Avaliação biológica in vitro BC e LG - Defesa

Método de abordagem etnofarmacológica: maior probabilidade de descoberta de novas substâncias bioativas.

• Sarrazin (2012): valores de 1,0 mg/mL consistentes com os resultados desse estudo para as mesmas cepas testadas com óleo essencial de L. grandis;
• Botelho (2007): Óleo essencial de L. sidoides apresentou CIM 2,5 mg/mL e composto fenólicos carvacrol e timol apresentaram CIM 1,25 e 0,625 mg/mL contra Candida albicans;
• Presença de compostos fenólicos dos constituintes fixos.

Muito obrigada!

mayumikatia@gmail.com

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Bauhinia cheilantha

Atividade antimicrobiana dos extratos etanólicos de Bauhinia cheilantha, avaliados através da difusão em meio sólido e microdiluição

• Mishra (2011): Extratos benzênicos de folhas de B. variegata inibiram crescimento de S. aureus - 10 mm e 60 mg/mL
• Martínez (2011): Ext. etanólicos e frações de folhas de B. variegata demonstraram CIM > 1,0 mg/mL
• Kumar (2005): Ext. metanólicos da casca do caule de B. racemosa apresentou CIM 0,025 a 0,2 mg/mL
• Dugasani (2010): Extratos brutos de raízes de B. tomentosa e B. vahlii apresentaram CIM de 0,0625 e 0,250 mg/mL - presença de flavonóides e taninos
• Atividade antimicrobiana na casca do caule e raíz maiores que nas folhas de espécies do gênero

• Kumar (2005): Extrato metanólico da casca do caule de B. racemosa apresentou CI50 152,29 microg/mL (DPPH) - resultado estatisticamente significativo fortalecendo a possibilidade do potencial de BC;
• Sowndhararajan (2013): Extratos brutos de folhas B. vahlii apresentaram CI50 < 80 microg/mL (DPPH);
• Argolo (2004): Extratos de folhas de B. monadra demonstraram potencial antioxidante comparado com catequina (DPPH) - esteroides e flavonoides;
• Estudos com outros métodos também comprovaram potencial antioxidante de espécies de Bauhinia;
• Flavonoides: grupos de compostos fenolicos que têm potencial antioxidante

* Controles:

C- DMSO ou Cremophor a 10%

C+: Ceftriaxona, Ciprofloxacina e Fluconazol (CLSI, 2012)

* TRIPLICATA

LEITURA: 20 microlitros TTC a 0,5% e reincubação por 3h

* Cor vermelha: crescimento microbiano

* Ausência: ação inibitória do EB

CIM = menor concentração do extrato capaz de inibir completamento o crescimento microbiano

resistência de cepas G-

* Diâmetros 7 mm

* 10 mL Agar/placa

* Extrato a 10% - 50 microlitros/poço

Lippia gracilis

• Sarrazin (2012): Óleo essencial de L. grandis inibiu todas cepas G+ testadas e P. aeruginosa e C. albicans foram resistentes (possível presença de constituintes não voláteis);
• Botelho (2007) e Oliveira (2007): Óleos essenciais de L. origanoides e L. sidoides inibiu C. albicans.

• Partes aéreas: possibilidade da existência de constituintes bioativos;
• Damasceno (2008): Extratos metanólicos das partes aéreas de L. grandis apresentaram CI50 20,1 - compostos fenólicos;
• Alves (2010): Óleos essenciais de L. gracilis > potencial antioxidante do que L. sidoides;
• Almeida (2010): Extratos etanólicos e compostos isolados de folhas de L. sidoides - substâncias flavonoídicas;
• Óleo essencial de L. gracilis é rico em compostos fenólicos como o timol e carvacrol, potentes antioxidantes - importância na investigação dos constituintes fixos.

Avaliação da atividade antimicrobiana

UNIVERSIDADE FEDERAL DE ALAGOAS

ESCOLA DE ENFERMAGEM E FARMÁCIA

PROGRAMA DE PÓS GRADUAÇÃO EM ENFERMAGEM

Avaliação antimicrobiana

Avaliação antioxidante

• A: 200 microlitros do extrato
• B-H: 100 microlitros caldo Muller Hinton (2x)
• Transferência 100 microlitros do extrato até H
• Incubação a 35ºC por 18h / TRIPLICATA

KÁTIA MAYUMI TAKARABE CAFFARO

15 a 20% do total mundial: patrimônio potencialmente capaz de render-lhe grandes benefícios econômicos

Considerações finais e perspectivas

PLANTAS MEDICINAIS

* 80': resgate pela opção terapêutica com produtos naturais

* 90': diretrizes OMS - aumento significativo interesse global pelas plantas medicinais e fitoterápicos

Atividade antimicrobiana dos extratos etanólicos de Lippia gracilis, avaliados através da difusão em meio sólido e microdiluição

Avaliação biológica in vitro de espécies vegetais da caatinga Bauhinia cheilantha e Lippia gracilis

Reconhecimento, valorização e preservação do conhecimento tradicional das comunidades, quanto à suas práticas populares de uso de plantas medicinais

• Cepas microbianas ATCC® Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis, Enterococcus faecalis, Escherichia coli, Klebisiella pneumoniae, Pseudomonas aeruginosa e Candida albicans
• Padronização da densidade do inóculo - tubo 0,5 da escala de Mc Farland (CLSI)

Técnica de difusão em meio sólido a partir de orifício (AYRES, 2008; LIMA, 2006)

Microdiluição em caldo para a determinação da CIM (AYRES, 2008)

Avaliação da atividade antioxidante

Orientadora: Profª Drª Maria Lysete de Assis Bastos

Co-orientadora: Profª Drª Eliane Aparecida Campesatto

• Solubilização dos extratos em MEOH [200, 150, 100, 50 e 25 microgramas/mL]
• Leitura da absorbância de cada [] contra o MeOH espectroscópico durante 60'
• Cl50 = [amostra] necessária para reduzir em 50% a [DPPH inicial]

Defesa

20/02/2014

Avaliação da atividade dos extratos etanólicos Bauhinia cheilantha e Lippia gracilis, frente ao radical DPPH.

