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TINCION EN MICROORGANISMOS

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Jesus Emel Palacio Chaves

on 25 September 2012

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Transcript of TINCION EN MICROORGANISMOS

TINCIÓN EN MICROORGANISMOS Que es Tinción? Una tinción o coloración es una técnica auxiliar utilizada en microscopía para mejorar el contraste en la imagen vista al microscopio y es utilizado para estudiar microorganismos no vivos; en estas ticiones se observa morfoligia, estructura y agrupamiento de microorganismos.
En su mayor parte los microorganismos son demasiado pequeños para observarse a simple vista: protozoos, algas, hongos, bacterias y virus.
Estos microorganismos difieren en características tales como forma de nutrición, estructura, tamaño, composición entre otros aspectos; es por ello que se emplea el estudio microscópico el facilita notablemente la observación; principalmente en las bacterias se facilita al tratarlas con colorantes o tintes los cuales facilitan también la observación de ciertas estructuras celulares. Clasificación de Tinciones - CLASIFICACIÓN DE LAS TINCIONES
Tinciones simples
Tinciones diferenciales
Tinciones estructurales
- TINCIONES SIMPLES
Las tinciones simples son aquellas en las que se utilizan un solo
colorante y tienen como objetivo permitir la observación de la
morfología bacteriana. Existen dos clases, azul de metileno y verde
malaquita.
-TINCIONES DIFERENCIALES.
Son aquellas que permiten diferenciar a las bacterias
atendiendo a su afinidad por el colorante (se emplean dos tipos de
colorante), tenemos dos tipos GRAM y ZHIEL-NEELSEN.
-TINCIONES ESTUCTURALES.
Son aquellas que utilizan más de un colorante y sirven para
poner de manifiesto distintas estructuras bacterianas. Existen
distintos tipos: flagelos, esporas y cápsulas y corpúsculos
metacromáticos.
- GRAM.
Esta coloración fue desarrolladas, en 1983, por Christian Gram
y es la coloración diferencial mas utilizada en microbiología Por medio
de ella, se dividen a los microorganismos en dos grandes grupos,
grampositivos y gramnegativos.

- ZHIEL-NEELSEN
La tinción del Zhiel-Neelsen o de Bacilos Ácido Alcohol
Resistentes (BAAR) se utiliza para diferenciar las bacterias ácido
alcohol-resistentes de las que no lo son, esta diferenciación viene
dada por la existencia de un componente en la pared de la bacteria
(ácido teicoico, es un ácido graso de cadena larga) que permite
soportar la decoloración ácida de la tinción. Esta tinción requiere un
previo calentamiento del frotis, para que el colorante pueda atravesar
la pared de la bacteria y se quede fijado a los componentes de ella. Clasificación de tinciones diferenciales - TINCIONES DE FLAGELOS.
Para su observación, se debe de partir de cultivos jóvenes (6 y
12 horas). En la preparación del frotis, deben de emplearse
portaobjetos nuevos, limpios y tratados con una mezcla sulfocrómica 8
y perfectamente aclarados con agua destilada.
- TINCION DE ESPORAS
Las esporas son la forma de resistencia de las bacterias, tienen
forma esférica u oval. Al microscopio sin teñir, presentan una
estructura de granulo brillante.
- TINCION DE CAPSULAS
La cápsula es una capa mucosa, más o menos gruesa que
envuelve la pared celular o de algunas bacterias. Esta compuesta de
polisacáridos, mucopolisacáridos o
polipéptidos. A consecuencia de su elevado contenido en agua, se
tiñen débilmente por los colorantes.
- TINCION DE CORPUSCULOS METACROMÁTICOS.
Los corpúsculos metacromáticos son unas estructuras en cuyo
interior llevan fosfato, presentando la particularidad que son muy
afines por colorantes de tipo básico .Las tinciones empleadas son dos,
Albert y Loefller. Clasificacion de tinciones estructurales
Este tipo de tinciones se emplean para visualizar ciertas estructuras bacterianas afines con colorantes fluorescentes, es decir con aquellos colorantes estructuras (fluorocromos) que al excitarsecon luz ultravioleta excitan ciertas moléculas que al volver a su estado normal liberan ese estado de energia como luz visible. TINCIONES ESPECIALES Bacterias Escherichia coli (Gram negativas) vistas al microscopio tras ser teñidas con la tinción de Gram. Bacterias Clostridium perfringens (Gram positivas). Bacterias Gram positivas de Bacillus anthracis (bacilos morados) que producen una enfermedad llamada Carbunco, encontrados en una muestra liquido cerebroespinal. Si hubiera una especia de bacteria Gram negativa apareceria de color rosa. El resto son leucocitos atacando la infección. Una tinción Gram en la que observamos un mezclado de Staphylococcus aureus(Coco Gram positivo) y Escherichia coli(bacilo Gram negative) Tinción de Gram La tinción de Gram o coloración de Gram
es un tipo de tinción diferencial empleado en microbiología para la visualización de bacterias, sobre todo en muestras clínicas. Debe su nombre al bacteriólogo danés Christian Gram, que desarrolló la técnica en1884. Se utiliza tanto para poder referirse a la morfología celular bacteriana como para poder realizar una primera aproximación a la diferenciación bacteriana, considerándose Bacteria Gram positiva a las bacterias que se visualizan de color moradas y Bacteria Gram negativa a las que se visualizan de color rosa o rojo o grosella. Metodologia  Recoger muestras.

 Hacer el extendido en espiral.

 Dejar secar a temperatura ambiente.

 Fijar la muestra con metanol durante un minuto o al calor (flameado 3 veces aprox.)

 Agregar azul violeta (cristal violeta o violeta de genciana) y esperar 1 min. Todas las células gram positivas y gram negativas se tiñen de color azul-purpura.

 Enjuagar con agua.

 Agregar lugol y esperar entre 1 minuto.

 Enjuagar con agua.

 Agregar acetona y/o alcohol y esperar 4 segundos (parte critica de la coloracion)

 Enjuagar con agua.

 Tinción de contraste agregando safranina o fucsina básica y esperar 1-2 min Este tinte dejará de color rosado-rojizo las bacterias Gram negativas. Utilidades En el análisis de muestras clínicas suele ser un estudio fundamental por cumplir varias funciones:
Identificación preliminar de la bacteria causal de la infección.
Utilidad como control calidad del aislamiento bacteriano. Los morfotipos bacterianos identificados en la tinción de Gram se deben de corresponder con aislamientos bacterianos realizados en los cultivos. Si se observan mayor número de formas bacterianas que las aisladas hay que reconsiderar los medios de cultivos empleados así como la atmósfera de incubación.
A partir de la tinción de Gram pueden distinguirse varios morfotipos distintos: Los cocos son de forma esférica. Pueden aparecer aislados después de la división celular (Micrococos), aparecer por pares (Diplococos), formar cadenas (Estreptococos), o agruparse de manera irregular (Estafilococos).
Los bacilos poseen forma alargada. En general suelen agruparse en forma de cadena (Estreptobacilos) o en empalizada.
También pueden distinguirse los espirales, que se clasifican en espirilos si son de forma rígida o espiroquetas si son blandas y onduladas. Si por el contrario, poseen forma de "coma", o curvados, entonces se los designa vibrios.
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