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Métodos para determinação de proteínas

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Josué Jandrey

on 24 June 2014

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Transcript of Métodos para determinação de proteínas

Método de Kjeldahl
Absorção no UV
Método de Dumas
Método de Biureto
Método por Infravermelho
Índice
Métodos para determinação de proteínas
Digestão da matéria orgânica com H2SO4
CuSO4 como catalisador
Método de determinação indireta
Quatro passos para a determinação de proteínas
Método de Kjeldahl
NH3 + H3BO3 -> NH4H2BO3
Baseado na absorção de energia no UV

220nm ligações peptidicas

280nm triptofano e a tirosina

Lei de Beer A=abc
Absorção no UV
Amostras em solução.

Vantagens:
Rapido e relativamente sensível.
Não destrói a amostra.

Desvantagens:
Qualquer componente do alimento presente na amostra que absorva no comprimento de onda do UV é um potencial contaminante.

Absorção no UV
Método de Combustão do Nitrogênio

Desenvolvido por Jean Baptiste Dumas em 1831.

As amostras são queimadas com um fluxo de oxigênio puro e temperaturas elevadas (700-1000°C).

É um método apropriado para todos os tipos de alimentos.
Método de Dumas
As amostras são pesadas em cápsula de estanho e colocado em um reator de combustão.

O nitrogênio é então quantificado por cromatografia gasosa.

Método de Dumas
(conc)
Digestão
Proteína + H2SO4 -> (NH ) SO4 + CO2 + SO2 + H2O
4
(aq)
2
N da proteína reduzido e tranformado em sulfato de amônia.
Neutralização/Destilação
(NH4) SO4 + NAOH -> Na2SO4 +
2
2
2
H2O + NH3
2
2
Solução de ác. bórico + indicador
Titulação
NH4H2BO3 + HCl -> H3BO3 + NH4Cl
Conversão do teor de nitrogênio para o teor de proteínas
Fator de conversão 6,25
Método de Biureto
Reativo do Biureto
Cu + Proteína = Complexo quadrado planar
Ligações peptídicas reagindo com íons cúpricos
Cor violeta
Proporcional ao teor de proteínas
Aplicações
Soro ou plasma sanguineo
Urina
Saliva
Líquido cérebro espinhal
Vantagens/Desvantagens
Interferência de substâncias Cu
Cores formadas
Rápido, baixo custo e pequena variação de absortividade
Método por Infravermelho
Josué Jandrey
Vicente Ferreira

Bibliografia
Determination of total protein by spectrophotometry: advantagens and disadvantages of proposed methods
Food Analysis Book
sitebiomedico.br.tripod.com/proteinas.htm
Método de Dumas
Vantagens
Não utiliza produtos químicos perigosos.

É relativamente rápido, pode ser feito em poucos minutos.

Com equipamentos modernos podemos analisar uma quantidade grande de amostras;

Não gera resíduos tóxicos.

Desvantagens:
Requer equipamentos caros.

Interferência de nitrogênio não proteico.

O método é baseado na absorção de radiação no infravermelho das proteínas.
As amostras para o IR podem ser com o uso de filmes hidratados em filmes secos, dispersão de pó sobre janelas ou pastilhas de KBr.

Algumas técnicas atuais não utilizam nenhuma preparação da amostra para evitar a desnaturação das proteínas.
Método por Infravermelho

Vantagens: rapidez na analise, facilidade de operação e preparo da amostra.

Desvantagens: alto custo do equipamento e a dificuldade na calibração para o seu uso.

Introdução
Proteínas são polímeros de aminoácidos
Alta massa molecular
Variedade de funções
Fontes de aminoácidos essenciais
Qualidade e valor nutricional
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