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RT-PCR

PCR transcriptasa inversa
by

Constanza Cabrera

on 15 June 2011

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Transcript of RT-PCR

RT-PCR PCR transcriptasa inversa Generación de c-DNA a partir de RNA PCR
Reacción en cadena de la polimerasa.
Amplificación de hebras de DNA o RNA
a a partir de una muestra. Denaturación
Aneeling
Extensión RT-PCR Proceso en que se generan copias de RNA en forma de c-DNA y son amplificadas a partir del RNA diana. ETAPAS 1) Transcripción reversa 2) Amplificación de c-DNA + Síntesis de DNA
complementario.
+ Se obtienen copias del RNA
en forma de c-DNA.
+ Se conserva la secuencia del
RNA a amplificar. PCR convencional - RNA diana
- Primers
- RNAasa-H
- Transcriptasa inversa
- dNTPs ¿Cómo ocurre ésto? 1) unión del primer a hebra de RNA
2) extensión acción de la retrotranscriptasa
3) degradación de RNA por RNAasa-H
4) generación de c-DNAss 1) unión del primer 2 al c-DNA
2)elongación
3)extensión
4)formacion de productos c-DNAds
amplificado. Contenido Mezcla de oligómeros Primer específico Oligo DT Retrotranscriptasas M-MLV AMV rTth Primers Aplicaciones Contenido - c-DNA
- DNA Pol
- Primers
- dNTPs
- Mg2
- Buffer Evaluación del producto amplificado Poli A 3' Poli T 5' mRNA cDNA Primer1 Primer2 5' 3' dsDNAc - Gel de agarosa 2%

- Tinción con bromuro
de etidio.

- Visualización en
transiluminador UV * Diagnóstico de enfermedades

* Genotecas c-DNA

* Evaluación de la expresión
génica

* Detección de virus RNA Genotecas c-DNA Librería de genes
No contiene intrones
Fragmentos de c-DNA se inseertan en un vector y se clonan Conclusion RT-PCR es una herramienta muy útil para trabajar ocn RNA, lo cual abre nuevas puertas al diagnóstico y tratamiento de diversas enfermedades.

Permite además generar librerias genómicas, contribuyendo así con el avance de la ciencia y con el buen manejo de enfermedades genéticas. Bibliografía CARRILLO, E. et al. Detección mediante RT-PCR de células tumorales circulantes en pacientes con melanoma maligno en estadio III: Correlación con el grosor y la histología del tumor. Rev Diagn Biol [online]. 2001, vol.50, n.3 [citado 2011-06-07], pp. 137-140 . Disponible en: <http://scielo.isciii.es/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0034-79732001000300003&lng=es&nrm=iso>. ISSN 0034-7973. Thomas M Delvin. Bioquímica. Ed. Revelte 2004. pp 304. José Luque Cabrera. Biología molecular y celular. Ed. Elsevier. España 2001. pp. 195-196 . Disponilbe en http://books.google.com/books?id=-xIx6G7bIv4C&pg=PA188&dq=pcr+inversa,+biolog%C3%ADa++molecular&hl=es&ei=pnrpTa7dJ8eftgewy5XCAQ&sa=X&oi=book_result&ct=result&resnum=1&ved=0CCkQ6AEwAA#v=onepage&q=pcr%20inversa%2C%20biolog%C3%ADa%20%20molecular&f=false Vladimir Oviedo Rodriguez. Tesis Evaluación de la expresión de Wrn y PaI-1 en ratón normal y transgénico para Wrn y el posible papel de Wrn como factor de transcripción de Pal-1. facultad de medicina Universidad de Colima. Junio 2004. Disponible en http://digeset.ucol.mx/tesis_posg
rado/Pdf/Vladimir_Oviedo_Rdgz.PDF Paula Ordóñez, et. al. Construcción y expresión de una proteína recombinante de la envoltura del virus linfotrópico humano tipo I (HTLV-I). Fascultad de salud, Universidad del valle, Colombia. Disponible en http://simef.univalle.edu.co/colombiamed/Vol33No2/cm33n2a2.htm Constanza Cabrera
Diagnóstico Molecular
Profesores
Favian Treulen
Alexy Rosales Magne Børset, et. al. Concomitant Expression of Hepatocyte Growth Factor/Scatter Factor and the Receptor c-MET in Human Myeloma Cell Lines. doi: 10.1074/jbc.271.40.24655 October 4, 1996 The Journal of Biological Chemistry.
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