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Copy of polimorfismo TNF alfa

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명인 황

on 31 October 2013

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Transcript of Copy of polimorfismo TNF alfa

작가 : 김지우
평론가 : 황명인
Fonte: disponível em: http://medfoco.com.br/colesterol-alto-hdl-ldl-informacoes-e-duvidas/ acessado em 23/05/2012.
A classificação utilizada pelo Instituto Brasileiro de Geografia e Estatística –IBGE. Auto Declaração.
미술 발표
O TNF- α é uma glicoproteína que se encontra na forma solúvel ou exposta na superfície da membrana das células, sendo biologicamente ativa, participando da citotoxicidade e inflamação por interação celular, e produz efeitos sobre diversos tipos celulares e tecidos, tais como a intensificação da inflamação, da reabsorção óssea, favorecimento da coagulação, retardo no processo de fibrinogênese, adesão de lipídios e depósito de colesterol. (WOLF, 2006)
A enzima LPL tem como função transferir a gordura presente na corrente sanguínea para o interior das células adiposas, sendo responsável por armazenar a gordura corporal.
Analisar, através da aplicação de índices, a saúde periodontal dos pacientes com diagnóstico de Doença Arterial Coronariana- DAC atendidos no Pronto Socorro Cardiológico de PE Prof. Luiz Tavares - PROCAPE, e verificar se existe associação do polimorfismo na região promotora do gene TNFα (-308) com a ocorrência da Doença Arterial Coronariana- DAC e a Doença Periodontal –DP.

Descrever as características clínica e biológicas dos pacientes com Doença Arterial Coronariana e Doença Periodontal;

Verificar alterações periodontais através da aplicação dos seguintes índices:

Índice de Higiene Oral Simplificado IHO’S;
Índice Periodontal Comunitário – IPC.

Verificar se o polimorfismo na região promotora do gene TNF-α (-308) está associado com a ocorrência da Doença Arterial Coronariana- DAC e a Doença Periodontal–DP .
POPULAÇÃO

Serão analisados dois grupos um caso e outro controle:

No grupo caso, serão analisados os pacientes com diagnóstico de Doença Arterial Coronariana- DAC, submetidos a cinecoronariografia, atendidos no Pronto Socorro Cardiológico de PE Prof. Luiz Tavares – PROCAPE (será realizada análise periodontal para formação de dois grupos: Pacientes com DAC e DP e Pacientes com DAC sem DP).

No Grupo controle serão analisados pacientes atendidos no PROCAPE que realizam exames cardiológicos de rotinas e não possuem alterações ou histórico de alterações cardíacas, pareados por hipertensão, diabetes, faixa etária e gênero (será realizada análise periodontal para formação de dois grupos: pacientes sem DAC e com DP e pacientes sem DAC e sem DP).
 
Coleta de material biológico

Será coletada amostra de sangue periférico da veia do antebraço e acondicionada em tubo com anticoagulante EDTA K3 (ácido etileno diamino tetracético tri-potássico), para posterior extração de material genômico por kit PROMEGA seguindo as instruções do fabricante.

Determinação dos polimorfismos

Após extração do material genômico, por kit promega “wizard Genomic DNA purification kit” seguindo as instruções do fabricante, será realizada a genotipagem do material genômico pelo método da reação em cadeia da polimerase – polimorfismo de comprimento de fragmentos de restrição (do inglês Polymerase Chain Reaction – Restriction Fragment Lenght Polymorphism, PCR - RFLP) para os genes TNF-a, após amplificação do material a ser investigado será utilizada uma enzima de restrição NcoI para identificação do polimorfismo do gene TNF-a (57) (Anexo 3) Os primers que serão utilizados para a identificação dos polimorfismos estão descritos na tabela 1.
 
