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AGLUTINACION Y FLOCULACION

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Emanuel Barrios

on 27 September 2016

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AGLUTINACÓN
Reacción antígeno anticuerpo que da lugar a la formación de
"grumos"
que se puede observar macroscopicamente o microscopicamente.

Permite la detección de antígenos y anticuerpos.

Los principios que la rigen son los mismos que para precipitación.
INDIRECTAS
PCR
FLOCULACIÓN
No se forman precipitados hasta que la cantidad de antígeno añadido no exceda ciertos límites.
BIBLIOGRAFÍA
DIRECTAS
Grupo sanguineo y factor Rh.
Test de Coombs directo.
AGLUTINACIóN Y FLOCULACIóN
Aquino Barrios, Emanuel.
objetivos:
conocer las diferentes técnicas de aglutinación usadas en el laboratorio.
adquirir habilidad y destrezas en las técnicas de aglutinación.
conocer la utilidad de esta técnica en el laboratorio
interpretar los resultados de las pruebas en los diferentes casos clínicos
En vez de ver precipitado se observa aglutinación (grumos).
Factores que afectan reacción Ag-Ac
Afinidad
Avidez
Radio del antígeno
forma física del antígeno.
carga de las partículas
pH
viscosidad
temperatura y tiempo
agitación
Fases de la aglutinación
antígeno
Contacto Ag-Ac sobre la superficie de la célula o particula
Agregacion y visualización
¿Puede ocurrir la priemer fase y la segunda no?
¿Por qué?
Sí, esto se podría dar, debido a anticuerpos incompletos (subaglutinantes) que podrían dar falsos negativos.
REACCIÓN CRUZADA
La habilidad de un Ac de combinarse con más de un determinante antigénico.
La habilidad de una población de Ac para reaccionar con más de un antígeno.
El análisis puede ser cualitativo o semicuantitativo, aunque algunos kits comerciales, a partir del límite de detección que se incluye en el inserto, permiten realizar una estimación cuantitativa de la concentración.
Ventajas
•Poco costosas.
•Requieren poco material.
•Rápidas.
CLASIFICACIÓN
el antígeno por sí mismo es particulado
Los antígenos solubles son unidos a glóbulos rojos o partículas inertes que actúan como soporte.
Ambas pueden realizarse en:
Placas: dan la reaccón más rápido.
Microplacas: más lentas
Tubos: lentos.
Antígenos de Salmonella y Brucella
Procedimiento
•Limpiar la placa de vidrio,
•1 gota de sangre entera,
•1 gota de antisuero,
•Rotar lentamente,
•Observar aglutinación.
Aglutinación directa en microbiología
Test de Coombs directo
Utilidades:
AHAI.
Enfermedad hemolítica del recién nacido.
Anemia hemolítica inducida por fármaco.
Reacciones transfuncionales.
ISOHEMAGLUTININAS
Son anticuerpos naturales dirigidos contra los polisacáridos del glóbulo rojo.
Están presentes normalmente en el primer año de vida y sus títulos son superiores a 1/8; su determinación tiene importancia en las inmunodeficiencias de anticuerpos y también es importante en los casos de trasplante de MO.

FACTOR REUMATOIDEO
DIFERENTES TIPOS DE AGLUTINACION INDIRECTA
EN PLACAS
Antígeno
: particulas de látex-poliestireno sensibilizadas con anticuerpos anti-PCR
Muestra
: suero, en caso de ser lipémico o estar contaminado puede dar falso positivo.
Valores de referencia
: hasta 6 mg/dl
ASO
ASO-látex
Antígeno
: suspensión de partículas de látex-poliestireno recubiertas con estreptolisina O.
Muestra
: suero.
Valores de referencia
: 200 UI/ml
ARTRITEST
Muestra: suero.
Hemólisis y ciertas proteinas pueden dar resultados erroneos.
Los anticuerpos de tipo IgM se detecta en presencia de gamma globulina humana adsorbida en un soporte inherte de látex-poliestireno
MICROPLACAS
HEMAGLUTINACION INDIRECTA
TOXOTEST-HAI
Antígeno
: Liofilizado de GR de carnero sensibilizados con Antigenos citoplasmático y de superficie de T. gondii.
GR no sensibilizados: Suspensión al 1% de GR de
carnero no sensibilizado para absorción de heterofilia.
Buffer: PH 7,5 solución fisiológica con fosfato
Solución proteica: albúmina bovina.
HETEROFILIA
Autoanticuerpos de isotipo IgM que reaccionan con baja afinidad con múltiples antígenos, generando de esta manera reacciones inespecífica, y a su vez pueden reaccionar contra sus propias inmunoglobulinas.

Producen falsos + y además se presentan en la mononucleosis infecciosa.
Los flóculos se agregan y sedimentan en un rango estrecho de Ag/Ac.
Precipitación vs Floculación
PRUEBAS NO TREPONÉMICAS


Antígeno
: Solución alcohólica de cardiolipina, colesterol y lecitina.

Detectan
: “Reaginas”IgG e IgM anti antígeno lipídico. Estos son inespecíficos que aparecen 1 a 3 días de una lesion primaria

Método
: Cualitativo (screening) y semicuantitativo (seguimiento).
•VDRL: requiere inactivación del suero a 56°C.



•USR: sin inactivación del suero, utiliza cloruro de colina.
CAUSAS DE FALSOS RESULTADOS
Falsos positivos: Hepatitis, brucelosis, lepra, asma, malaria, tuberculosis, diabetes, LES, síndrome antifosfolipídico, etc.
Falso negativos: efecto prozona, período ventana y sífiilis primaria temprana.
Correlacionar con datos clínicos.
PROCEDIMIENTO
1 gota del suero + 1 gota del antígeno.
Agitar horizontalmente la placa a 180 rpm durante 4minutos.
Observar al microscopio en 10X.
MARGNI RA. Inmunología e Inmunoquímica. Fundamentos. 5º Edición. Editorial Médica Panamericana. 1996. ISBN 8479033177.


•ROITT I, BROSTOFF J, Male D. Inmunología. 5º Edición. Español. Editorial Harcourt. 2000. ISBN 8481744972.


•ROITT IM, DELVES PJ. Inmunología. Fundamentos. 10º Edición. Editorial Médica Panamericana. 2003. ISBN 950061869-9 8479038144.


•ROSE, CONWAY DE MACARIO, FAHEY, FRIEDMAN AND PENN. Manual of Clinical Laboratory Immunology. Fourth Edition. 1992. American Society for Microbiology.


•Stites D P. Inmunología Básica y Clínica. 10º Edición. Editorial El Manual Moderno. 2003. ISBN 9684269978.


•SERRA J, VELASCO J, GODOY P, MENDOZA J. ¿Puede sustituir la prueba de Brucellacapt a la prueba de Coombs en el diagnóstico de la brucelosis humana?Enferm Infecc Microbiol Clin 2001; 19: 202-205.


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GRACIAS
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