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Virus del Papiloma Humano

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by

Liss Padhilla

on 19 March 2014

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Transcript of Virus del Papiloma Humano

Virus del Papiloma Humano
¿Qué es el VPH?
Las siglas VPH significan Virus del Papiloma Humano, reciben este nombre debido causan verrugas o papilomas, los cuales son tumores no cancerosos. Los VPH son un grupo de más de 100 virus relacionados. A cada variedad de VPH en el grupo se le asigna un número, lo que es llamado tipo de VPH.
Estadísticas a nivel mundial
¿Donde se desarrollan?
Es un virus de transmisión sexual
Células epiteliales escamosas
Superficie de la piel y en superficies húmedas
Vagina, el ano, el cuello uterino (la base de la matriz en la parte superior de la vagina), la vulva (alrededor del exterior de la vagina), la cabeza del pene, la boca, la garganta, la tráquea (la vía principal de respiración), los bronquios (vías más pequeñas de respiración que se ramifican en la tráquea), y los pulmones.
Tipos de VPH
Existen más de 230 tipos de VPH, 118 tipos están bien caracterizados
Técnicas de tipificación
PCR
Captura Híbrida
Papanicolaou en Base Liquida
COBAS 4800 PVH
Inmunomarcadores P16 KI 67
La infección
Método
in vitro
de ácidos nucleicos por el cual el segmento particular de DNA es específicamente replicado
PCR anidada
2 sondas de amplificación con distintos pares de cebadores en cada una, con el fin de incrementar la sensibilidad y la especificidad de la detección.
Primero se realiza una reacción con los cebadores externos para amplificar una región de ADN mas extensa, que contiene el segmento diana.
Después, este producto de amplificación se utiliza como molde de una segunda PCR con los cebadores internos para amplificar la región específica.
¿Qué iniciadores usar?:
Usando el par de iniciadores de
consenso externos
MY09/MY114
y el par de
iniciadores internos

GP5+/GP6+4
, dirigidos a la región L1 del HPV y que amplifican un fragmento de 450 y 150 pb, respectivamente.
Se utilizaron como controles positivos plásmidos recombinantes para los tipos de HPV:
6, 16 y 18
Se utiliza para detectar la presencia ó ausencia del VPH mediante la detección del ADN del virus en las células cervicales de la mujer

Detecta la presencia de alteraciones en las células que indican la presencia del Papiloma Virus Humano (PVH), asociado al desarrollo del Cáncer de Cuello Uterino y otras inflamaciones e infecciones

Basada en la técnica de PCR en Tiempo Real, sistema automatizado con alta especificidad y sensibilidad. Detecta la presencia de 12 genotipos de Alto Riesgo: 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66 y 68 (asociados a diversas manifestaciones carcinogénicas) e identifica de manera individual los genotipos de Alto Riesgo: 16, 18 .
P16: NIC I en cervix.
KI 67: Marcador de Proliferación celular.
Ambos inmunomarcadores se aplican a las láminas del tejido de la muestra remitida al laboratorio para destacar determinadas características celulares que indicarán la extensión de la enfermedad en caso de neoplasias cervicales intraepiteliales.
tres
oncogenes, E5,
E6 y E7
,
modulan el proceso de transformación --> formar oncoproteinas manteniendo asi la neoplasia
dos
proteinas reguladoras, E1 y E2,
modula la transcripcion y replicacion
dos
proteinas estructurales, L1 y L2
, componen la capside viral.
Referencias Bibliograficas
Muñoz N, Bosch FX, de Sanjose S, Herrero R, Castell¬sague X, Shah KV, et al. Epidemiologic classification of human papillomavirus types associated with cervical cancer. N Engl J Med 2003; 348 (6): 518-27.
Brebi MP, Ili GC, López MJ, Garcia MP, Melo AA, Mon¬tenegro HS, et al. [Detection and genotyping of human papillomavirus in biopsies of uterine cervical adenocar¬cinoma]. Rev Med Chile 2009; 137 (3): 377-82.
American Society Cancer, virus del papiloma humano (VPH), cáncer, prueba de VPH y vacunas contra el VPH. 2012.
- Mariano Zacarías-Flores Virus del papiloma humano (VPH) y su potencial
prevención a través de una vacuna Editorial Bioquimia Volumen 31 No. 3 Julio-Septiembre 2006. p. 83-84
Repertorio de medicina y cirugia volumen 14 No. 2005 p. 71

Estudio partenogenético de un carcinoma escamoso de cervix uterina
Desde el punto de vista citogenético, se dispone de poca información acerca de las alteraciones cromosómicas que se detectan en estas neoplasias si bien existen múltiples estudios descriptivos, fundamentalmente en base a la integración de los VPH en el genoma humano.
PVHfast (Pharmagen) En esta técnica se utilizan los primers de consenso. La región amplificada fue una región común a un amplio grupo de VPH (región L1 open reading frame). Al mismo tiempo, se utilizó un control positivo interno para la amplificación.

Una muestra del tumor en fresco, que no contenía tejido no tumoral, fue utilizada para cultivo celular y estudio citogenético.


