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Proyecto final de microbiología

Integrantes: Mery B, Antoinette N, Katyuska B.
by

antoinette nieuwland venero

on 18 November 2013

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Transcript of Proyecto final de microbiología

Análisis microbiológico del aire de una fábrica procesadora de frutas
Resumen
Introducción
Aplicaciones del control microbiológico del aire
Materiales y métodos
Para elaborar este proyecto se utilizaron los siguientes materiales:
Recorrido
Para alcanzar nuestro destino seguimos la siguiente ruta a través de un Bus denominado "Anconero", de la Ruta nº 02 de la Empresa SESOSA.
El día Viernes 14 de Junio del 2013, el grupo conformado por Mery Bracamonte, Antoinette Nieuwland y Katyuska Barja se enrumbó hacia el distrito de Puente Piedra, en el norte de Lima, para tomar muestras de aire en una fábrica procesadora de frutas (utilizadas en una reconocida marca de mermeladas) que mantendremos con una identidad confidencial "X".

Nuestro objetivo fue recoger y analizar bacterias y hongos suspendidos en la atmósfera de dicha fábrica para determinar la calidad del aire y las consecuencias que ésta tendría tanto en los trabajadores como en los productos.

Para cumplir dicho objetivo, expusimos 6 placas de agar al aire libre a diferentes alturas por un tiempo determinado. Posteriormente éstas fueron llevadas a incubar en el Laboratorio de Microbiología II, y fueron aisladas, diferenciadas, teñidas y observadas a 1000X.

En el presente proyecto se realizó un análisis modelo de la situación microbiológica del aire de la fábrica "X", lo cual puede servir como punto de partida para establecer medidas de higiene y prevención en dicho lugar, y por ende, impulsar la mejora de la calidad de sus productos así como la salud de sus trabajadores y clientes. De la misma forma, este proyecto reforzó los conocimientos del grupo respecto al análisis y determinación de bacterias y hongos, así como enseñó a desarrollar controles de calidad de aire, de gran utilidad para nuestra carrera.

Tres placas de Agar Nutritivo
Tres placas de Agar Sabouraud
6 Placas para microcultivos
6 Baterías Gram
3 Batas de Laboratorio
Incubadora microbiana
Microscopio
Guantes quirúrgicos
Bisturí Nº 20 ó 21
Toma de muestras
Nos establecimos en un área de producción utilizada como almacén de manera temporal en su mayoría. En su minoría, estaba destinado al procesamiento de piñas.
Análisis de muestras
Bacterias
Diferenciación visual.
Tinción Gram.
Observación a 1000X.
Análisis de muestras
Hongos
12 Láminas porta objeto
Aceite de inmersión
Diferenciación visual
Paso 2: Asentamiento de las muestras
Paso 3: Incubación
Posteriormente, se procedió a dejar las muestras en la Universidad (Laboratorio de Microbiología II):

Se llevó a incubar las muestras de agar nutritivo a 37°C, mientras que las muestras de agar Sabouraud se conservaron en un lugar oscuro a T° ambiente. El tiempo de incubación para ambos casos fue de 4 días.
Se destinaron dos tipos de agar para esta prueba: Agar nutritivo (para la proliferación de bacterias) y agar Sabouraud (para el desarrollo único de hongos).
Se establecieron 3 alturas para la toma de muestras.
Cada altura en la cual se muestrearía debía tener una placa de agar nutritivo y una placa de agar Sabouraud.
Paso 1: Planificación
Parte alta: 8 metros.
Parte media: 2.50 metros.
Parte baja: 0 metros.
Tinción Gram
Diferenciación visual.
Aislamiento.
Microcultivo.
Tinción Azul de Lactofenol.
Observación a 400X.
Diferenciación visual
Aislamiento
Microcultivo
Tinción Azul de Lactofenol
Extraída de: http://hongos.cl/sites/hongos.cl/files/styles/gal-big/public/hongos/sala_de_produccion _para_hongo_ostra_-_copia.jpg
Para ello clasificamos a las bacterias obtenidas de acuerdo a su textura y coloración.
Obtuvimos 8 diferentes UFC's a las cuales se le asignó una letra de la "A" a la "H".
Con el Asa de siembra esterilizada se extrajo una pequeña porción de cada muestra para colocarlas en láminas porta objeto con una gota de agua. Se procedió a realizar la coloración:
Extraído de: http://avoga.files.wordpress.com/2013/03/gram-stain.jpg

