Loading presentation...

Present Remotely

Send the link below via email or IM

Copy

Present to your audience

Start remote presentation

  • Invited audience members will follow you as you navigate and present
  • People invited to a presentation do not need a Prezi account
  • This link expires 10 minutes after you close the presentation
  • A maximum of 30 users can follow your presentation
  • Learn more about this feature in our knowledge base article

Do you really want to delete this prezi?

Neither you, nor the coeditors you shared it with will be able to recover it again.

DeleteCancel

Make your likes visible on Facebook?

Connect your Facebook account to Prezi and let your likes appear on your timeline.
You can change this under Settings & Account at any time.

No, thanks

Transformation in Pneumococco

AVERY, MACLEOD, MC CARTY
by

Whitney Walter

on 27 September 2013

Comments (0)

Please log in to add your comment.

Report abuse

Transcript of Transformation in Pneumococco

Antecedentes
Análisis del material
transformante

ESTUDIOS SOBRE LA NATURALEZA QUÍMICA DE LA SUSTANCIA QUE INDUCE LA TRANSFORMACIÓN DE TIPOS PNEUMOCOCOS
Inducción de la transformación por una fracción de ácido desoxirribonucleico aislado del Pneumococcus Tipo III
Noviembre 1, 1943
-La transformación en Pneumococcus es uno de los ejemplos más asombrosos de alteraciones heredables en la estructura celular que puede ser reproducido e inducido experimentalmente.

1928 - Griffith: Transformación in vivo.



Objetivos
Analizar detalladamente el fenómeno de la transformación de tipos específicos de Pneumococcus.
Transformar una variante no encapsulada R tipo II en una variante tipo III.
Aislar el principio activo a partir de extractos de bacterias e identificar su naturaleza química.
Caldo nutritivo:
Infusión de corazón bovino con neopeptona y pH inicial de 7.6 - 7.8

Suero:
líquido pleural o ascítico. Contiene una enzima capaz de destruir el principio transformante. Esta enzima es inactivada calentando el suero a 60° o 65° C.
Variante R36A
-Cepa R de Pneumococcus Tipo II no encapsulada derivada de una cepa virulenta S.
-Sin capacidad de producir infección
-R=colonia "rugosa" vs S=colonia "smooth"
- Propiedades anti-R presentes en el suero causan que las células R aglutinen y formen grumos que sedimentan al fondo del tubo dejando el sobrenadante translúcido.
- Cuando ocurre la transformación, las células S encapsuladas no son afectadas por los anticuerpos anti-R, por lo que no aglutinan y crecen difusamente en todo el medio
- La inspección visual permite entonces determinar si ocurrió o no transformación
- Igualmente se realizan cultivos en placa con ágar sangre para confirmar
MÉTODOS
- Material: cepa de Pneumococcus Tipo III - Principio activo / Enzima intracelular inactivada por calor.

- Extracción de las células muertas

- Deproteinización y remoción de los polisacáridos capsulares

- Fraccionamiento del material en alcohol etílico.
Todos los pasos fueron realizados a temperatura ambiente, menos los que necesitaban de altas temperaturas.

Altas temperaturas facilitan la extracción del principio activo; aunque su actividad se preserva mejor a bajas temperaturas
- Tests de Biuret y Millon (para la presencia de proteínas)= Negativos
- Reacción de la difenilamina de Dische (para detectar presencia de ácido desoxirribonucleico) = Positiva
- Test de Bial (para detectar ácido ribonucleico) = Positivo débil
Tests Químicos
- Se analizó el contenido de nitrógeno, fósforo, carbono e hidrógeno
- Proporción N-P: promedio 1.69 coincide con el calculado para un desoxirribonucleótido y descarta la presencia de impurezas proteicas
Análisis químicos
elementales
- Agregado de tripsina, quimotripsina o ribonucleasa no generó pérdida de actividad
- Análisis de actividades fosfatasas, esterasa y nucleodepolimerasa. Sólo la última inactivó el principio transformante
- Suero de perro y conejo destruyen la actividad transformante
Análisis Enzimático
La evidencia presentada apoya la creencia de que un ácido nucleico del tipo desoxirribosa es la unidad fundamental del principio de transformación de neumococos tipo III.
Análisis serológicos
En el curso de la purificación del principio activo se encontró que su actividad serológica en antisuero Tipo III fue disminuyendo, sin la correspondiente pérdida de la actividad transformante.
Estudios fisicoquímicos
- Análisis por ultracentrifugación: sustancia homogénea
- Electroforesis: Componente único de gran movilidad comparable con el de un ácido nucleico
- Curvas de absorción UV: máximos cercanos a 260 nm, característico de los ácidos nucleicos
Cuantificación de la actividad biológica
Discusión
Reflexiones
- Titulación a partir de una preparación que había sido purificada a bajas temperaturas
- Mínima cantidad necesaria de material activo para inducir la transformación: 0.003ug
El estudio trata con los resultados de un intento por determinar la naturaleza química de la sustancia que induce la transformación

Es sorprendente el hecho de que la sustancia que provoca la reacción y la sustancia capsular producida en respuesta a la misma, sean químicamente distintas: ácido nucleico vs polisacárido.


Los eventos bioquímicos subyacentes al fenómeno sugieren que el principio transformante interactúa con las células R, dando lugar a una serie de reacciones enzimáticas que culminan en la síntesis de la cápsula del tipo III. Estas nuevas características son transmitidas a la descendencia.
Los cambios inducidos son por tanto predecibles, tipo-específicos y heredables.
Los autores proponen que sería interesante estudiar la relación entre la tasa de transformación y la concentración del ácido nucleico; la proporción de células transformadas respecto de las no afectadas.
Sistema de reacción :
Avery, MacLeod & McCarty

Introducción
Parte experimental
-Titulación
-Métodos preparativos
-Análisis del material purificado
Discusión
Resumen
Conclusión

Esquema general
- S puede convertirse en R y normalmente este cambio es reversible si la célula R no está muy degradada.
- La respuesta entre diferentes variantes R a la transformación puede variar.
- Los neumococos poseen una enzima intracelular capaz de destruir la actividad del principio transformante.
Método de Titulación de la actividad transformante:
- Esterilización del extracto celular de Pneumococcus tipo III.
- Precipitado se redisuelve en solución salina
- Agregado de suero previamente calentado a 60° C.
- Extracto esterilizado es diluido seriadamente y se lo agrega al caldo
- Incubación a 37° C durante 18 - 24 horas.
Dos factores a tener en cuenta para obtener resultados consistentes y reproducibles:
1) Un cultivo R puede dar origen a algunas variantes incapaces de responder al estímulo transformante.

2) Los neumococos poseen una enzima que si es liberada destruye la actividad del principio transformante.
Si los sueros son calentados a 60 o 65°C, no ocurre pérdida de actividad transformante.
Interpretación desde un punto de vista genético:
1935- Murphy
Comparó el agente causante de tumores de las aves de corral con el principio de transformación de neumococo
Sugirió que estos dos grupos de agentes se denominan "mutágenos transmisibles", para diferenciarlos de los del grupo de virus.

1938: Stanley
Propuso que existe una analogía entre la actividad del agente transformante y la de un virus.
1941- Dobzhansky
La sustancia inductora ha sido comparada con un gen, y el antígeno capsular ha sido considerado como un producto génico.

Thank you for your attention!
Student
Full transcript