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Biología molecular y citogenética

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by

Silvia Filloy

on 17 June 2015

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Transcript of Biología molecular y citogenética


Primero se usan técnicas de
cultivo celular
estándar con el fin de incrementar el número de células a las que queremos hacer el cariotipo.

Un
inhibidor
mitótico (colchicina, colcemida) se añade al cultivo para parar la división celular en la mitosis, lo cual nos dará una mayor producción de células mitóticas para los análisis.

Después, las células se
centrifugan
, y el medio y el inhibidor mitótico se eliminan y se sustituyen por una
solución hipotónica
.

Se añade
fijador Carnoy
.Tras el paso de las muestras por un horno o esperando unos días, están listas para el bandeo y el análisis.

La técnica del Bandeo cromosómico consiste en someter a los cromosomas a desnaturalizaciones, digestión enzimática o ambos, seguido de una tinción con Giemsa en el caso del
Bandeo G.

El análisis de cromosomas bandeados se hace al
microscopio

por un laboratorio clínico especializado en citogenética.

2.3 Equipamiento básico y materiales del laboratorio de citogenética y cultivo celular
2.2 Citogenética molecular
2.1 Citogenética convencional
3.1 Recepción de muestras y extracción de los ácidos nucleicos
Para extraer los ácidos nucleicos del material biológico es preciso provocar una lisis celular. Hay tres formas diferentes:
3.3 Detección del ADN
Para verificar que la PCR ha generado el fragmento de ADN previsto, se emplean técnicas de
electroforesis
3.2 Preparación de la PCR
5.1 Eliminación de residuos hospitalarios
Normas
de tipo general sobre diferentes aspectos aplicables a la mayoría de los laboratorios:
• El laboratorio debe disponer de los
equipos de protección individual (EPIs)
y de las instalaciones de emergencia o elementos de actuación (duchas, lavaojos, mantas ignífugas, extintores, etc.) adecuados a los riesgos existentes.
• El laboratorio debe mantenerse ordenado y en elevado

estado de limpieza
. Se debe recoger inmediatamente todos los vertidos que ocurran, por pequeños que sean.

No deben realizarse experiencias nuevas sin autorización
expresa del responsable del laboratorio ni poner en marcha nuevos aparatos e instalaciones sin conocer previamente su funcionamiento, características y requerimientos, tanto generales como de seguridad.
• Como norma higiénica básica, el personal debe

lavarse las manos al entrar y al salir
del laboratorio y siempre que haya habido contacto con algún producto químico.
• Debe llevar en todo momento la

bata

y ropa de trabajo abrochadas y los
cabellos recogidos
, evitando colgantes o mangas anchas que pudieran engancharse en los montajes y material del laboratorio. No se debe trabajar separado de la mesa, en la que
nunca han de depositarse objetos personales
.
• Está
prohibido fumar e ingerir alimentos
en el laboratorio. Para beber es preferible la utilización de fuentes de agua a emplear vasos y botellas.
• Se debe
evitar llevar lentes de contacto
, sobretodo si no se emplearan gafas de seguridad de manera obligatoria. Es preferible el uso de gafas de seguridad graduadas o que permitan llevar las gafas graduadas debajo de ellas.
• En las mesas de laboratorio o en el suelo,
no pueden depositarse prendas de vestir, apuntes, etc
., que pueden entorpecer el trabajo.
3. Organización y funciones del laboratorio de biología molecular
5. Seguridad en los laboratorios de citogenética y biología molecular. Eliminación de residuos
Biología molecular y citogenética
Presentado por:
Silvia Filloy Fernández

Marina Bargiela Ruíz

Sara Martínez Pulido

1.Introducción
INDICE
Caracterización de los procesos que se realizan en los laboratorios de biología molecular y citogenética
1.
Introducción.
2.
Organización y funciones del laboratorio de citogenética y cultivo celular.

2.1 Citogenética convencional
2.2 Citogenética molecular
2.3 Equipamiento básico y materiales del laboratorio de
citogenética y cultivo celular
3.
Organización y funciones del laboratorio de Biología molecular.

3.1 Recepción de muestras y extracción de los ácidos
nucleicos
3.2 Preparación de la PCR
3.3 Detección del ADN
3.4 Equipamiento básico y materiales del laboratorio de
Biología molecular
4.

Normas de manipulación del material estéril. Técnica aséptica.
5.
Seguridad en los laboratorios de citogenética y biología molecular. Eliminación de residuos.

5.1 Eliminación de residuos hospitalarios

La biología molecular es el estudio de la vida a un nivel molecular
Interacciones de los diferentes sistemas de la célula
ADN

ARN

Proteínas

Metabolismo
La Biología molecular roza otras ciencias que abordan temas similares
Genética

Citología

Bioquímica
2. Organización y funciones del laboratorio de citogenética y cultivo celular
La citogenética es la disciplina que tiene por objeto estudiar las
alteraciones que pueden producirse en los cromosomas
. Hoy en día, el análisis cromosómico puede realizarse con técnicas de:
Hay que tener en cuenta...
1.
Citogenética convencional
: Cariotipo de resolución estándar y cariotipo de alta resolución (AR).