As prevalências dos genótipos serão estimadas pelo teste do qui-quadrado (2) de aderência. As frequências alélicas serão estimadas pelo método de contagem gênica. A análise da hipótese do equilíbrio genético de Hardy-Weinberg e a heterogeneidade entre os pacientes e uma amostra controle serão testados pelo Qui-quadrado (2). A existência de associações entre variáveis categóricas será realizada utilizando o teste de 2, de acordo com tamanho das amostras. A magnitude dessas associações será estimada com o cálculo da odds ratios (OR) utilizando intervalos de confiança de 95%.
Para estas análises será utilizado o programa Bioestat versão 5.0.
미술 발표


Nas últimas duas décadas, o crescente desenvolvimento no campo da biologia vascular tem esclarecido que as lesões ateroscleróticas são de fato uma série de respostas celulares e moleculares altamente específicas e dinâmicas, essencialmente inflamatórias por natureza[6,7].
A reação inflamatória/proliferativa na parede vascular aumenta a secreção de citocinas pró-inflamatórias primárias, como as interleucinas, o fator de necrose tumoral e conduzem ao aumento de proteinas de adesão leucocitária, e aumento de substâncias quimiotáticas amplificadores da cascata inflamatória)[8,9].

Disciplina de Acompanhamento de Projetos turma 2012
Tutora: Profª Drª Terezinha de Jesus
Orientador: Prof. Dr. Dário Sobral
Co-orientadora: Profa. Dra. Tereza Cartaxo
Mestranda: Pérola Caribé

Figura: Fonte: disponível em: http://duoodonto.duoodonto.com.br, acessado em 23/05/2013.

Desenho do estudo
Estudo Analítico Transversal com comparações de grupos 

Local e Período de Estudo
Este estudo esta sendo realizado no Pronto Socorro Cardiológico de Pernambuco Prof. Luiz Tavares - PROCAPE e os polimorfismos estão sendo identificados no Laboratório de Biologia Molecular do Centro de Oncohematologia Pediátrica (CEONHPE/HUOC).

População
O plano de recrutamento é por conveniência. Estão sendo alocados pacientes atendidos no Pronto Socorro Cardiológico de PE Prof. Luiz Tavares - PROCAPE, de 18 a 65 anos de idade, com diagnóstico de Doença Arterial Coronariana- DAC submetidos à cinecoronariografia.





Critérios de inclusão

Foram incluídos no estudo pacientes atendidos no Pronto Socorro Cardiológico de PE Prof. Luiz Tavares - PROCAPE, de 18 a 65 anos de idade, com diagnóstico de Doença Arterial Coronariana- DAC, submetidos à Cinecoronariografia.

Critérios de exclusão

Foram excluídos do estudo pacientes que estão sob tratamento com medicamentos de anti-fator de necrose tumoral e/ou imunossupressores.


Após admissão do paciente na pesquisa, com assinatura do termo de consentimento livre e esclarecido – TCLE, e obedecendo aos critérios de inclusão já citados, é realizado:

a) Exame Clínico Periodontal;
b) Cálculo do Escore de Syntax;
c) Coleta de material biológico;
d) Extração do DNA e
f) Determinação do Polimorfismo TNF-α (308).

Tamanho da amostra

Para determinar o tamanho da amostral foi utilizado o programa EPI-INFO na versão 6.04d para DOS. Sendo estabelecido erro de 5,0%, confiabilidade de 95,0% e proporção esperada de 50% e um percentual de perda de 30%.

Sendo assim, calculado um tamanho amostral de 384 usuários, acrescido de 30% para compensar as possíveis perdas, foi totalizado 500 usuários.


Critérios de inclusão

Foram incluídos no estudo pacientes atendidos no Pronto Socorro Cardiológico de PE Prof. Luiz Tavares - PROCAPE, de 18 a 65 anos de idade, com diagnóstico de Doença Arterial Coronariana- DAC, submetidos à Cinecoronariografia.

Critérios de exclusão

Foram excluídos do estudo pacientes que estão sob tratamento com medicamentos de anti-fator de necrose tumoral e/ou imunossupressores.

