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Transcript of Untitled Prezi

Integrantes:
Rosalinda Cruz Alcaraz.
Ana Isabel De la O Montes.
Marina Domínguez Granados.
Luz Zuley León Morales.
Hixi Santillan Nieto. CROMATOGRAFÍA DE LÍQUIDOS DE ALTA RESOLUCIÓN (HPLC) CROMATOGRAFÍA La cromatografía es una técnica de análisis basada en la separación de una mezcla y su posterior detección. CARACTERISTICAS ¿ EN QUE SE BASA LA CROMATOGRAFÍA HPLC? El HPLC es una técnica utilizada para separar los componentes de una mezcla basándose en diferentes tipos de interacciones químicas entre las sustancias analizadas y la columna cromatográfica. INTRODUCCIÓN

El botánico ruso Mijail Tsweet empleo por primera vez en 1906 el termino “cromatografía”. A principios del año 1903, uso columnas de absorción de líquidos para separar pigmentos vegetales.
La cromatografía liquida de alta resolución (HPLC) comenzó a desarrollarse en el año 1960.
Gran sensibilidad
Determinaciones cuantitativas exactas
Determinación de compuestos no volátiles (alto peso molecular, iones metálicos) o termolábiles.
Aplicabilidad a sustancias de interés general (industria, salud, medioambiente).
Aminoácidos, proteínas, ácidos nucleicos, hidrocarburos, carbohidratos, fármacos, terpenoides, plaguicidas, antibióticos, esteroides,etc. PARTES DEL HPLC ¿COMO SE REALIZA? El compuesto pasa por la columna cromatografía a través de la  fase estacionaria (normalmente, un cilindro con pequeñas partículas redondeadas con ciertas características químicas en su superficie) mediante el bombeo de líquido (fase móvil) a  alta presión  a través de la columna. La muestra a analizar es introducida en pequeñas cantidades y sus componentes se retrasan diferencialmente dependiendo de las interacciones químicas o físicas con la fase estacionaria a medida que adelantan por la columna. La utilización de presión en este tipo de cromatografías incrementa la velocidad lineal de los compuestos dentro de la columna y reduce así su difusión dentro de la columna mejorando la resolución de la cromatografía. Los disolventes más utilizados son el  H2O, el  CH3OH  y el  acetonitrilo.
El agua puede contener tampones, sales, o compuestos como el ácido trifluoroacético, que ayudan a la separación de los compuestos. TIPOS DE HPLC Cromatografía de fase normal
Cromatografía de fase reversa
Cromatografía de exclusión molecular
Cromatografía basada en bioafinidad.
Cromatografía líquida de alta eficacia en condiciones desnaturalizantes (DHPLC) La cromatografía de fase normal o "Normal phase HPLC" (NP-HPLC) fue el primer tipo de sistema HPLC utilizado en el campo de la química, y se caracteriza por separar los compuestos en base a su polaridad. Esta técnica utiliza una fase estacionaria polar y una fase móvil apolar, y se utiliza cuando el compuesto de interés es bastante polar. El compuesto polar se asocia y es retenido por la fase estacionaria CROMATOGRAFÍA DE FASE NORMAL

La HPLC de fase reversa (RP-HPLC) consiste en una fase estacionaria apolar y una fase móvil de polaridad moderada. Una de las fases estacionarias más comunes de este tipo de cromatografía es la sílica. CROMATOGRAFÍA DE FASE REVERSA También conocida como cromatografía por filtración en gel, separa las partículas de la muestra en función de su tamaño. Generalmente se trata de una cromatografía de baja resolución de forma que se suele utilizar en los pasos finales del proceso de purificación. También es muy útil para la determinación de la estructura terciaria y la estructura cuaternaria de las proteínas purificadas. CROMATOGRAFÍA DE EXCLUSIÓN MOLECULAR Este tipo de cromatografía se basa en la capacidad de las sustancias biológicamente activas de formar complejos estables, específicos y reversibles. CROMATOGRAFÍA BASADA EN AFINIDAD Se trata de un método que se emplea para el rastreo de mutaciones (ya casi totalmente en desuso debido al auge de la secuenciación), que permite detectar la presencia de variaciones en el ADN aunque no se determinan específicamente cuáles. CROMATOGRAFÍA LÍQUIDA DE ALTA EFICACIA EN CONDICIONES DESNATURALIZANTES (DHPLC) APLICACIONES CONCLUSIÓN La cromatografia HPLC es el resultado de las interacciones específicas entre las moléculas de la muestra en ambas fases, móvil y estacionaria. Esta no está limitada por la volatilidad o la estabilidad térmica de la muestra. Tiene un gran campo de aplicación y es capaz de separar macromoléculas y especies iónicas, productos naturales lábiles, materiales poliméricos y una gran variedad de otros grupos polifuncionales de alto peso molecular. Fármacos: Antibióticos, sedantes esteroides, analgésicos
Bioquímica: Aminoácidos, proteínas, carbohidratos, lípidos
Productos de alimentación: Edulcorantes artificiales, antioxidantes, aflatoxinas, aditivos
Productos de la industria química: Aromáticos condensados, tensoactivos, propulsores, colorantes
Contaminantes: fenoles, Pesticidas, herbicidas, PCB
Química forense: Drogas, venenos, alcohol en sangre, narcóticos
Medicina clínica: Ácidos biliares, metabolitos de drogas, extractos de orina, estrógenos Separación y purificación de metabolitos
Separación y purificación de los metabolitos de las drogas procedentes de muestras de orina
Purificación y separación de enantiómeros
Purificación de compuestos naturales
Purificación y caracterización de enzimas y proteínas DEPÓSITOS PARA LA FASE MÓVIL TIPOS DE ELUCIÓN SISTEMAS DE BOMBEO SISTEMAS DE INYECCIÓN COLUMNAS TIPOS DE RELLENO DE COLUMNA DETECTORES CARACTERÍSTICAS DESEADAS
Sensibilidad adecuada
Estabilidad y reproducibilidad buenas
Respuesta lineal extendida a varios órdenes de magnitud
Tiempo de respuesta corto
Respuesta rápida e independiente del caudal
Manejo sencillo
Respuesta selectiva a algunos analitos TIPOS
Detector de absorbancia
Detector de fluorescencia
Detector de índice de refracción
Detector de dispersión de luz
Detector electroquímico
Detector por espectroscopia de masas SISTEMA PARA EL TRATAMIENTO DE DATOS
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