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Extracción de ADN

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Lina María González

on 4 December 2012

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Transcript of Extracción de ADN

EXTRACCIÓN DE ADN Lina María González Avellaneda
Yuly Katherin Herrera Zamudio Universidad Distrital Francisco José de Caldas

Facultad de Ciencias y Educación

Licenciatura en Biología

2012 Dirigido por: Francisco Becerra Objetivos Lograr el manejo del método de extracción de ADN: salting-out
Observar el ADN de la bacteria Burkholderia Glumae ADN El ADN es «la molécula de la vida» Lleva codificada la información genética característica de los diferentes seres vivos Controla la transmisión de .la información genética Coordina la compleja red de interacciones del funcionamiento celular y tisular Controla también su propia duplicación, reparación y autorregulación Funciones Toda la información genética esencial para la
vida de la célula bacteriana, está contenida en
una única molécula de ADN de doble cadena,
circular y covalentemente cerrado, a la que
se refiere como “cromosoma bacteriano”.

Muchas bacterias, poseen además
ADN extra cromosómico, también circular
cerrado, denominado ADN plasmídico, por estar
contenido en estructuras llamadas “plásmidos” ADN en Bacterias En una estructura cerrada aparece superenrollamiento cuando los extremos se unen tras haberse enroscado la cadena sobre si misma. Como la doble hélice ya consiste en un enrollamiento de dos cadenas, el superenrollamiento de la doble hélice puede ser: negativo: en sentido opuesto al de las cadenas, aflojándolas; positivo: en el mismo sentido, apretándolas. In vivo se da fundamentalmente el negativo. El superenrollamiento negativo desestabiliza la doble hélice en 9 kcal mol-1 vuelta-1 y puede convertirse en separación de las dos cadenas, lo que podría ayudar a la replicación o a la transcripción. Superenrollamiento. ESTRUCTURA
DEL
ADN Materiales & Métodos Laboratorio Biología 1
UDFJC Burkholderia glumae REACTIVOS Lisis Celular Buffer
0,75g de Cloruro de Amonio
0,21 de TRIS base (hidroximetil) Buffer Lisis 2
0.060 g de TRIS BASE
1,17g de Cloruro de Sodio
200 uL de EDTA
2,5 ml de SDS (Sodio, dodecil, sulfato) 20% Precipitación de proteínas
para 25 ml
9,635 de Acetato de Amonio Precipitación del ADN
25ml de Alcohol Isoamilico
al máximo porcentaje
98,5% Asa Bacteriológica Micropipeta Tubos de Eppendorf Centrifugadora Tubos de eppendorf Vórtex Extracción de DNA por Salting-Out Realizar un raspado
de las colonias bacterianas con un asa Colocar la muestra del raspado en un tubo de eppendorf y agregar a la 900Ml de LISIS I . Agitar . Incubar bajo el brazo durante 10 min. Centrifugar por 15 min a 12.000 rev/min 1 2 3 4 Después de vaciar el sobrenadante, agregar 300Ml de Lisis 2 dando vortex por 5 minutos 5 Centrifugar 15 min. a 12.000 rev/min y transferir el nuevo sobrenadante a un nuevo tubo de eppendorf 6 Luego agregar 300 Ml de isopropanol. Agitar nuevamente por inmersión 7 Llevar a la nevera a 4 grados C° y después de 3 dias observación de la cadena de ADN CONCLUSIONES ¡GRACIAS! Agradecimiento especial a los docentes Francisco Becerra y Fanny Campo 04/12/12 El Salting-out es uno de los métodos de extracción de ADN mas utilizados por su fácil implementación, baja toxicidad de los reactivos y permite la visualización del ADN.
Para la preservación de la muestra es necesario utilizar conservantes, ya que los cambios de temperatura pueden ocasionar la pérdida de la visibilidad del ADN extraído.
Los pasos básicos que se dieron en la extracción de ADN de la Bacteria Burkholderia glumae fueron, a saber: rompimiento de la pared celular, disrupción celular (ruptura de la bicapa lipídica de la membrana celular), eliminación de las proteínas (que constituyen los principales contaminantes del extracto), concentración del DNA (por precipitación con alcoholes).
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