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ANTIBIÓTICOS CON HONGOS

AISLAMIENTO Y CARACTERIZACIÓN DE HONGOS
by

Angela Cardenas

on 14 December 2012

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Transcript of ANTIBIÓTICOS CON HONGOS

Aislamiento e identificación de Penicillium y Acremonium: Hongos filamentosos productores de antibióticos (Penicilinas y Cefalosporinas) INTRODUCCIÓN CEFALOSPORINAS Además de la industria alimenticia, la industria farmacéutica también se beneficia de los productos de los microorganismos
Antibiótico sustancia producido por un microorganismo capaz de afectar a otros microorganismos
Hongos filamentosos, como Penicillium del cual se obtiene la penicilina. y el Acremonium del cuel se sacan las cefalosporinas.
informe presenta aislamiento, caracterización y determinación para la producción de antibióticos. General:
•Aislar e identificar hongos filamentosos de los géneros Penicillium y Acremonium de una muestra de suelo, usados en la producción de antibióticos.
Específicos
•Realizar aislamiento de hongos filamentosos de la muestra de suelo recolectada.
•Caracterizar macroscópica y microscópicamente las colonias que han crecido.
•Determinar los géneros de los hongos filamentosos Penicillium y Acremonium
•Conservar las cepas aisladas e identificadas de los hongos filamentosos para su posterior utilización en la producción de antibióticos. OBJETIVOS PENICILINAS
La penicilina fue descrita por Fleming en 1929. Un grupo de investigación en Oxford, bajo la dirección de Florey y Chain, la aisló a partir de cultivos de Penicillum notatum en 1940.
producida por un hongo que pertenece al género Penicillum
mata las células bacterianas al inhibir su proceso de incorporación de nuevas unidades de peptidoglicano en la pared celular
Genero productor: Penicillium MARCO TEORICO hongo filamentoso mohos verdes o azules
El micelio del hongo crece sobre la superficie de frutas
reproducción asexual a partir de conidios
se forman en hifas especializadas llamadas conidióforos (ramificados y en forma de abanico)
conidióforos tabicados de pared lisa
colonias de crecimiento rápido, vellosas, aterciopeladas, verdosas con una corona radial ancha y blanca Presentan una esporulación abundante u olor aromático ácido.
Reino: Fungi;Phylum: Ascomycota;Clase: Euascomycecetes;Orden: Eurotiales;Familia: Trichomaceae;Genero: Penicillum;Especie: chrysogenum
puede producir algunos alcaloides como la rinquefortina C, meleagrina y chrisogina. Penicillium grupo de antibióticos que pertenecen a la familia de los b-lactámicos
La primera cefalosporina fue aislada de cepas del hongo Cephalosporium acremonium de una alcantarilla en Cerdeña en 1948 por el científico italiano Giuseppe Brotzu.
Las cefalosporinas se clasifican clásicamente en "generaciones", en base al espectro de actividad para gérmenes grampositivos y gramnegativos. Acremonium género de hongos anamórfico, que incluye especies cosmopolitas, frecuentemente aisladas de suelo y restos vegetales en descomposición.
colonias de crecimiento lento o moderado.
células conidiógenas monofialídicas, delgadas, cilíndricas y con un septo basal.
Los conidios son unicelulares y se disponen en cabezas mucosas o en cadenas
colonias son de color crema durazno claro, lisas por la producción de un delicado micelio aéreo corto.se ven variantes de las colonias blancas, rosadas y gris-amarillas
los conodioforos son largos delicados y casi como me pelos
Reino: Fungi
Phylum: Ascomycota
Orden: Hypocreales
Familia: Hypocreaceae
Género: Acremonium METODOLOGÍA Recolección, almacenamiento y procesamiento de muestras Ferraris, 2000 Medios de cultivo agar la dextrosa (PDA), agar Czapeck, agar Extracto del Malta, agar Extracto de levadura, OGYE y agar. El PDA se utilizo para llevar a cabo los procedimientos de aislamiento. Aislamiento: Liquido •Se tomaron 20g (peso seco) de suelo fresco y previamente cernido por un tamiz de 2mm.
•se adiciona a Erlenmeyer de 1000 ml con una solución de agua destilada estéril, peptona al 0.1%, (Díaz, 2000) Twen 80 al 0.5% y cloranfenicol (400 ppm) 0.005 mg/ml. (Vishnoi, et al, 2005).
•Luego dejar en incubación estática hasta observar el desarrollo de micelios en el liquido (1 semana)
•Realizar siembra por agotamiento para obtener cultivos axénicos de acuerdo a las diferentes características macroscópicas
•Incubar las Cajas de Petri a 28 ºC durante 5 a 6 días Observación macroscópica: observación directa Las características visibles son muy importantes debido a que, a simple vista, el aspecto de las colonias es a veces tan característico que le permite identificar enseguida el tipo de hongo. De las colonias de hongos aislados se observaron características tales como: Forma, aspecto del micelio (algodonoso, aterciopelado u otro), pigmentación, elevación, consistencia Observación microscópica: Técnica de la cinta Adherente-tinción Esta técnica es una de las más usadas, debido a que conserva la
yuxtaposición original de las esporas y segmentos
de hifas (Koneman, 1987). Además de permitir observar
las estructuras fúngicas casi sin alteración (Arenas, 1993). Identificación de hongos filamentosos por la técnica de Ridell (Microcultivo) •Cortar cuadros de PDA de una caja Petri de 1 cm de lado y 3 mm de espesor con un bisturí estéril y caliente

•Colocar el cuadro de PDA en un portaobjetos que está sobre una varilla de vidrio doblada en forma de “V” en una caja de Petri (previamente esterilizada).

