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Transcript

pFLD1 Vector

Elementos del vector:

Zeocina

Miembro de la familia de la bleomicina / fleomicina de antibióticos aislados a partir de Streptomyces.

Muestra una toxicidad fuerte contra bacterias, hongos, plantas y líneas celulares de mamífero

  • Vector usado ​​para expresar proteínas recombinantes en Pichia pastoris.
  • El vector es inducido en altos niveles de metanol para la expresión del gen de interés y se puede utilizar en cualquier cepa de Pichia, incluyendo:

X-33

GS115

SMD1168H

KM71H

Vectores de expresión

Invitrogen

Vector pAO815

pGAPZ A, B, & C

El vector pPIC9K incluido en este kit permite el aislamiento de las inserciones de múltiples copias de un método in vivo, con el fin de probar si el aumento del número de copias de su gen recombinante dará lugar a un aumento posterior en la expresión de la proteína secretada.

Este método in vivo utiliza la resistencia a la geneticin ® (sulfato G418) para la detección de posibles inserciones de múltiples copias.

pGAPZ B

pGAPZ A

pGAPZ C

pGAPZ A, B, & C

  • La enzima gliceraldheido-3-fosfato deshidorgenasa (GAPDH) es constitutivamente expresada en altos niveles en muchos organismos, incluyendo Pichia pastoris.

El vector pPIC9K es idéntica a pPIC9 excepto por la presencia del gen de resistencia a kanamicina para la selección in vivo de las inserciones de múltiples copias.

pPIC9K es funcional en cepas de Pichia GS115 y KM71. Las características adicionales del vector pPIC9K incluyen:

•9276 pb vector de fusión

•Cuatro sitios de restricción únicos: SnaB I, EcoR I, Avr II, Not I

•Expresión secretada de su gen usando la señal de secreción de α-factor

•Para la expresión, el gen debe ser clonado en el marco con el codón de iniciación de la secuencia señal.

•Para la sustitución de genes en AOX1 en GS115, linealizar con Bgl II

•Para la inserción de AOX1 en GS115 o KM71, linealizar con Sac I

•Para la inserción en HIS4, linealizar con Sal I (His + Mut genera en GS115 + y + en sus MutS KM71)

  • El promotor del gen(GAP) ha sido recientemente caracterizado y mostrando como una proteína recombinante a altos niveles en P. pastoris, dependiendo de la fuente de carbono. El nivel de expresion que muestra el promotor GAP puede ser significativamente mas alto que el que se obtiene con el promotor de AOX1

Vectores de Pichia de Invitrogen

Cecilia Guadiana Alvarez

Georgina Guzmán Gonzalez

Valeria Berenice Picón Galindo

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