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Columna Winogradsky

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by

Reinaldo Gonzalez

on 11 May 2011

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Transcript of Columna Winogradsky

Estudios intrínsecos para la determinación y observación de interacciones microbianas realizados en la columna de Winogradsky “Wassersäule” en un lapso de 7 semanas Reinaldo González Suárez
802-06-3300
Jonathan Padua Sepúlveda
846-07-5725
Abner Rodríguez Arbelo
840-06-7414 Objetivos Conocer el medio de preparación de una columna Winogradsky.
Observar los comportamientos e interacciones de los microorganismos en la columna de agua.
Conocer las interacciones microbianas en las diferentes zonas de la columna.
Brindar resultados obtenidos de la columna, durante un periodo de 7 semanas. Introducción La columna Winogradsky es utilizada para observar el comportamiento de las tres zonas básicas: aeróbicas, microaerofílicas y anaeróbicas.
Dentro de la zona aeróbica se encuentran una gran variedad de microorganismos.
Por consiguiente, en la zona microaerofílica se observarán microorganismos con capacidades aeróbicas.
Por último, en la zona anaeróbica se le conoce como la zona negra, debido a la actividad anaeróbica de la misma.
Por medio de estas coloraciones, se puede predecir de forma exitosa la localización de los microorganismos dentro de la columna. Esto nos permite obtener un mejor y amplio conocimiento en base a los microorganismos a estudiar o examinar.
La columna también es utilizada para crear un ambiente “similar” al hábitat original. Semanas Semana #0 Para la preparación de la columna Winogradsky, se utilizó una probeta de 500mL, lodo y agua de manatial y otros sistemas acuáticos, una fuente de celulosa, fuente de CaCO3 y una fuente de CaSO4 y K2PO4 (fosfato de dipotasio).
Luego, se procedió a realizar una mezcla del lodo con papel, como fuente de celulosa, en pedazos y fue suplementada con pedazos de cascarón de huevo como fuente de CaCO3.
A continuación, se le añadió la yema de huevo como fuente de CaSO4 y fosfato de dipotasio, hasta formar una pasta la cual sería el lecho de la columna.
Luego se añadió fango a 1/3 parte del volumen del tubo. Por otro lado, se procedió a colocar el agua en las 2/3 partes del tubo.
Ésta provino de un manantial la cual es rica en minerales. Luego se procedió a tapar el tubo con parafina y se colocó bajo una fuente de luz de aproximadamente 65 watts. Semana #1 Se realizó una tinción Gram de una muestra del agua superficial.
Dentro de la tinción Gram se observó una gran cantidad de microorganismos las cuales poseían bacilos cortos, Vibrio, espirilos entre otros.
Estos microorganismos de origen aeróbicos en su mayoría eran Gran positivos.
Por otro lado, se realizó un estriado en Salt Agar. Fig. 1. Columna Winogradsky en semana #0 Fig. 2. Colunma Winogradsky, semana #0 Fig. 4. Semana #1: Coloración en el agua y el lodo mas claro. Fig. 5. Microorganismos en la zona aeróbica, dentro de la columna de agua. Fig. 4. Preparación de portaobjetos para observación de microorganismos en la columna. Fig. 5. "Salt Agar" @ 7.5% de sal: Preparado. Semana #2 En el estriado realizado en "Salt Agar" con 7.5% NaCl se observó crecimiento limitado.
De este se tomó una muestra del crecimiento y se inoculo en TSA.
A estos se le realizó una tinción Gram y como resultado se demostró que eran bacilos positivos. Fig. 6. Crecimiento limitado en el "Salt Agar". Fig. 7. Bacilos Gram positivos (G+). Semana #3 Hubo crecimiento enriquecido en un plato de TSA.
Se realizó una tinción Gram la cual demostró la presencia de bacterias positivas.
Se realizó una inoculación en TSB la cual demostró la presencia de bacterias aerofílicas.
Se obtuvo un video en vivo de la columna en la cual de observo la presencia de algas, flagelados y ciliados.
Se observó una gota de agua, en esta se observó la presencia de espirilos, cocos y algas. Fig. 8. Resultado del TSA. Semana #4 Se realizó un cultivo puro en TSA y se pudo observar la presencia de bacterias Gram positivas y negativas.
También se observó la presencia de Clorofítas, Euglenas y Diatomeas en una gota de la columna. Semana #5 “Spread plate McConkey”
Durante esta semana se realizó un “spread plate en McConkey” con 0.1 mL de agua de la columna Winogradsky. Este fue inoculado a 37˚C durante 24hrs. Se pudo observar un crecimiento enriquecido el cual tenía colonias de color violeta y cremosa. Había 12 colonias violetas las cuales poseían la capacidad para fermentar la lactosa, las cuales poseían características de enterobacterias. A las colonias que fermentaban lactosa se le realizó una tinción Gram. Se observó que eran Gram negativas, con forma de bacilos pequeños.
Semana #6 Se realizó un estriado en Starch Agar y se observó varias colonias Gram negativas.
También se realizó un estriado en TSA, se observó crecimiento de varias colonias Gram negativas.
Además se realizó un estriado en Mc Conckey .Se observó poco crecimiento Mayormente eran Gram negativas.
Utilizamos agua de la columna y se realizó un estriado en “Muller Hilton Agar” y se pudo observar bacilos Gram negativos. Semana #7 Se observaron las características del hongo para verificar su identificación.
Se realizó una tinción Gran del fango el cual demostró una gran variedad de bacilos largos y cortos de bacterias gran negativas. Conclusión Luego de varias semanas realizando este trabajo observamos e identificamos las diferentes fases en la columna de agua. La columna Winogradsky constituye un modelo de ecosistemas acuáticos asociados con una columna del mismo. Observamos como los microorganismos ocupan sus espacios específicos de acuerdo a sus necesidades biológicas, su tolerancia a su medio ambiente y su necesidad de una fuente de luz para llevar a cabo los diferentes procesos. También observamos como los microorganismos crean su propio espacio en diferentes zonas e identificamos una serie de microorganismos de diferentes formas y tamaños respondiendo a sus gradientes de oxígeno y azufre. Identificamos las zonas aeróbica, anaeróbica, microaerofílica, y la coloración de cada zona. Finalmente cumplimos los objetivos trazados durante la elaboración de la columna. Referencias Brown, A. E. (2009). The Winogradsky Column. Benson's Microbiological Applications, pp. 544.
López Pérez, J. P. (2008).
La Columna de Winogradsky. Un Ejemplo de Microbiología Básica en un Laboratorio de Educación Secundaria. Ciencia Recreativa, pp. 373 -376.

