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Extraccion de lecitina de yema de huevo e identificación por

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by

Macarena Mechlovits

on 8 November 2016

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Transcript of Extraccion de lecitina de yema de huevo e identificación por

Extracción de lecitina de yema de huevo
e identificación por CCF.
Virginia Bengoa
Valeria Zerpa
Macarena Mechlovits
Prof. Marta Lindner, Mariela Musetti,
Guillermo Pereyra
Química Básica e Industrial
Noviembre de 2016
Huevo
Culturalmente, los huevos de las aves constituyen un alimento habitual en la alimentación de los humanos. Se presentan protegidos por una cáscara y son ricos en proteínas (principalmente albúmina, que es la clara o parte blanca del huevo) y lípidos.
Los huevos blancos y los huevos morenos únicamente se diferencian por el color de su cáscara, en función de la raza de la gallina que lo ha puesto, ya que su contenido nutricional es el mismo.
La yema viene a aportar la tercera parte del peso total del huevo y su función biológica es la de aportar nutrientes y calorías, así como la vitamina A, tiamina y hierro necesarios para la nutrición del pollo que crecerá en su interior.
Huevos utilizados
Lecitina
La lecitina es una mezcla de fosfolípidos que en mayor parte se encuentra compuesto por fosfatidilcolina y en menor cantidad por fosfatidiletanolamina. Es un sólido graso color blanco que en exposición del aire o presencia de la luz solar se torna color amarillento, terminando en un color marrón debido a que se oxida. Es extremadamente higroscópica y se puede obtener en forma cristalina a muy bajas temperaturas. Es insoluble en acetona pero se disuelve en medio acuoso si en el hay presentes sales biliares.
Fosfolípidos
Los fosfolípidos son un gran grupo de biomoléculas incluidas dentro de los lípidos. Este subgrupo de lípidos son muy importantes debido a que por su carácter anfipático componen la bicapa lipídica de la membrana celular. Los fosfolípidos, y principalmente la fosfatidilcolina de la bilis, solubilizan el colesterol, una disminución en la producción de este fosfolípido y de su secreción a la bilis provoca la formación de cálculos biliares de colesterol y pigmentos biliares.
Fosfatidilcolina
La fosfatidilcolina es uno de los principales constituyentes de las bicapas lipídicas de las membranas celulares. Además es el componente de mayor relevancia en la lecitina, y en algunos contextos, los términos se usan como sinónimos. Sin embargo, el extracto de lecitina está constituido por una mezcla de fosfatidilcolina y otros compuestos.
Aunque teóricamente el grupo fosfatidilcolina podría estar unido también al carbono beta del glicerol, se ha demostrado que en la naturaleza las lecitinas son de la variedad alfa. Además, como el C2 del glicerol es asimétrico, hay dos isómeros posibles y, no obstante, las lecitinas halladas en la naturaleza parecen ser de la variedad L.
La fosfatidilcolina contiene mayoritariamente ácido palmítico o ácido esteárico en la posición del C1 y principalmente el ácido graso insaturado ácido oleico en la posición del C2.
La posibilidad de obtener distintas lecitinas es muy amplia debido a que los ácidos grasos que pueden unirse a los C1 y C2 son muchos.
Fosfatidiletanolamina
Está compuesta por un glicerol esterificado en los hidroxilos 1 y 2 por dos ácidos grasos, y en el hidroxilo 3 con un grupo fosfato que, a su vez, se esterifica con el aminoalcohol etanolamina, un derivado del etanol.

La fosfatidiletanolamina posee mayoritariamente ácido palmítico, ácido esteárico u ácido oleico en posición 1 y un ácido graso poliinsaturado de cadena larga, como el ácido araquidónico, en posición 2. Como el C2 del glicerol es asimétrico, hay dos isómeros posibles y, no obstante, las cefalinas halladas en la naturaleza son del tipo L. Es, junto con la fosfatidilcolina, uno de los fosfolípidos más frecuentes en la bicapa lipídica de las membranas celulares.
Objetivos
Extraer la lecitina de una muestra de yema de huevo y purificarla.
Determinar el índice de acidez y el de saponificación del sólido extraído.
Realizar el reconocimiento mediante una cromatografía en capa fina.
Extracción de lecitina
Para separar los lípidos de la yema de las proteínas y otros nutrientes, se le agregó a las yemas una mezcla de etanol-éter en proporción 2:1 y se agitó.
Se filtró el precipitado (proteínas desnaturalizadas por etanol).
El filtrado fue recogido en un vaso de bohemia y se le agregó acetona fría. Como la fosfatidilcolina, la fosfatidiletanolamina y la esfingomielina son insolubles en acetona, precipitan.
Se filtró el precipitado. El sólido fue redisuelto en éter y precipitado con acetona fría para purificar.
El precipitado fue filtrado de nuevo.
El sólido fue disuelto en agua, colocado en tubos de centrífuga y centrifugado para purificar.

Índice de acidez

Se masó 0.5000 g de lecitina purificada y
se tituló con KOH patrón secundario
Índice de saponificación
Se masó 0.5000 g de lecitina purificada y se le agregó 20 mL de KOH hidroalcohóico.
Se llevó a reflujo por 30 minutos y se tituló el exceso de KOH con HCl patrón secundario
Cromatografía en capa fina
En una cámara para cromatografía de vidrio se colocó la fase móvil y se tapó para que la cámara se saturase con los vapores de la fase móvil
En una placa de CCF de sílica gel se trazó con un lápiz una línea a 10 mm del borde inferior.
Se colocó en dos puntos sobre la línea trazada tres gotas de solución de lecitina extraída y tres gotas de solución de lecitina de soja comercial respectivamente, y se colocó la placa dentro de la cámara cromatográfica.
Se dejó correr el solvente por la placa hasta 2 cm antes del borde, y cuando finalizó el desarrollo se colocó la placa en un desecador.
Cuando la placa se secó se le realizó el revelado aplicándole a la placa Cu2SO4 al 3% en H3PO4 al 10% y se colocó en estufa a 110°C por 4 minutos.
Resultados
Índice de acidez: (3,88 ± 0,07) % m/m de ácido oléico
Índice de saponificación: (196 ± 2) mg KOH/g triglicérido
Conclusiones
Cromatografía
La lecitina es una mezcla de fosfolipidos y debido a esto su índice de saponificación esta comprendido entre 180 – 200 mg KOH / g de muestra. El índice de acidez de la lecitina soja pura es 4 % m/m de ácido oléico.
El resultado obtenido de la realización del índice de saponificación es de (196 ± 2) mg KOH/g muestra. El resultado obtenido del índice de acidez es de (3,88 ± 0,07) % m/m de ácido oleico.
La constante RF de la lecitina extraída fue de 0,77159 y la de la lecitina de soja utilizada como patrón fue de 0,77272.
Lecitina extraída
Lecitina patrón
Índice de acidez
R-COOH + KOH R-COOK + H2O
Índice de saponificación
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