MACEIÓ

2014

CSR: capacidade sequestradora de radicais livres utilizando o radical sintético estável DPPH: DPPH• + AH ↔ DPPH-H + A•

Ensaio qualitativo: (+)-catequina (SOLER-RIVAS, 2000)

Ensaio quantitativo: ácido ascórbico e o BHT (GOVIDARAJAN, 2003)

• Lippia gracilis: potencial antimicrobiano e evidenciando de presença de constituintes bioativos fixos - compostos fenólicos
• Bauhinia cheilantha: potencial antioxidante das partes avaliadas - flavonoides
• Primeiro relatório a respeito da atividade antimicrobiana e antioxidante de extratos brutos de Lippia gracilis e Bauhinia cheilantha;
• Avaliação da toxicidade - LaFI;
• Identificação e quantificação das classes de compostos - Profº Luiz Caetano (University of London);
• Resultados suportam (parcialmente) o uso popular de ambas as espécies - relação do saber popular e busca na comprovação científica.

Bauhinia cheilantha (mororó)

Lippia gracilis (alecrim-de-chapada)

Objetivos

INTRODUÇÃO

* Análise por Microcal Origin 6.0®

* %DPPH remanescente no meio reacional foi obtida a partir da equação matemática da curva de calibração e dos valores de absorbância após 60'

* TRIPLICATA

* Bauhinia: 300 espécies - folhas, casca do caule e caule - uso popular para diversos fins

* Potencial antimicrobiano de espécies do gênero

* Potencial antioxidante: relação efeito hipoglicemiante (estado hiperglicêmico produção de ROS)

* BC: flavonóides e taninos

* Lippia: 200 espécies - folhas e flores

* Uso popular para diversos fins e estudos comprovados de seus óleos essenciais

* Potencial antioxidante de espécies do gênero

* Potencial antimicrobiano comprovado de óleos essenciais e compostos fenólicos de LG

* Investigação de metabólitos secundários não voláteis

Prospecção fitoquímica

Estação seca

Estação chuvosa

Plantas com adaptações únicas diante das condições ecológicas locais de uma vegetação peculiar.

Avaliar a atividade biológica in vitro de extratos etanólicos das espécies vegetais Bauhinia cheilantha e Lippia gracilis.

• Avaliar a atividade antibacteriana e antifúngica;
• Determinar a atividade antioxidante;
• Realizar a prospecção fitoquímica.

Abordagem etnodirigida como ponto de partida para estudos farmacológicos

Seleção das espécies estudadas e delineamento dos ensaios biológicos

A interface da enfermagem na pesquisa básica experimental

• Identificação das classes de constituintes químicos presentes nos cinco extratos etanólicos;
• Protocolo descrito por Matos (1997);
• Metodologia com abordagem qualitativa;
• Alíquotas de 1mg/mL de cada extrato.

* Estudo pioneiro em Piranhas e Delmiro Gouveia: 187 plantas medicinais (ALMEIDA, 2006)

* Ponto de partida do estudo

* Espécies endêmicas e com gêneros presentes na RENISUS

Importância das plantas medicinais

Biodiversidade brasileira

Iniciativas governamentais relacionadas às plantas medicinais

O bioma Caatinga

2006

Resultados x literatura

Resultado da prospecção fitoquímica

Preparo dos extratos brutos: partes utilizadas, secagem, trituração, maceração com etanol, remaceração, filtração, destilação.

CAATINGA

2009

• B. manca, B. candicans, B. uruguayensis, B. purpurea, B. forficata e B. splendens;
• Predominância de alcaloides, terpenos, esteroides e especialmente flavonoides;
• B. cheilantha (folhas): flavonoides, taninos e antraquinonas (SILVA, 2007)

folhas, casca do caule e caule; partes aéreas e caule

C+

CSR: +

2012

Agradecimentos...

BC-F

BC-CC

BC-C

* Único bioma exclusivamente brasileiro e principal ecossistema região nordeste

* Terapêutica de espécies vegetais semiáridas: parte da cultura de muitas gerações

* Estudos etnodirigidos

* Potencial de bioprospecção

LG-PA

• Profª Lysete Bastos e LpTF
• Profª Eliane Campesatto e LaFI
• Docentes e colegas do PPGENF
• Professores e doutorandos do LpTF e LpQPN
• Profº Luiz Caetano e pós-doutoranda Adriana Todaro
• Bolsa da CAPES / FAPEAL

Estudo experimental delineado nos moldes de pesquisa quantitativa, realizado nos laboratórios LpTF (ESENFAR), LPqPN e LPqRN (IQB).

LG-C

* Enfermeiro: facilitador do processo do cuidado;

* Envolvimento da enfermagem na consolidação dos objetivos de importantes iniciativas governamentais;

* Estudos etnodirigidos em USF/UBS destacam a importância da comprovação farmacológica do uso popular;

* Atuação na pesquisa básica: integração com outras disciplinas e intersecção com a assistência.

• Ênfase nos constituintes voláteis;
• Flavonoides em L. citriodora e L. nodiflora;
• Taninos, triterpenos e esteroides em L. alba;
• Alcaloides em L. dulcis, L. germinata, L. nodiflora e L. turbinata;
• Saponinas e antronas nas partes aéreas de LG.