Loading presentation...

Present Remotely

Send the link below via email or IM

Copy

Present to your audience

Start remote presentation

  • Invited audience members will follow you as you navigate and present
  • People invited to a presentation do not need a Prezi account
  • This link expires 10 minutes after you close the presentation
  • A maximum of 30 users can follow your presentation
  • Learn more about this feature in our knowledge base article

Do you really want to delete this prezi?

Neither you, nor the coeditors you shared it with will be able to recover it again.

DeleteCancel

Make your likes visible on Facebook?

Connect your Facebook account to Prezi and let your likes appear on your timeline.
You can change this under Settings & Account at any time.

No, thanks

ESPECTOFOTOMETRIA Y ELECTROFORESIS

No description
by

JOS LC

on 23 March 2011

Comments (0)

Please log in to add your comment.

Report abuse

Transcript of ESPECTOFOTOMETRIA Y ELECTROFORESIS

EVALUACIÓN DE LA INTEGRIDAD
Y PUREZA DE LOS ÁCIDOS NUCLEICOS MEDIANTE ESPECTROFOTOMETRÍA Y ELECTROFORESIS ESPECTOFOTOMETRIA ELECTROFORESIS PERMITE DETERMINAR LA CONCENTRACION DE UN COMPUESTO EN UNA SOLUCION ELECTROFORESIS LA ESPECTROFOTOMETRÍA ES UNA TÉCNICA DE ANÁLISIS UTILIZADA CUANDO SE QUIERE SABER LA CONCENTRACIÓN DE SOLUTO EN UNA SOLUCIÓN QUÍMICA ES EL MÉTODO DE ANÁLISIS ÓPTICO QUE MÁS SE USA EN INVESTIGACIONES QUÍMICAS Y BIOLÓGICAS EL ESPECTROFOTÓMETRO PERMITE COMPARAR LA RADIACIÓN ABSORBIDA O TRANSMITIDA POR UNA SOLUCIÓN QUE CONTIENE UNA CANTIDAD DESCONOCIDA DE SOLUTO Y OTRA DE LA CUAL SE SABE LA CANTIDAD DE SOLUTO JOSÉ CARLOS LÓPEZ COLORADO