Material y método
La muestra fue disgregada mecánicamente y posteriormente se le añadió una solución al 0,8% de colagenasa para ayudar a separar mejor las células. Una vez que se completó la disgregación, se recogieron 2 × 106 células/ml en un Falcon con 5 ml de medio de cultivo completo (DMSO con un 20% de suero bovino fetal). El Falcon se colocó en una estufa de cultivos a 37 °C con un 5% de CO2 durante 3 días. Al tercer día se realizó un cambio del medio de cultivo, y día a día se valoró el crecimiento celular. En el quinto día de cultivo se añadió un antimitótico, colcemid, a una concentración final de 0,1 μg/ml de medio de cultivo, y se dejó actuar durante 24 h. Seguidamente se añadió la solución hipotónica (KCI 0,075 M) durante 20 min, y posteriormente se realizaron tres cambios de fijador Carnoy (tres partes de metanol:una parte de ácido acético). Con el producto del cultivo se realizaron cuatro extensiones sobre portaobjetos que fueron teñidas con el colorante de Wright para tinción de bandas G.
Resultados
Vacunas
La vacuna contra el VPH es una estupenda noticia, pero sólo protege en contra de dos de los 15 tipos de VPH que causan cáncer. Incluso entonces, es sólo plenamente eficaz si se les da a mujeres que aún no han sido expuestas a los tipos de VPH para los que se han sido diseñadas. Eso significa que la candidata ideal para la vacuna es una adolescente o mujer joven que aún no ha tenido relaciones sexuales.
La vacuna Gardasil
Protege contra dos tipos de VPH (VPH -6 y VPH-11) que causan el 90% de todas las verrugas genitales.
Provee cierta protección contra algunos tipos de VPH de alto riesgo además del tipo 16 y 18
La vacuna Cervarix
Los VPH se transmiten fácilmente durante las actividades sexuales. VPH es tan común que casi todos los hombres y mujeres sexualmente activos lo adquirirán en un momento en la vida.
En E.E.U.U. el cáncer de pene representa cerca del 0.2% de todos los tipos de cáncer en hombres.
El riesgo también es alto en hombres con sistemas inmunológicos comprometidos, incluyendo aquellos con VIH.
Hasta este momento no hay pruebas reconocidas para detectar el VPH en hombres. Sin embargo, existen algunas opciones para detectar el problema más común causado por VPH en hombres, las verrugas genitales. Se diagnostican por medio de una inspección visual.
De hecho, casi todos los cánceres de cuello uterino (más del 99%) están relacionados con el VPH. De estos casos, alrededor del 70% son causados por los tipos de VPH 16 o 18.
Tropismo por la citoqueratina
células epiteliales escamosas
Los VPH poseen una homología aproximada del 90%. Estos contienen entre siete y nueve genes, que se clasifican en (E) y (L). Los primeros (E1, E2, E4, E5, E6, E7) son de expresión temprana y están relacionados con el control de la replicación y la expresión de proteínas de transformación celular
(E1, E2, E4, E5, E6, E7)
son de expresión temprana y están relacionados con el control de la replicación y la expresión de proteínas de transformación celular.

E1
inicia la replicación y regula la trascripción del ADN viral.
E2
es una proteína que funciona como reguladora en la transcripción de los genes E6 y E7.

E4
se encuentra asociada con la ruptura de la citoqueratina en la célula.

E5
interactúa con los receptores del factor de crecimiento celular para producir mitogénesis.
E6 y E7
se encuentran asociadas a la transformación maligna. La expresión continua de E6 y E7 es necesaria para mantener el estado proliferativo en las células.
Los genes de expresión tardía
L1 y L2
codifican proteínas estructurales, su expresión ocurre en la fase final para la producción de viriones.
Basada en la extracción del ADN de la muestra fresca o conservada. Permite identificar tipos y subtipos, e informar sobre el estado episomal o integrado en que se halla el ADN viral. Es una técnica que detecta fragmentos de ADN, separados por tamaño mediante electroforesis en gel. Combina la separación electroforética del ADN con su transferencia a un soporte sólido o filtro de membrana para su hibridación. Metodológicamente, implica cinco etapas: separación electroforética, desnaturalización, transferencia, hibridación y detección.

Southern blot
Dot blot
Se utiliza para el estudio de ADN, directamente sobre una membrana de nitrocelulosa seguida de una hibridación con ADN marcado con fluoresceína. Esta técnica inmoviliza preparaciones de ADN en sonda por medio de un soporte sólido (una membrana de nylon). La hibridación con la muestra en blanco permite estudiar la cantidad de secuencias blanco estimadas por señales de intensidad. Este método
detecta
siete tipos de VPH: 6, 11, 16, 18, 31, 33, 35.
En la columna 3. Se observa una banda de 450 pb que corresponde al genoma del VPH. Control positivo: columna 7. Control negativo: columna 8. En todas las columnas, excepto en la columna 3 (caso problema), se observa una banda de 1.200 pb que corresponde al control interno. Cuando hay un elevado número de copias de virus no se detecta esta banda correspondiente al control interno
Estidio citogenetico : 8 metafases 7,8, XX, +1, +1, +2, +3, +add(3)(p11), +4,dic(5;?)(q;?),i(5)(p10), –6,del(7)(p11p13), +add(8)(q24), +add(8)(q24), +9, +9, +10, +11, +11, +i(12)(p10), +13, +13, +14, der(15;22) (q10;q10), +16, +16, +17, +18, +18, +18, +19, +19, +i(19)(q10), +21, +21 (fig. 2).

En el cariotipo destaca una hiperdiploidía con la ganancia de múltiples cromosomas, y como alteraciones estructurales, la presencia de un isocromosoma i (5p), i(12p), i(19q), y la ganancia del brazo largo del cromosoma 8
Gracias !!
HPV. edu
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