Avaliação periodontal : Índice de Higiene Oral Simplificado - IHO’S

Um dos índice utilizados para avaliação da higiene bucal do paciente é o Índice de Higiene Oral Simplificado - IHO’S, proposto por GREENE e VERMILLION (1964).
Nesse índice, examinamos as superfícies dos seguintes dentes:

Vestibular do primeiro molar superior direito (16V);
Vestibular do incisivo central superior direito (11V);
Vestibular do primeiro molar superior esquerdo (26V);
Lingual do primeiro molar inferior esquerdo (36L);
Vestibular do incisivo central inferior esquerdo (31V);
Lingual do primeiro molar inferior direito (46L)

O Índice de Higiene Oral Simplificado IHO`S apresenta vantagens de aplicação, por ser de fácil execução e por ser um método preciso e rápido na qualificação da higiene bucal. Os escores para indutos e cálculos variam de zero a três, de acordo com os seguintes critérios:


Avaliação periodontal: Índice periodontal Comunitário – IPC

Criado por Ainamo et al em 1982, é um índice periodontal que avalia os indicadores das condições atuais do periodonto: Presença de sangramento gengival, cálculo ou bolsa periodontal.


Dentes índices: 16, 11, 26, 36, 31 e 46.
Códigos:
0 – sextante hígido;
1 – sextante com sangramento (observado diretamente ou com espelho, após sondagem);
2 – cálculo (qualquer quantidade, mas com toda área preta da sonda visível);
3 – bolsa de 4 a 5 mm (margem gengival na área preta da sonda visível);
4 – bolsa de 6 mm ou mais (área preta da sonda não está visível)
X – sextante excluído
9 – sextante não examinado.
 




Após admissão do paciente na pesquisa, com assinatura do termo de consentimento livre e esclarecido – TCLE, e obedecendo aos critérios de inclusão já citados, é realizado:

a) Exame Clínico Periodontal;
b) Cálculo do Escore de Syntax;
c) Coleta de material biológico;
d) Extração do DNA e
f) Determinação do Polimorfismo TNF-α (308).

Coleta de material biológico

É coletada amostra de sangue periférico da veia do antebraço e acondicionada em tubo com anticoagulante EDTA K3 (ácido etileno diamino tetracético tri-potássico), para posterior extração de material genômico A extração do DNAA extração do DNA está sendo realizada por kit de extração de DNA da PROMEGA de acordo com o protocolo já estabelecido.

Determinação dos polimorfismos

Após extração do material genômico, é realizada a análise do polimorfismo da região promotora do gene TNF, na posição -308 (G/A), esta sendo realizada por PCR em tempo real, através da metodologia Taqman Genotyping Assays (ID: C___7514879_10). Todas as sondas e primers utilizados nesse estudo estão disponíveis para o uso em pesquisa de caráter científico no site do SNP500 (http://snp500cancer.nci.nih.gov), assim como, os ensaios e protocolos, os quais já foram previamente validados. Esta sendo utilizado o Rotor Gene 6000 (Corbett Research, Austrália).



 
As frequências alélicas e genotípicas foram estimadas pelo método de contagem gênica. A existência de associações entre variáveis categóricas é realizada utilizando o teste de qui-quadrado, de acordo com tamanho da amostra. A magnitude dessas associações foi estimada com o cálculo da odds ratio (OR) utilizando intervalos de confiança de 95%.
 

 
A pesquisa clínica esta sendo realizada no PROCAPE/UPE, um hospital de referência em cardiologia e atende todos os tipos de doenças cardiovasculares. O ambulatório de hemodinâmica atende em média 150 pacientes/mês e possui infra-estrutura para a investigação clínica, laboratorial e hemodinâmica.

A análise das amostras biológicas esta sendo realizada no Laboratório de Biologia Molecular do Centro de Oncohematologia Pediátrico (CEONHPE) que apresenta infra-estrutura para a manipulação do material biológico e genômico, contando com três ambientes destinados a diferentes processos metodológicos: sala para extração de DNA e RNA, sala de amplificação e eletroforese, sala de Pré-PCR.