ALEXIS REYES TIERRABLANCA PRINCIPIO DE LA ESPECTROFOTOMETRÍA TODAS LAS SUSTANCIAS SON CAPACES DE
ABSORBER RADIACIÓN, INCLUSIVE EL AGUA O EL CRISTAL; CON LONGITUDES DE ONDA QUE NO SON APRECIABLES A SIMPLE VISTA. LA ABSORCIÓN DE RADIACIONES ULTRAVIOLETA,
VISIBLES O INFRARROJAS DEPENDE DE LA ESTRUCTURA MOLECULAR Y ES DIFERENTE EN CADA SUSTANCIA QUÍMICA EL COLOR DE LAS SUSTANCIAS DEPENDE
DE LAS LONGITUDES DE ONDA DE LA LUZ
BLANCA QUE CAPTURA, EL COLOR QUE VEMOS
SON AQUELLAS LONGITUDES DE ONDA QUE NO
LOGRA CAPTURAR LA ESPECTROFOTOMETRÍA UV-VISIBLE
USA HACES DE RADIACIÓN EN EL RANGO UV DE 80nm A 400nm, el DNA y el RNA se leen a un máximo de 260nm. LA ABSORCIÓN Y LA TRANSMITANCIA DE LA LUZ
DEPENDE TANTO DE LA CANTIDAD DE LA CONCENTRACIÓN
COMO DE LA DISTANCIA RECORRIDA, Y SE EXPRESA MEDIANTE 2 LEYES: LEY DE BEER DECLARA QUE LA CANTIDAD DE LUZ ABSORBIDA POR UN
CUERPO DEPENDE DE LA CONCENTRACIÓN EN LA SOLUCIÓN EJEMPLO: UN VASO DE VIDRIO CON AGUA Y AZÚCAR DILUIDA Y OTRO VASO CON AGUA PERO CON MÁS AZÚCAR; SEGÚN LA LEY DE BEER SI SE PASA UN RAYO DE LUZ A TRAVÉS DEL PRIMER VASO SALDRÁ UNA MAYOR CANTIDAD DE LUZ QUE SI SE ATRAVESARA EL SEGUNDO ESTO SE DEBE A QUE EN EL PRIMER VASO HAY UN MENOR NÚMERO DE PARTÍCULAS CON LAS CUALES PUEDEN CHOCAR LAS ONDAS ELECTROMAGNÉTICAS LEY DE LAMBERT LA LEY DE LAMBERT NOS HABLA DE QUE LA CANTIDAD DE LUZ ABSORBIDA POR UN OBJETO DEPENDE DE LA DISTANCIA RECORRIDA POR LA LUZ COMO EN EL EJEMPLO ANTERIOR DE LOS 2 VASOS; SUPONGAMOS AHORA QUE LOS 2 VASOS TIENEN LA MISMA CANTIDAD DE AGUA Y DE AZÚCAR PERO QUE EL SEGUNDO VASO TIENE UN DIÁMETRO MAYOR: SEGÚN LA LEY DE LAMBERT; SI UN RAYO DE LUZ ATRAVIESA EL PRIMER VASO LA CANTIDAD DE LUZ QUE SALE DE ÉSTE SERÍA MAYOR A QUE SI EL RAYO DE LUZ PASA EL SEGUNDO VASO ESTO SE DEBE A QUE: AL IGUAL QUE EN LA LEY DE BEER, LAS ONDAS ELECTROMAGNÉTICAS CHOCAN CONTRA UN MAYOR NÚMERO DE ÁTOMOS SÓLO QUE AHORA SE DEBE AL DIÁMETRO DEL SEGUNDO VASO. TRANSMITANCIA Y ABSORCIÓN DE LAS RADIACIONES LA PÉRDIDA DE FOTONES O RADIACIÓN QUE SE EXPRESA EN LAS LEYES ANTERIORES SE DEMUESTRA MEDIANTE LA SIGUIENTE ECUACIÓN: lt/lo=T lt: es la intensidad de luz que va a llegar a la celda fotoeléctrica, es la radiación o intensidad transmitida. lo: es la intensidad con la que sale al atravesar la celda T: es la transmitancia, se refiere a la relación entre lt y lo APLICACIONES 2 APLICACIONES PRINCIPALES: DETERMINAR LA CANTIDAD DE CONCENTRACIÓN EN UNA
SOLUCIÓN DE ALGÚN COMPUESTO USANDO LAS FÓRMULAS ANTERIORES DETERMINAR ESTRUCTURAS MOLECULARES
YA QUE TIENEN DISTINTOS TIPOS DE ABSORBANCIA ES UN MÉTODO DE LABORATORIO EL CUAL USA CORRIENTE ELÉCTRICA CONTROLADA PARA SEPARAR BIOMOLÉCULAS SEGÚN SU TAMAÑO Y CARGA ELÉCTRICA PASANDO POR UNA MATRIZ GELATINOSA FUNDAMENTO CUANDO UNA MEZCLA DE MOLÉCULAS IONIZADAS Y CON CARGA NETA ES COLOCADA EN UN CAMPO ELÉCTRICO EXPERIMENTAN ATRACCIÓN HACIA EL POLO QUE TIENE CARGA OPUESTA DESPUÉS DE CIERTO TIEMPO LAS MOLÉCULAS POSITIVAS SE DESPLAZARÁN HACIA EL CÁTODO, MIENTRAS QUE LAS NEGATIVAS SE DESPLAZARÁN HACIA EL ÁNODO EL MOVIMIENTO DE LAS MOLÉCULAS, ADEMÁS, ESTÁ REGIDO
POR LA FRICCIÓN CON EL SOLVENTE EL CUAL ORIGINARÁ UNA FUERZA OPUESTA, MIENTRAS QUE EL MOVIMIENTO BROWNIANO AUMENTARÁ LA DIFUSIÓN (ENERGÍA CINÉTICA PROPIA). LA ENERGÍA CINÉTICA DE LAS MOLÉCULAS AUMENTARÁ JUNTO CON LA TEMPERATURA, ESTO QUIERE DECIR QUE A MAYOR TEMPERATURA HABRÁ MAYOR DIFUSIÓN LA SUMA DE ÉSTAS FUERZAS HARÁ QUE LAS MOLÉCULAS NO MIGREN DE UNA MANERA HOMOGÉNEA, DE FORMA QUE, SI LAS MOLÉCULAS SE COLOCAN EN UN LUGAR DE LA SOLUCIÓN, LOS IONES COMENZARÁN A MOVERSE Y A FORMAR UN FRENTE QUE AUMENTARA DE ANCHO CON EL TIEMPO PARA REDUCIR ESE ANCHO SE REDUCE EL MOVIMIENTO DE LAS MOLÉCULAS USANDO UN MEDIO QUE OPONGA RESISTENCIA A ESE MOVIMIENTO, COMO POR EJEMPLO UN GEL DE AGAROSA AL 1% O AL 2%, LA CONCENTRACIÓN DEL GEL DEPENDE DE EL TAMAÑO DE LOS FRAGMENTOS A SEPARAR EL GEL ES UN POLÍMERO DE ALTO PESO MOLECULAR QUE ATRAPA MOLÉCULAS DE AGUA Y DIFICULTA EL MOVIMIENTO DEL SOLUTO EN CONSECUENCIA LA MIGRACIÓN ELECTROFORÉTICA DE LAS MOLÉCULAS VA A SER MÁS LENTA, PERO EL ENSANCHAMIENTO DEL FRENTE SE REDUCIRÁ MÉTODOS ELECTROFORÉTICOS MÉTODOS ELECTROFORÉTICOS ZONALES: SON LOS MÁS COMUNES PORQUE SE PUEDEN APLICAR EN VARIOS CAMPOS ÚTILES EN LA SEPARACIÓN DE MEZCLAS COMPLEJAS TIENE GRAN PODER DE RESOLUCIÓN YA QUE SE APLICA
POCA CANTIDAD DE PROTEÍNA A UNA ZONA ESTRECHA Y EL TRAYECTO ES MUCHO MAYOR QUE LA ZONA DE APLICACIÓN HACE FALTA CIERTO EQUIPO COMO: FUENTE DE PODER CUBETA HORIZONTAL O
VERTICAL 2 ELECTRODOS MÉTODOS ELECTROFORÉTICOS ZONALES
MÁS UTILIZADOS: ELECTROFORESIS EN GEL DE POLIACRILAMIDA (proteínas y pequeños fragmentos de DNA) ELECTROFORESIS EN GELES DE GRADIENTES ELECTROFORESIS EN GELES DE AGAROSA ELECTROFORESIS CAPILAR ISOELECTROENFOQUE ELECTROFORESIS BIDIMENSIONAL
(permite separar en pH y en carga) FUENTES DE ERROR EN LA ELECTROFORESIS ESPECTROFOTOMETRÍA La electroforesis es una técnica muy sensible y puede ser afectada por muchos errores experimentales, como la temperatura durante la polimerización y la corrida del gel, velocidad de la polimerización, niveles de catalizador, pureza del reactivo, tiempo de corrida y preparación de las muestras. GRACIAS
Full transcript