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TÉCNICA HISTOLÓGICA

Facultad de Medicina UNAM, Departamento de BIología Celular y Tisular; Instructora de Biología Celular e Histología Médica
by

Dra Adris DeHouse

on 16 August 2015

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TÉCNICA
HISTOLÓGICA

TÉCNICA
HISTOLÓGICA ORDINARIA:

Conjunto de procedimientos físicos y químicos que preparan el material biológico para observar, examinar y analizar a través de un microscopio sus componentes morfológicos
1. TOMA DE MUESTRA
Calidad y fidelidad morfológica depende de la prontitud y el cuidado aplicado para obtener la muestra
E.M Adriana Miguel Álvarez
1141

Departamento de Biología Celular y Tisular
Biología Celular e Histología Médica

Puede ser:

Biopsia: Operación quirúrgica exprofesa o transoperatoria (corroborar diagnóstico de una lesión)

Necropsia: Obtención inmediata de la muestra de seres muertos.
Legrado
Sacabocados
Punción.
Endoscopía
CORTE
INCISIONAL
EXCISIONAL
2. FIJACIÓN
- Detener vida celular e impedir modificaciones postmortem (procesos autolíticos)
- Inmovilización por: Coagulación o Precipitación
FIJADORES.
- Oxidantes o Reductores
(más comunes son el formaldehído, glutaraldehído)

- Confieren mejores condiciones de aplicación

- Gaseoso, Líquidos, Sólidos
Importancia:
- Fijadores simples: Formol o formalina al 40% Sol 10% (buen poder de penetración y difusión)

- Fijadores compuestos:
Formol-P 10%
Formol-Cloruro de calcio (preservar lípidos)
Líquido fijados de Boüin (mejor resultados en tricrómicos de Masson)
Fijador de Carnoy: (demostrar cromosomas o glucógeno)
CONSIDERACIONES IMPORTANTES:

a) Estudio para el que se usa: Fijador universal o algunos especiales

b) Tamaño de la muestra

c) Volumen del fijador

d) Tiempo de fijación: 1) Colocar inmediatamente
2) Mantener cierto tiempo antes de tratar
e) Temperatura (4°C)

f) Almacenamiento (Lavado; alcohol 70%)

g) Lavado (eliminación del fijador)
3. INCLUSIÓN
Infiltración de tejidos fijados con
sustancias de inclusión

que se incorporan al interior de la célula o tejido para dar soporte.
Sustancias de Inclusión son Solubles en:
- Agua (carbowax, glicol metacrilato)
- Solventes orgánicos (parafina, celoidina y resinas epóxicas)
1. Deshidratación
Remover agua para que el solvente actúe en baños crecientes y el bloque quede duro (alcohol: etílico, isopropílico; dioxano y cloroformo)
2. Diafanización
Remover alcohol por medio de líquidos intermediarios del alcohol y la parafina como el Xilol (con alto IR torna transparentes los tejidos)
3. Infiltración
4. FORMACIÓN DEL
BLOQUE DE PARAFINA:
Sustituir solvente por parafina (2 baños)
Molde se llena de parafina líquida
pura con la muestra bien orientada.
Se enfría, se solidifica y se forma el bloque
4. MICROTOMÍA
Uso de microtomo para seccionar
en cortes delgados y grosos uniforme el bloque de parafina
De Rotación tipo Minot:
De Deslizamiento:
De uso más frecuente, cortes seriados de 4-7 micras para reconstrucciones tridimensionales, comparar tinción y topografía
Para celoidina o porciones voluminosas de tejido, cortes de atrás hacia adelante.
La cuchilla o
navaja debe ser

- Afilada perfectamente:
a) sobre vidrio despulido con movimiento y rotación periódica a las dos superficies
b) con sustancias abrasivas como grano grueso y grano fino

- Limpiada perfectamente, de lo contrario las partículas del abrasivo pueden dañar el tejido
OBTENCIÓN DE CORTES:
a) Sujetar bloque con abrazaderas y la muestra orientada
b) Alinear sistema de sujeción con la superficie del bloque.
c) Desgastar bloque de parafina hasta alcanzar el tejido.
d) Marcar en el dial del microtomo: micrómetros de grosor
e) Accionar la manivela que desplaza la abrazadera con el
bloque de parafina para obtener los cortes

Obtenidos los cortes se
recogen con unas pinzas
o pinceles finos.
Extensión y adhesión de cortes al portaobjetos:
Cortes arrugados
Superficie del
baño de flotación
Estirar con pinzas por
tracción en los extremos
Recoger y adherir cintas
en el portaobjetos
1. Agua destilada, bicromato de K y gelatina al líquido de flotación para adhesión.

2. Extensión previa de una gota sustancia adherente (albúmina de Mayer o L-lysina) se deja secar
5. TINCIÓN
- Estructura celular o tisular adquiere color por acción de una Sustancia colorante,
- Estructura no se decolora al lavar
- Distinción de componentes
COLORANTES:

NATURALES:
- Animales: Carmín de la cochinilla (rojo intenso) da C. de Best (glucógeno), C. de Mayer (mucina), C. de litio (células fagocíticas)

- Vegetales: Hematoxilina del "palo de campeche"; Safranina de una liliacea; o la Orceína del líquen
ARTIFICIALES:
Derivados
de anilina
Sales orgánicas
Coloración por modificación del anillo bencénico
Se clasifican en:
Ácidos

Básicos

Neutros

Ácido Negativa
Eosina (acidófilas)
Citoplásmicas
Básico Positiva
Hematoxilina (basofilia)
Nucleares
Ácida y Neutra
Wright, Leischman
básica (metacromasia)
Sudán Negro,
No sal No iónico Sudán III, IV
Componente Carga eléctrica Ejemplo
posee color
Indiferentes
CLASIFICACIÓN DE COLORACIONES
Coloración
Directa o sustantiva
Tinción al contacto que indica afinidad entre colorante y el tejido
COLORACIÓN
Progresiva: Marcha misma de coloración
>tiempo >intensidad

COLORACIÓN
Simple:
1 solo colorante
COLORACIÓN
Ortocromática:
Colorante tiñe estructura con su propio color,
Gran mayoría de los colorantes

Pancromática: Por actividad tintorial de colorantes neutros, los componentes adquieren tonalidades de la mezcla de ellos
COLORACIÓN
METACROMÁTICA
Colorante cede su propio color a una estructura
celular o tisular y tiñe de color distinto a otras.
Indirecta o adjetiva
Uso de S. intermedias para
la adhesión (
Mordiente
) antes de la solución. En combinación con el colorante se forma una "laca"
Regresiva: Sobrecoloración
y aplicación del diferenciador
que elimina exceso.
>tiempo <intensidad
Se detiene en la tinción deseada
Compuesta o combinada:
Varios colorantes para destacar
- Simultánea: mezcla de colorantes en una solución (Van Gieson, Mallory, Shorr)
-Sucesiva: soluciones sucesivas de colorantes (HyE)
- Protección.
1. Colocar encima del corte una gota de una sustancia
adherente, diluida en xilol (bálsamo de Canadá o resinas sintéticas, con IR similares a los del vidrio)
2. Colocar encima un cubreobjetos, cuidando que no
queden burbujas de aire entre la resina.
3. Las láminas se colocan en una platina caliente durante 24 a 48 horas
6. MONTAJE.
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