 
A análise do polimorfismo da região promotora do gene TNF, na posição -308 (G/A), foi realizada em 208 pacientes, destes (79,3%) apresentaram o genótipo GG, (20,19%) apresentaram o genótipo AG e apenas (0,49%) apresentaram o genótipo AA (gráfico 4).


Q&A

 
A análise do polimorfismo da região promotora do gene TNF, na posição -308 (G/A), foi realizada em 208 pacientes, destes (79,3%) apresentaram o genótipo GG, (20,19%) apresentaram o genótipo AG e apenas (0,49%) apresentaram o genótipo AA (gráfico 4).



Resultados parciais
Polimorfismo

Q&A
Resultados parciais IHO`S

Referências

1. Hausmann E, Raisz LG, Miller WA. Endotoxin: simulation of bone resorption in tissue culture. Science 1970; 168:862-864.
2.Iacopino AM, Cutler AW. Pathophysiological relationshipd between periodontitis and systemic disease: Recent concepts involving sérum lipids. J Periodontol 200;71:1375-1384.
3. AAP (The American Academy of Periodontology – Annais of Periodontology – 1999 International Workshop for a Classification of Periodontal Disease and Conditions.
4.Contran, RS.; Kumar, V; Robbins, SL. Fundamentos de Robbins:patologia estrutural e funcional. 7.ed. Rio de Janeiro: Guanabara Koogan, 2005.1485p.
5. Rang, HP. et al. Farmacologia. 6.ed. São Paulo: Elservier, 2007.920p.
6. Rocha VZ, Libby P. Obesity, inflammation, and atherosclerosis.Nat RevCardiol. 2009; 6 (6): 399-409.
7. Serrano CV Jr, Souza JA, Paiva MSMO. Fatores desencadeantes da instabilização da placa aterosclerótica. RevSocCardiol Estado de São Paulo. 2001; 4: 724-32
8. Fernandes JL, Soeiro A, Ferreira CB, Serrano CV Jr. Síndromes coronárias agudas e inflamação. RevSocCardiol Estado de São Paulo. 2006; 3: 178-87.    
9. Serrano CV Jr, Souza JA, Heinisch RH. A agressão vascular no desencadeamento das síndromes isquêmicas miocárdicas instáveis. In: Nicolau JC, Marin JA. (eds.). Síndromes isquêmicas miocárdicas instáveis. São Paulo: Atheneu; 2001. p. 25-36.
10. Hotamisligil G, Arner P, Caro JF, Atkinson RL, Spiegelman BM. Increased adipose tissue expression of tumor necrosis factor-alpha in human obesity and insulin resistence. J Clin Invest. 1995; 95: 2409-15.
11. Taylor BA, Tofler GH, Carey HMR, Morel-Kopp MC, Philcox S, Carter TR. Full-mounth tooth extraction lowers systemic inflammatory and thrombotic markers of cardiovascular risk. J Dent Res. 2006; 85: 74-8.
12.Franch-ChillidaF, Nibali L, Madden I, Donos N.
Association between interleukin-6 polymorphisms and periodontitis in Indian non-smokers.JClinPeriodontol. 2010;37:137-44.
13.Rosengren A, Hawken S, Ounpuu S, Sliwa K, Zubaid M, Almahmeed WA, et al. Association of psychosocial risk factors with risk of acute myocardial infarction in 11119 cases and 13648 controls from 52 countries (the INTERHEART study): case-control study. Lancet. 2004 2004 Sep 11-17;364(9438):953-62.
14.Bolognese L. Changing patterns of ST elevation myocardial infarction epidemiology. Am Heart J. 2010 Dec;160(6 Suppl):S1-3.
15.Mansur AP, Favarato D, Souza MF, Avakian SD, Aldrighi JM, César LA, et al. Trends in death from circulatory diseases in Brazil between 1979 and 1996. Arq Bras Cardiol. 2001 Jun;76(6):497-510.
16.Kannel WB. Bishop lecture. Contribution of the Framingham Study to preventive cardiology. J Am Coll Cardiol. 1990 Jan;15(1):206-11.
17.Willerson JT, Ridker PM. Inflammation as a cardiovascular risk factor. Circulation. 2004 Jun;109(21 Suppl 1):II2-10.
18.Hansson GK. Immune mechanisms in atherosclerosis. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 2001 Dec;21(12):1876-90.
19.Cesari M, Penninx BW, Newman AB, Kritchevsky SB, Nicklas BJ, Sutton-Tyrrell K, et al. Inflammatory markers and onset of cardiovascular events: results from the Health ABC study. Circulation. 2003 Nov;108(19):2317-22.
20.Ridker PM, Rifai N, Pfeffer M, Sacks F, Lepage S, Braunwald E. Elevation of tumor necrosis factor-alpha and increased risk of recurrent coronary events after myocardial infarction. Circulation. 2000 May;101(18):2149-53.
21.Skoog T, Dichtl W, Boquist S, Skoglund-Andersson C, Karpe F, Tang R, et al. Plasma tumour necrosis factor-alpha and early carotid atherosclerosis in healthy middle-aged men. Eur Heart J. 2002 Mar;23(5):376-83.