2.
Citogenética molecular
: Hibridación in situ fluorescente (FISH), hibridación in situ fluorescente multicolor (M-FISH o SKY) y la hibridación genómica comparada (CGH).

Aquí encontramos la
FISH
(Multiplex-Fluorescence in Situ Hybridization)
En esta técnica primero se
desnaturaliza
la molécula de ADN después se
hibrida
con una sonda marcada con un fluoróforo.

La señal emitida será observada con un
microscopio de fluorescencia
Campana de flujo laminar
• Incubadora húmeda de CO2
• Baños termostatizados
Microscopio
Centrífugas
Otros materiales: fungible, almacenamiento
El
laboratorio de biología molecular
requiere de
tres espacios
fisicamente separados:

Uno de ellos el que utilizaremos como
zona de pretratamiento
en donde realizaremos la manipulación de las muestras y la extracción de ácidos nucleicos.

En segundo lugar una zona limpia y separada del resto del laboratorio en donde prepararemos y realizaremos la
amplificación
y las técnicas de
PCR
.

Un último lugar donde realizaremos las
electroforesis
y la lectura de geles.
4. Normas de manipulación del material estéril. Técnica aséptica


Rotura mecánica
(trituración, lisis hipotónica, etc.)

Tratamiento químico
(detergentes, agentes caotrópicos, reducción con tioles, etc.)

Digestión enzimática
(Proteinasa K, etc.)
Los métodos empleados para purificar los ácidos nucleicos son:



Extracción/precipitación
• Cromatografía
• Centrifugación
• Separación por afinidad
Seguridad en los laboratorios de citogenética y biología molecular
Para manipular el material estéril debemos acatar una serie de normas:


Lavarse las manos
antes de manipular el material estéril.
• Tomar el material con las
manos secas
.
• Verificar que el
envoltorio
se encuentre indemne y frío.
• Verificar la
limpieza de estantes
de almacenamiento.
• Verificar que cada artículo estéril tenga su etiqueta con la
fecha correcta de vencimiento
de esterilización.
• Almacenar el
material liviano
y delicado
sobre el material más resistente
o pesado.
• Almacenar el material estéril de acuerdo a la fecha de vencimiento, dejando
más próximo
el material cuya esterilidad
caduque primero
.
• Almacenar el material que tiene mayor
rotación
en un lugar más próximo. Envuelva en bolsa de nylon toda caja quirúrgica o paquete que tenga poca rotación.
• El funcionario de almacenamiento debe realizar diariamente
revisión de la fecha de vigencia
del material almacenado, retirando y reprocesando el material vencido.

Se emplean
ciclos de altas y bajas temperaturas
alternadas para separar las hebras de ADN recién formadas entre sí tras cada fase de replicación y, a continuación, dejar que las hebras de ADN vuelvan a unirse para poder duplicarlas nuevamente.
Hoy, todo el proceso de la PCR está automatizado mediante un aparato llamado
termociclador
Dependiendo de la matriz empleada, a su tamaño: típicamente se emplean la electroforesis en
gel de agarosa
, para fragmentos grandes; en
acrilamida
, para los más pequeños.
Cuando se ha completado la electroforesis entonces se pueden 'revelar' las moléculas mediante la adición de un
colorante
específico para hacerlas visibles. En el caso de los acidos nucleicos se utiliza
bromuro de etidio
.
3.4 Equipamiento básico y materiales del laboratorio de Biología molecular
Microcentrífugas o centrífugas
• Micropipetas
Termocicladores
Electroforesis
Agitadores
Campana
CLASE 1: Residuos sólidos urbanos


NO requieren precauciones especiales para su gestión.

Se incluyen en esta clase
papel, cartón, vidrio, madera, restos de comida, plásticos, latas, restos de jardinería y otros residuos similares a los domésticos
. Se eliminarán en bolsas de color negro.

-
PAPEL CONFIDENCIAL
: Se eliminará en cajas de cartón, una vez que la caja esté llena se cerrará señalándola con la palabra TRITURAR . Se depositarán documentos con datos personales o clínicos tanto de pacientes como de profesionales (ley de protección de datos de carácter personal).
-
PAPEL DE RECICLAJE
:Se eliminará en cajas de cartón con bolsa azul (no se pueden tirar como papel de reciclar ningún documento que lleve datos personales o clínicos de pacientes o profesionales).
-
CD´S
: Caja de cartón con bolsa de color naranja.
-
VIDRIO
: Se eliminará en contenedor negro.
-
CARTÓN
: Se depositará en el almacén intermedio de residuos de cada área (cuarto de basura).
-
ENVASES LIGEROS Y PLÁSTICOS
: Se eliminarán en contenedores de color marrón grisáceo con bolsa de color amarillo ;dentro de ese grupo están: botellas de agua, plásticos de envoltorios, latas, etc.