Dudas... “Spread plate” en TSA
Hubo mucho crecimiento. Había colonias de color amarillas y de color cremosas. Se les realizó una tinción Gram, demostraron ser Gram positivas y eran estreptobacilos grandes y alargados. Se pudo determinar que estos bacilos duran menos de 24hrs, porque en la tinción se pudo ver presencia de bacilos negativos.

“Spread plate” en PDA pH de 9
Se pudo observar crecimiento. Sus características macroscópicas del anverso eran colonia de color blanco con micelios aéreos, el anverso era de color amarillo. Luego de una semana se realizó una técnica para ver la estructura del hongo. Se utilizó la técnica de la cinta adhesiva, esta consistía en utilizar tape y colocarlo sobre un portaobjeto con lacto fenol “Cotton blue”. Entre sus características morfológicas se pudo ver la presencia de anelidosporas intercaladas con cicatrices las cuales estaban sujetas a estructuras llamadas anélidos. Este hongo se pudo identificar era Scopulariopsis sp. También se inoculo un caldo con las bacterias recolectadas del McConkey, se observó crecimiento en todo el tubo. Se le midió la absorbancia esta era de .11. También se observó la presencia de Euplotes y de Paramecio. Fig. 3. Preparación del lodo. Fig. 9. Presencia de G+ y G- Fig. 10. Alga. Fig. 11. Diatomeas Fig. 12. Diatomeas II Fig. 15. Estriado TSA Fig. 16. G- Fig. 13. Bacilos pequeños. Fig. 14. Bacilos G- pequeños. Fig. 17. PDA, comienzo del crecimiento Fig. 18. Crecimiento del hongo. Fig. 19. Determinación del hongo encontrado en la columna. Como resultado se determinó que era Scopulariopsis sp.. El Equipo
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