Urticária vibratória

Para identificar a base genética da

doença, os cientistas realizaram

análises genéticas, incluindo o

sequenciamento de DNA, em 36 membros

afetados e não afetados das três famílias.

Eles encontraram uma única mutação no

gene ADGRE2 compartilhada por membros

das famílias com urticária vibratória e

ausente em pessoas não afetadas.

Foram utilizados mais de 1000 indivíduos

não afetados, com uma linhagem genética parecida com a das três famílias.

Semelhança entre

fenótipos e origem

indicam um ancestral comum.

Relato de casos

Metodologia

Efeitos da vibração em pessoas com urticária vibratória

Proteína coficada pelo gene ADGRE2

Degranulação de mastócitos

Resultado da vibração nos pacientes analisados

Heredogramas:

• Três famílias libanesas com herança autossômica dominante para Urticária vibratória;
• Símbolos cheios representam os afetados;

Vortex Challenge:

• Estimulacão mecânica repetitiva que mimetiza consequências de situações do dia-a-dia;
• Resultado: Eritrema, edema e prurido (além de sintomas associados) que aparecem em 5 minutos e desaparecem em 60 minutos;
• Resultado negativo para dermatografismo.

Heterogeneidade alélica?

Avaliação dos participantes:

• Clínica;
• História familiar;
• Resultados do "Vortex Challenge" no antebraço;
• Histamina sérica;
• Biópsia da pele.

Análise genética das famílias com urticária vibratória:

• Scan linkage;
• Sequenciamento do exoma;
• Sequenciamento Sanger.

Avaliação dos efeitos da substituição da pC492Y.

Heredograma das famílias libanesas analisadas

Degranulação dos mastócitos:

• Coloração imunohistoquimica de triptase em biópsia obtidas de pele;
• Triptase é outro mediador que conduz sinais das reações alérgicas;
• Grânulos secretados (setas);
• Triptase extracelular (vermelho difuso);
• Liberação difundida em pacientes e limitadas em controles.

p.C492Y

Histamina no processo alérgico

ADGRE2, quando mutado:

Expressão e processamento do ADGRE2

Pacientes escolhidos:

Família 1:

• 1-12 /1-14 (pai e filho)
• Controle familiar (não afetado)

Família 2:

• 2-11/2-12 (gêmeas monozigóticas)
• Controle não relacionado (não afetado)
• Mastócitos Humanos estocados (congelados)

proteína completa

Transfecção de Mastócitos LAD2

produtos clivados

Controles x Mutantes:

Normal em níveis basais (proteína completa com as subunidades alpha e beta associadas).

Por quê??

Relato de casos

Gradação de degranulação:

Subunidade alpha inibe a beta quando unidas...

Adesão:

• Polilisina
• Sulfato de Dermatan
• Anticorpo monoclonal 2A1

p.C492Y

p.C492Y está localizada no sítio proteolítico da proteína G, por isso que afetaria a clivagem implicando na dissociação exacerbada das 2 subunidades ???

Mediador: β-Hexosaminidase (lisozima)

Não mutado

Presença de cálcio!

p.[C492Y; S518A]

COMO CONFIRMAR?

p.S518A

Vetor Controle

Medida de histamina sérica pós Vortex Challenge:

• Medida de histamina maior dos pacientes do que nos controles;
• Picos em 5 min e normalizaram em 60 min;
• O aumento do nível sérico de histamina indica que os mastócitos lançaram o seu conteúdo, desempenhando um papel de resposta nas reações alérgicas. Tal resposta causará a sintomatologia;
• Isto sugere que uma resposta normal à vibração, que não cause sintomas, é exagerada em pacientes com Urticária Vibratória.

Conclusão

Vibração induz dissociação de subunidades na proteína ADGRE2

Quebra dependente, vibração induz desgranulação

Resposta à vibração:

• Células que receberam o vetor controle tem uma desgranulação maior do que constitutivamente
• Células LAD2 com ADGRE2 transferido sem mutação possuem resposta maior que a do controle
• Células com a mutação p.C492Y possui resposta maior ainda

O que é urticária?

Mesmo sem a mutação ocorre uma resposta nas células com ADGRE2 = ADGRE2 é de alguma forma sensível à vibração

Além disso, com o p.C482Y a resposta é maior = hipermorfismo, ganho de função

Erupção cutânea causada por algum agente irritante (CRIADO et al., 2005).

• Identificação de uma nova variante com sentido em ADGRE2 na base da patologia autossômica dominante, urticária vibratória
• Sugestão de que a mutação p.C492Y gera um ganho de função desestabilizando a relação inibitória entre as subunidades alfa e beta gerando a resposta de desgranulação de mastócito à vibração
• Papel fisiológico do ADGRE2 nos mastócitos
• Hipótese do papel do ADGRE2 na detecção e resposta a estímulos físicos.

Coloração verde: GFP, indica a subunidade beta ligada a membrana

Coloração vermelha: anticorpo 2A1, indica subunidade alfa

Urticária: lesões eritêmato-edematosas

Classificação

Mecanismo etiopatogênico

Objetivos

Descrever a identificação de um novo variante no gene ADGRE2 em famílias com rara, e hereditária, Urticária Vibratória, implicando o Receptor acoplado a proteína G (GPCR) de adesão (a própria proteína ADGRE2) como um mecanorreceptor em mastócitos.

Fonte: Zuberbier

et al., 2006, apud Valle, 2009.

Painel B: análise da colocalização das subunidades alfa e beta (Coeficiente Pearson)

Painel C-D: comparação da desgranulação de mastócitos em repouso e após a vibração.

Urticária vibratória

Autores:Steven E. Boyden, Ph.D., Avanti Desai, M.S., Glenn Cruse, Ph.D., Michael L. Young, M.S.P.H., Hyejeong C. Bolan, M.S.N,

associada com uma substituição com sentido no gene ADGRE2