Paso 1: Cristal violeta
Paso 2: Lugol
Paso 3: Alcohol acetona
Paso 4: Safranina
Luego se lleva a secar (y por ende fijar) la muestra al fuego, se le agrega aceite de inmersión y se observa a 1000X en el microscopio.
Hongos obtenidos en las tres placas de Agar Sabouraud:
Se procedió a sembrar cada tipo de Hongo en tubos de agar Sabouraud por separado.
Como se puede observar, todos los Hongos obtenidos resultaron ser Mohos, por lo que se debió realizar un microcultivo.
Paso 1: Preparación de la placa.
Paso 2: Obtener un cubo de agar.
Paso 3: Punción en los extremos del cubo.
Paso 4: Cubrir con laminilla.
Paso 5: Insertar un algodón húmedo.
Se dejó reposar a T° ambiente por 4 días en un lugar con limitada iluminación.
Posteriormente se aplicó en una Lámina portaobjeto un gota del colorante y se procedió a insertar la Laminilla cubreobjeto por encima.
Resultados obtenidos
Bacterias
"A"
"B"
"C"
"D"
"F"
"G"
"H"
Resultados obtenidos
Hongos
"1"
"2"
"3"
"4"
"5"
"6"
Discusión
Número y distribución de microorganismos

Se hallaron 6 diferentes UFC's las cuales fueron clasificadas en números del 1 al 6.

