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Rol de ICAM-1 epitelial alveolar en la inflamación pulmonar

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by

Amapola Vega

on 14 May 2016

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Transcript of Rol de ICAM-1 epitelial alveolar en la inflamación pulmonar

La
ICAM-1
(intercellular adhesion molecule-1) es una proteína de la superfamilia de las inmunoglobinas, que media la adherencia entre
leucocitos y el endotelio alveolar

Introducción
Antecedentes
· Evaluar,
in vitro
y
in vivo
, la expresión de la molécula de adhesión ICAM-1 en las AECs y valorar sus implicaciones funcionales

· Investigar los efectos de las células polimorfonucleadas (neutrófilos) en las células epiteliales respiratorias.

HIPÓTESIS
"
ICAM-1
de las
células epiteliales alveolares
participa en la respuesta inflamatoria de las lesiones pulmonares
inducidas por lipopolisacáridos
, interactuando principalmente con
neutrófilos
"
Métodos
· Northern blot: técnica detección RNA. Electroforesis en gel - Sonda molecular marcada+

·ELISA: detectar expresión proteica mediante anticuerpos + reacción colorimétrica

· Citotoxicidad: por conteo de LDH (lactato deshidrogenasa)

·Lavado BAL ·Tinción de fluorescencia
Materiales
Rol de ICAM-1 del epitelio alveolar en la inflamación pulmonar inducida por lipopolisacárido

El rol de la ICAM-1 en el endotelio alveolar está bastante estudiado...
¿Pero qué pasa con el epitelio?

Materiales y métodos
Role of alveolar epithelial ICAM-1 in lipopolysaccharide-induced lung inflammation

B. Beck-Schimmer, C. Madjdpour, S. Kneller, U. Ziegler, T. Pasch, R.P. Wüthrich, P.A.
Wardz, R.C. Schimmer
Andrea Celedón
Fabiola López
Valentina Núñez
Amapola Vega

Ayudante: Pía Burboa
La
AECs
(células
epiteliales
alveolares) juegan un importante rol en la
regulación inmune
del pulmón, función importante en la
inflamación

Estudios recientes han identificado ciertos requisitos que se cumplen en el compartimiento vascular del pulmón cuando existe daño pulmonar severo:

· Los leucocitos se acoplan a los sitos de inflamación aguda y desencadenan la respuesta inflamatoria

· Moléculas de adhesión, como la ICAM-1, juegan un rol central en este proceso, mediando la adherencia de leucocitos al endotelio e iniciando su extravasación
Se sabe que las PMNs (células polimorfonucleadas), como los
neutrófilos
, pueden dañar la integridad de las células endoteliales e incluso matarlas.
Objetivos del estudio
- Ratas “Long-Evans” macho, libres de patógenos; sus AECs (células epiteliales alveolares) y RNA de
éstas.

- LPS (lipopolisacarido, Escherichia coli)
y citoquinas (TNF-a y INF-y).

- Neutrófilos de sangre humana.

- Macrófagos alveolares de rata.
Resultados
· Se demuestra regulación positiva de proteína de ICAM-1 y de mRNA ICAM-1 después de la estimulación de cualquiera de estos tres agonistas.
· LPS demostró causar la mayor regulación positiva.
· Tiempo de mayor expresión ICAM-1 : 6h
(up-regulation) / ELISA
· Tiempo de mayor expresión ICAM-1 mRNA : 2h
(up-regulation) /Northern blot
Neutrófilos
Macrófagos
· Rol funcional de la ICAM-1 en adhesión de neutrófilos y macrófagos en AECs

· Sólo el 40% de la adherencia de neutrófilos pudo ser bloqueada por anti-ICAM-1

· Adherencia de neutrófilos a AECs estimuladas con LPS es mayor que en los macrófagos.
· AECs estimulados con LPS mostraron aumento en la citotoxicidad, implicando que la adherencia de neutrófilos induce muerte celular en AECs.
· Instilación intra-traqueal de el anticuerpoAnti-ICAM-1 + LPS
· Se disminuye el reclutamiento de neutrófilos y, por tanto, también se disminuye la liberación de la MPO (mieloperoxidasa), enzima liberada por neutrófilos que sirve como indicador de actividad tóxica.

Bloqueo de vías respiratorias
por accion de la ICAM-1
Conclusiones
El estudio demuestra que ICAM-1 es regulada
positivamente (upregulated) en el epitelio de células alveolares in vitro e in vivo por estimulación LPS.

La adherencia mediada por ICAM-1 entre neutrófilos y
AECs al ser estimuladas por LPS provoca daño epitelial
alveolar con aumento de citotoxicidad.

El estudio demuestra que el compartimiento de la vía aérea baja juega un rol importante en la inflamación inducida por LPS.

Se requiere profundizar las investigaciones para
proporcionar mayor información del fenómeno clínico.
· Marca de ICAM-1 presente en endotelio pero cuando existe activación de la respuesta inflamatoria por LPS, el ICAM-1 se expresa en otros lugares. Esto es indicativo indirecto que puede ser en AECs.
· Se descarta expresión de ICAM-1 en AECs tipo II, pero se podría aseverar que quizás sea en AECs tipo I.
Control
LPS
Control
LPS
Upregulation de ICAM-1 y su ARNm en AECs estimuladas
Curso de tiempo de upregulation de ICAM-1 y su ARNm en AECs estimuladas
Adherencia de neutrófilos y macrófagos alveolares a AECs
Daño causado por neutrófilos a AECs
Upregulation
in vivo
de ICAM-1 (de rata) en pulmones después de estimulación con LPS
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