고 관찰한다.
5.결과 예측

머리카락 X의 모근 세포 DNA의 전기영동 결과로 나온 밴드와 다른 사람의 밴드를 비교했을 때

(1)먼저 X와 비교를 위해 준비한 4개 시료의 밴드는 각각 위치가 다를 것이며

(2)이 넷 중 X와 위치가 일치하는 밴드를 가진 DNA 시료의 주인이 머리카락 X의 주인, 즉 범인일 것이다.
감사합니다
satellite DNA-microsatellite DNA
bp에 따른 밴드의 분리
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