•Tomar con el asa él inoculo del moho previamente seleccionado.
•Inocular por picadura en cada uno de los lados del cuadro de agar.
•Colocar sobre el agar un cubreobjeto y presionar ligeramente para que se adhiera al medio
•Adicionar 5 ml de glicerol al 10% en la caja Petri.
•Incubar la caja a 28° C durante 48 h.


•Adicionar 5 ml de formaldehído para inactivar el moho durante 15 minutos.
•Desprender con cuidado el cubreobjetos que se encuentra sobre el cuadro de agar y colocarlo sobre un portaobjetos que contenga una gota de azul de algodón, sellar la preparación con barniz de uñas transparente.
•Desprender con cuidado el cuadro de agar y colocar una gota de azul de algodón, colocar un cubreobjetos
•sobre el colorante y sellar la preparación. Observar las preparaciones a 10X y 40X.
Resultados Resultados Conclusiones •Con el trabajo teórico-practico realizado se lograron aislar e identificar cepas axénicas de dos géneros de hongos filamentosos que corresponden al Penicillium y Acremonium. Partiendo de sus características fenotípicas y microscópicas.
•Los géneros Penicillium y Acremonium fueron los de mayor incidencia en las muestras de suelo que se recolectaron para la experimentación.
•se logro el 100% de viabilidad en la conservación de las cepas de hongos filamentosas aisladas, para su posterior utilización.
Arias, E., & Piñeros, P. (. (2008). Aislamiento e identificación de hongos filamentosos de muestras de suelo de los paramos de Guasca y Cruz. Bogotá: Universidad Pontificia Javeriana.
Carrillo, L. (--). Penicillium. En L. Carrilo, Los hongos de los alimentos y forrajes (págs. 61-68).
Chambers, Henry F.; Deck Daniel H. (2009) [Primera edición: 1982]. «Capítulo 43: Lactámicos y otros antibióticos activos en la pared y al membrana celulares». escrito en Estados Unidos. En Bertram G Katzung; Susan B Masters; Anthony J Trevor. Farmacología básica y clínica. Lange médical book (11a edición edición).
Ingraham, J., & A, I. C. (1998). Introducción a la Microbiología. Barcelona : REVERTÉ.
Mateos, P. U. (s.f.). Darwin Usual. Recuperado el 11 de 12 de 2012, de http://darwin.usal.es/profesores/pfmg/sefin/MI/tema15MI.html
Meneses, M. (08 de 09 de 2006). División Fungi-Hongos. Recuperado el 11 de 12 de 2012, de http://www.emagister.com/curso-division-fungi-hongos/hongo-penicilina
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Sin autor ; Revista en internet: Salud, Noticias de Salud, Enfermedades, Remedios Caseros; tomado de http://yasalud.com/cefalosporinas/ BIBLOGRAFÍA ESQUEMA TIPICO DE PRODUCCIÓN DE PENICILINA PENICILINA G Y V
proceso aeróbico
La velocidad de aireación requerida esta entre 0.5 – 1.0 vvm dependiendo de la cepa, del bioreactor y del tipo del impulsor
. La temperatura optima esta entre 25 a 27ºC”.esquema típico de producción de penicilina se inicia cuando el inoculo usa esporas liofilizadas
Después de varias etapas de crecimiento está preparado el cultivo de producción
fase de crecimiento de cada 40 horas con un tiempo de oxígeno de 6 horas (mayor parte la masa celular)
llega la fase real después de la fase de crecimiento, en esta fase hay producción de penicilina
la producción puede extenderse de 120 a 160 horas

Formas de conservación Liofilización “La liofilización es un método para preservación a largo plazo (corredor, 2002). Según Kearney, 2005 el proceso de liofilización implica la remoción de agua en el estado congelado utilizando la sublimación.a partir de la aplicación de vacio con soluciones protectantes para evitar formaciones de cristales a nivel celular” (Arias & Piñeros, 2008). El metodo se hace a partir de tres componentes que son, mecanismo de congelamiento, fuente de vacio y tranpa para el vapor de agua. (Corredor, 2002) Intentado la producción de penicilina por fermentación continua, pero ha sido difícil debido a la inestabilidad en las cepas de producción
investigación para producir penicilina con células inmovilizadas.
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