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Peroxidasas
Clasificación
EC 1.11.1.7
Hemoproteínas - Fe(III)
Reducen peróxido de hidrógeno mientras oxidan un segundo sustrato
Sustratos
Fenoles
Aminas aromáticas
Hidroxiquinonas
Aminas hidroxiquinoides
Determinación
de actividad
Decremento [Peróxido de hidrógeno]
Formación del compuesto oxidado
Aplicaciones
Tratamiento de aguas residuales (compuestos fenólicos)
Decoloración de desechos
Remoción de peróxido de alimentos y afluentes industriales
Donador fenólico:peróxido de hidrógeno oxidoreductasa
Especificidad baja donador de H
acetilo
metilo
etilhidroperóxido
1U: [enzima] para formación de 1 micromolar de tetraguayacol per minuto
Detección de sangre oculta
Tinción de lionfocitos
HRP enzima conjugada en Ac
Diagnóstico
Industriales
Green Chem.,2014,16,303–311
Purificación de Proteínas
Actividad Enzimática
Extracción
Objetivo: Liberar las proteínas a la solución
Algunas enzimas pueden estar presentes en organelos
Aislamiento de organelos
Centrifugación diferencial
Bajo rendimiento
Disrupción completa de tejidos
Clarificación
Material cargado: Proteínas, fofolípidos, ácidos nucléicos
Fuerza iónica citoplasma 0.15 - 0.2 M (Proteínas solubles) agua baja a 0.05M o menos
Isoosmóticos - Aislamiento organelos:
sacarosa, manitol, sorbitol
Distribución de proteínas: fracción de partículas (constituyentes celulares) y soluble
Sedimento de fragmentos de membranas y organelos a 100,000g
Ultrafiltración membranas 0.2 micrómetros
Diálisis
Membrana semipermeable
Remoción de contaminantes de bajo peso molecular
Intercambio de buffer hasta alcanzar el equilibrio
Efecto Donnan
Cromatografía
Proteína disuelta: fase móvil
Resina: Fase estacionaria
absorbe componentes
Fuerza de interacción - tiempo de retención
Sin sensibilidad pH cercano pI
Metodología
Buffers
Fosfatos 20 - 50 mM
0.1 M Tris-HCl pH 7 - 7.5
0.1 M KCl pH 7.5
La existencia de proteínas en sólo uno de los compartimentos provoca la retención permanente de iones difusibles en ese lado de la membrana, lo que incrementa el efecto osmótico.
tipo grupo funcional
propiedades físicas
carga
peso molecular
hidrofobicidad
afinidad de ligandos
Espectros de Proteínas
1 mg/ml inserción en (
A
)
0.5 microgramos/ml
(I) IgG, (B) BSA, (G) Gelatina
(
B
) DNA/RNA 10 microgramos/ml
(A) Espectro UV ribonucleasa T1
(B) Diferencia entre proteína desnaturalizada y nativa, Exposición de residuos Y (287 nm) hombros 290 - 300 nm W
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