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TECNICAS DE CULTIVOS CELULARES

En las ultimas decadas se han utilizado cultivos celulares para determinar la absorcion intestinal de moleculas
by

wendy cabrera c.

on 22 November 2012

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Transcript of TECNICAS DE CULTIVOS CELULARES

Cultivo y variaciones en experimentos de transporte con monocapas de Caco-2 TECNICAS CON CULTIVOS CELULARES En las ultimas décadas se han utilizado los cultivos celulares para determinar la adsorción intestinal de moléculas. Tras un periodo la de incubación de 30mts en el cual las células están a 37ºC en un bano de agua en movimiento los tampones son sustituidos por nuevos y se anade una solución diluida del fármaco en el compartimento apical. a intervalos regulares se determina la concentración del fármaco en el compartimento basolateral. Caco-2 linea de células del carcinoma de colon humano es la mas utilizada -modelo de absorción oral propuesto por Hidalgo en 1989. la celulas se cultivan sobre soportes porosos de 15 a 21 días en medios de cultivo típicos Dulbecco´s con 20% de suero fetal bovino, 1% de aminoacidos no esenciales y L-glutamina ,se cultivan a 37ºC en CO2 al 10% y con una humedad del 95%, el medio de cultivo se cambia dos veces por semana . las células Caco-2 se diferencian formando una monocapa de enterocitos polarizados, estos se parecen a los del intestino delgado pues poseen microvellosidades y sistemas de transporte: azucares aminoácidos, péptidos y el contratransportador P-glucoproteina, las células Caco-2 adyacentes forman uniones estrechas. se sustituye el medio de cultivo por tampones (Hanks) a ph de 7,4 en la superficie basolateral. Experimentos de transporte
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