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Reacción en cadena de la polimerasa con transcriptasa invers

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by

Javiera Nash

on 20 August 2013

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Transcript of Reacción en cadena de la polimerasa con transcriptasa invers

RT-PCR
¿Qué es la Reacción en cadena de la polimerasa?
- Es una técnica de biología molecular que permite la amplificación “in Vitro” de una secuencia específica de ácido desoxirribonucleico
(DNA)
varios millones de veces, al ser delimitada por una par de iniciadores o primers que la flanquean.
Se utiliza para:
• Huella digital genética
• Test de Paternidad
• Detección de Enfermedades Hereditarias
• Comparación de la expresión génica
• Clonamiento de Genes
• Mutagénesis
• Análisis de DNA antiguo
• Genotipificación de polimorfismos
¿Que se necesita para realizar una PCR?
1.
Muestra
(templado o molde: DNA o cDNA)
2.
Iniciadores
(primers o cebadores)
3.
DNA polimerasa termoestable
(resistente a alta temperatura)
4. Mg+2
5.
Desoxinucleótidos trifosfatos
– dNTPs (dATP,dGTP,dCTP, dTTP)
6.
Buffers y sales
(KCl)
Reacción en cadena de la polimerasa con transcriptasa inversa
PCR
Reacción en cadena de la polimerasa con transcriptasa inversa (RT-PCR del inglés Reverse transcription polymerase chain reaction).

Esta es una variante de la reacción en cadena de polimerasa (PCR), que es utilizada para la amplificación de un fragmento de ADN.
- El copiado de la secuencia se logra a través de repetidos ciclos de diferentes
periodos y temperaturas
de incubación en presencia de una enzima DNA polimerasa termoestable. Así se obtienen sólo en un par de hora millones de copias de la secuencia deseada del DNA.

RT-PCR
*Desnaturalización: apertura de la doble cadena
*Alineamiento: aliniaje de primers.
*Extensión: generación de una nueva cadena.
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