제 작가는 누구일까요?
제 작가의 생일과
출신 학교는
1997년 3월 28일
제 작가의 취미는
미술작품 감상하기, 수집하기,
미술관 견학하기,
미술에관한 책읽기,
역대 유명 미술가 조사하기
제 작가의 경력은
A. 유치원, 초등학교, 중학교때 미술 상이란 상은 다 휩쓸었죠. 제가 별명이 지우나르도 다 빈치 였어요.

제 작가의 이상형은
미술을 사랑하고 아끼며 존중하고,
오로지 미술과 함께 공존하는...
1차시
2차시
3차시
3차시중 작은 해프닝!
스케치중인 지우작가님~
4차시 - 완성작
아빠
첫째딸
둘째딸
셋째딸
Q&A
미술 초등학교 - 방배중학교
- 서문여고~ing
★ 변화 과정 ★
Q. 사용할 수채 도구는? 그 이유는?


A.색연필. 수채화보다는 색연필이 구체적으로
명암 하나하나를 더 잘 나타낼 수 있겠다고 생각했고,
수채화보다 색연필이 저랑 친해서 서로 더 잘 맞기 때문이죠. 호호
Q. 이 그림의 완성도와 만족도는?
제 작품은 정말정말정말 완벽하죠. 하지만, 아쉬운 것은 제가 2차시 때 그림을 안 가져 오는 굉장히 중대한 실수를 저지르지만 않았어도 지금보다 훨씬 더 완벽한 그림이 나오지 않았을까 싶습니다. 2차시 때 40분 가량을 그냥 멍~ 하게 날려 버려서 가슴이 굉장히 말도 못하게 아팠고, 저의 실수가 정말 못견디게 제 자신을 패주고 싶었지만, 앞으로 2번이 더 남아있다는 것으로 위안을 삼았고, 제 옆의 보미도 스케치를 다 안끝냈다는 것에 안도의 한숨을 내쉬었어요. ㅎㅎ

또, 4차시때 6명의 친절한 친구들과 함께 몰아쳐서 색칠하지 않고 , 천천히 마음을 가다듬으며 꼼꼼하게 색칠을 했다면 좋았을 거라는 아쉬움이 남습니다. 하지만 아쉬움은 조금 있어도 후회는 없습니다. 음하하하!! 앞으로 더 잘하면 되죠.ㅋㅋ

Q. 평론가를 하다가 작가를
하게 되었는데 느낀점이나 소감은?
Q&A
Q. 이 그림의 완성도와 만족도는
어느정도라고 생각합니까?

감사합니다!
그리고 미술작품수집과 작품감상을 취미로 여기며, 나와 함께 미술에
대해서 심각한 토론도 마다하지 않는...
미술선생님 같은 사람
장난이고, 중학교때 만화 그리기 대회에서 꾸준히 금,은상을 탔어요...
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