Hifas
Hifas
"E"
Rhizopus
Rhizopus
Rhizopus
Rhizopus (Blanco)
Presencia de artroconidias (Verde limón)
Aspergillus (Verde oscuro-Negro)
BGP Esporulados: B. subtilis
CGP en racimos: Staphylococos
CGP en cadenas: Streptococos
BGN en cadena
CGP y BGN
CGP en racimos: Staphylococos
A,B y C: Parte baja
D,E y F: Parte media
G y H: Parte alta
1 y 2: Parte baja
3,4 y 5: Parte media
6: Parte alta
Microbiología del aire: Objetivos en la industria alimenticia.
Control microbiológico del aire:
Los resultados obtenidos después de la siembra, tanto en hongos como bacterias, mostraron mayor abundancia y diversidad en las partes bajas de donde se obtuvieron las muestras. Esto concuerda con la teoría que indica que:
"El número de microorganismos de la atmósfera cambia según la altura (10 a 10^4 UFC por m^3)."
El número de microorganismos del aire en las fábricas depende del rubro en el que se desempeñe ésta, así como el número de Seres vivos presentes en ellas y el polvo producido.
De ser un análisis de calidad de aire más específico, se debería calcular los promedios viables de UFC's de acuerdo a sus épocas de abundancia, principalmente ocasionadas por las variaciones estacionales. Esto a la par de medidas de control y bioseguridad en la fábrica.
Los hongos son típicamente más abundantes en verano que en el resto del año, mientras que las bacterias son más abundantes en primavera y otoño, debido principalmente a la temperatura (estaciones de transición), humedad relativa y exposición a la luz solar.
Supervivencia de los microorganismos
Las condiciones fisico-químicas de la atmósfera no favorece el crecimiento ni la supervivencia de los microorganismos por lo que la mayoría solo pueden sobrevivir en ella durante un breve período de tiempo.
Organismos esporulados poseen más probabilidad de supervivencia en la atmósfera debido a su metabolismo bajo, paredes gruesas, pigmentación, escasa densidad, adaptaciones (como vacuolas de gas y formas aerodinámicas).
La supervivencia de las bacterias varía de acuerdo a su diversidad estructural y metabólica. En general, las bacterias Gram positivas son más resistentes que las Gram negativas ya que su pared celular es más gruesa. Por ejemplo, en aire seco algunas especies de Bacillus y Clostridium son capaces de sobrevivir más de 200 años, Mycobacterium un mes y Salmonella sólo 10 minutos
Los principales factores que intervienen son: Humedad relativa, temperatura, oxígeno, materia orgánica, radiación.
Bacillus subtilis: Resultado n° 1 de bacterias
• Bacterias Gram positivas .
• Aerobio y anaerobio facultativo .
• Esporulado: las esporas son centrales, forma elipsoide y al formarse en el interior de la célula dan lugar al hinchamiento de esta.
• Crecen entre los 10 - 48º, la temperatura óptima es entre 28 - 35º.
• Generalmente son móviles con flagelos perítricos.
• Poseen antígenos somáticos y flagelares y de esporas.
• Los antígenos de las esporas son termo resistentes al igual que las propias esporas.
• pH = 4,9 - 9,3; Aw = 0,93 - 0,95
Posee un período largo de vida (200 años aproximadamente)
Dato curioso: Se ha detectado un Bacillus sphaerious con edad de 25 millones de años.
Enfermedades transmitidas por el aire
Infecciones por Rhizopus: Phycomycosis
Trichophyton: Hongo n° 6
Pertenece a la familia de las Dermatofitas.
Se caracteriza por la presencia de artroconidias.
Representa un cuadro infeccioso seguro.
Hallado en la parte alta de muestreo.
Infecciones producidas por Trichophyton
Tiña de la cabeza
Tiña del bigote
Tiña del cuerpo
Tiña inguinal
Tiña del pie
Tiña de las uñas
Pie de atleta
-Impacto sobre superficies sólidas.
-Borboteo en líquidos.
-Sedimentación por gravedad.
-Filtración.
Tipos de análisis de calidad de aire:
Identificación de peligros para el producto terminado y para el consumidor.
Conocimiento de las causas y los mecanismos de aparición y acción de ciertas enfermedades.
En el exterior los organismos predominantes son de origen edáficos.
En el interior hay más organismos en el ambiente y provienen en su mayoría del tracto respiratorio humano.
El aire como medio de dispersión microbiana:
Conclusiones
Las UFC's decrecen conforme va aumentando la altura.
La fábrica "X" posee un rango cualitativo aceptable de microbiota ambiental al no presentar anormalidades.
Las bacterias halladas no representan riesgos para el hombre, sin embargo, pueden afectar la calidad del producto.
Se debe recurrir el problema de humedad en el techo de la planta.
Se deben practicar mejores medidas sanitarias: Se debe tener en cuenta un riesgo microbiano en todo campo de actividad.
Soluciones
Bibliografía
De la Rosa M., Mosso M. y Ullán C. El aire: hábitat y medio de transmisión de microorganismos. Observatorio Medioambiental [Internet]. 2013 [citado 26 Jun 2013] Disponible en: www. revistas.ucm.es/index.php/obmd/article/download/.../21767‎
Solé M. NTP 299: Método para el recuento de bacterias y hongos en aire. Instituto Nacional de seguridad e higiene en el trabajo. [Internet]. 2013 [citado 26 Jun 2013] Disponible en: www.insht.es/InshtWeb/Contenidos/Documentacion/.../NTP/.../ntp_299.p
Nortpacific S.A. El control microbiológico del aire. Nortpacific S.A. [Internet]. 2013 [citado 26 Jun 2013] Disponible en: www.norpacific.com.br/spanish/dicas/docs/062_1.pdf‎.
ANÓNIMO (1996): Programa de control microbiológico ambiental en zonas de producción.Ed. Asociación Española de Farmacéuticos de la Industria (AEFI), Madrid.
ATLAS, R., y BARTHA, R. (2002): Ecología microbiana y Microbiología ambiental. Ed. Pearson Educación, Madrid.
ADSA-MICRO Manual de medios de cultivo para microbiología ADSA, Barcelona, 1989
DENYER, S. P. (1992): «Factory and hospital hygiene and good manufacturing practiceEn: Hugo, W. B. and Russell, A. D. (ed). Pharmaceutical microbiology. 5.a Edic. Ed. Blackwell Scientific Publications, London.
BUTTNER, M. P.; WILLEKE, K., y GRINSHHPUN, S. A. (1997): «Sampling and analysis of airborne microorganisms». En: Hurst, C. J. et al. (ed). Manual of environmental microbiology. Ed. American Society for Microbiology, Washington.
MAY, K. R., y HARPER, G. J. (1957): «The efficiency of various liquid impinger samplers in bacterial aerosols». Journal of Industrial Medical, 14, 287.

Se sugiere la elección de un muestreador de aire, reproductible de fácil utilización para garantizar al operario resultados significativos y aprovechables en el sentido microbiológico.

Una de las soluciones que podemos plantear para el problema de la fábrica, como primera opción es el Filtro HEPA (High Efficiency Particulate Air) ya que nos ayudaría a reducir las reacciones alérgicas al moho y evita que este crezca en el hogar, eliminando así al menos el 99,97% reduciendo las esporas del moho y polvo.

Otra se las soluciones que podemos optar, es un purificador de aire siendo un dispositivo que elimina los elementos contaminantes, hongos, partículas, presentes y/o suspendidos en el aire, este producto se comercializa por ser particularmente beneficioso para asmáticos, alérgicos, problemas cardiovasculares, etc. Asimismo, previene enfermedades como daños en la piel e infecciones.
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