CLASE II. RESIDUOS SANITARIOS ASIMILABLES A URBANOS (RSAU)

Son aquellos generados como resultado de la
actividad sanitaria propiamente dicha
, procedentes de pacientes no infecciosos o de infecciosos

Incluyen residuos tales como material de
curas, goteros, sondas, guantes
y otros residuos quirúrgicos y, en general, cualquier material contaminado con sangre, secreciones, excreciones y otras características similares de pacientes no incluídos en la clase III.

Se eliminarán en
bolsas de color verde
que tendrán como soporte papelera o contenedores marrón agrisado.

CLASE III. RESIDUOS SANITARIOS ESPECIALES (RSE)
En
contenedores rígidos de color amarillo

Grupo 1. Infecciosos.
Residuos procedentes de pacientes afectados por fiebre tifoidea, tuberculosis, fiebre Q, disentería bacilar y amebiana, tularemia, encefalitis, ántrax, cólera, brucelosis, difteria, fiebres hemorrágicas virales, lepra, mieloidosis, mormo, peste, poliomielitis y rabia.

Grupo 2. Cultivos y reserva de agentes infecciosos y el material de desecho
en contacto con ellos.

Grupo 3. Filtros de diálisis de máquinas reservadas a pacientes de VIH /sida y de hepatitis B, C y otras de transmisión parental
. (En este momento todos los filtros de diálisis serán considerados dentro de este grupo).

Grupo 4. Líquidos corporales
, sangre y hemoderivados en forma líquida envasados en cantidades superiores a 100 ml.
• G
rupo 5. Residuos cortantes y punzantes utilizados en la actividad sanitaria
con independencia de su origen (Estos se eliminarán en botes de seguridad de color amarillo y luego se introducirán en los contenedores del mismo color).

Grupo 7. Residuos de animales infecciosos
o inoculados con agentes infecciosos de los relacionados con el grupo 1, así como el virus del sida y de las hepatitis B, C y otras de transmisión parental.

En
contenedores rígidos de color azul (señalados con el pictograma de biopeligroso)
• Grupo 6.
Residuos anatómicos humanos
de escasa entidad (lo que no se envíe a anatomía patológica).
• Grupo 8. Residuos procedentes de la actividad sanitaria de pacientes afectados por la
enfermedad de Creutzfed-Jacob
o de sus variantes .

En
contenedores rígidos de color azul (señalados con el pictograma citotóxico)
• Grupo 9.
Residuos de citostáticos
y todo el material utilizado en su preparación o en contacto con ellos.

Los contenedores de este grupo (AMARILLOS Y AZULES )
no se pueden vaciar, ni reciclar
. Una vez que están llenos se cierran herméticamente para su transporte, no pudiendo hacer ninguna manipulación de su contenido.






Líquidos
: se eliminarán en
garrafas de plástico
. En cada garrafa se eliminarán siguiendo la siguiente clasificación:


Disolventes halogenados
: disolventes orgánicos con contenido en cloro superior al 1%: clorometano, diclorometano, tetracloruro de carbono, etc. Estos productos se pueden mezclar entre sí.

Disolventes no halogenados
: disolventes orgánicos con contenido en cloro inferior al 1%: etanol, xilol. Formol, soluciones alcohólicas de colorantes. Estos productos no se pueden mezclar entre sí. Cada uno se desechará en una garrafa diferente, escribiendo el nombre del producto químico en ella

Aguas de laboratorio
: soluciones acuosas muy diluídas de productos orgánicos e inorgánicos. Se pueden mezclar entre sí.

Soluciones ácidas
: ácidos inorgánicos (ácido clorhídrico, ácido sulfúrico, ácido nítrico, etc). No se pueden mezclar entre sí. Cada uno se desechará en una garrafa diferente, escribiendo el nombre del producto químico en ella.

Productos químicos desechados (reactivos)
: aquellos que no están incluídos en en el resto de grupos. Estos no se pueden mezclar entre sí. Cada uno se desechará en una garrafa diferente, escribiendo el nombre del producto químico en ella.

Aceites minerales residuales


Sólidos.
Se eliminarán en el contenedor azul de ballesta. En cada contenedor se desecharán los productos químicos según la siguiente clasificación e indicaciones, colocando su etiqueta identificativa correspondiente:

Envases de plástico contaminados
(vacíos)

Envases de vidrio contaminados
(vacíos)

Envases metálicos contaminados
(vacíos)

Productos químicos desechados (reactivos)
: material y papel impregnado (guantes, etc), botes de reactivos caducados, etc.

Productos químicos desechados (bromuro de etidio)
: cualquier material que contenga restos de bromuro de etidio.

Parafina
: restos de parafina

CLASE IV. RESIDUOS DE NATURALEZA QUÍMICA
Gracias por vuestra atención!
Fin
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