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DNA fingerprint

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by

sofia sa

on 19 February 2014

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Transcript of DNA fingerprint

Preparação do DNA
Antes de se começar a realizar a técnica é necessário "preparar" o DNA segundo a sua finalidade.
Técnicas Padrão
de
DNA Fingerprint
DNA fingerprint
o que é?
A impressão genética é uma técnica empregada na identificação de indivíduos com base nos seus respectivos perfis de DNA.
Aplicações do DNA Fingerprint:
Investigações Forenses
Testes de Paternidade e Maternidade
Pesquisa de doenças hereditárias
Estudo da evolução das populações e das espécies
DNA fingerprint
Fingerprinting
O DNA é cortado em vários fragmentos através de enzimas de restrição segundo as suas sequências.
Quimicamente, o DNA de toda a gente é igual, mas o que os distingue é a sequência dos seus pares de bases.
Existem imensos pares de bases, por isso foi desenvolvida uma técnica rápida para este fim.
AmpFLP
STR
RFLP
mtDNA
AmpFLP
Utiliza PCR para replicar o DNA
Análise das STR's
São alelos muito pequenos e específicos numa repetição em série de número variável (VNTR)
RFLP

Procedimento:
Hidrólise do DNA com enzimas de restrição;
Separação por eletroforese.
mtDNA
Procedimento:
Amplificação do DNA mitocondrial, usando PCR;
Sequenciação ;
Comparação com outra amostra de mtDNA de outro indivíduo.
Procedimento:
Enzima de restrição
Amplificação e separação dos fragmentos
As bandas podem ser visualizadas através da coloração, por nitrato de prata, do gel
Vantagens:

É barata
Pode ser automatizada
Todos os seres humanos possuem algo que os distingue entre si, o DNA.
Procedimento:
PCR
Uma variação da análise de STR é a Y-STR. Somente STRs encontrados no cromossoma Y são analisadas.
Vantagens:

Permite mais precisão que a técnica RFLP porque o pequeno tamanho torna mais fácil separá-las e distingui-las
Pode ser aplicado ao DNA cromossómico ou plasmídico
Baseia-se no princípio que a sequência nucleotídica da molécula de DNA é exclusiva de cada indivíduo.
Permite estabelecer relações de parentesco entre indivíduos
Permite relizar testes de paternidade
RFLP e Southern Blotting
VNTR
"Repetições em série de número variável".
Através de enzimas de restrição o DNA vai ser "cortado" segundo as suas sequências de repetição que inicialmente são de 10 pb mas passam para 6 pb.
RFLP
Polimorfismo de fragmentos de restrição.
Estes vão variar entre os indivíduos devido à variação do numero de repetições num VNTR.
Para adquirir RFLP's:

Extração do DNA (PCR)
Endonucleases de Restrição cortam segundo repetições específicas
Eletroforese
Southern Blotting:
Fragmentos passam para uma membrana de nitroceluose
Passagem dos fragmentos com sondas a híbridos
Auto-radiografia para a visualização
STR e PCR
Sofia Sá 8956
Telma Martins 9026

12º BT1
PCR: é um método de amplificação de DNA sem o uso de um organismo vivo
Uma repetição em série (“tandem repeat”) é uma sequência curta do DNA que é repetido num locus cromossómico específico.
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