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IF, ELFA, FLUOROSPOT
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Inmunofluorescencia y Elfa
Yoana Pimentel T.M.MSc. 2022
Equipos
Fluorescencia
Observado inicialmente por Sir George Stokes (1852)
Explicado físicamente por Alexander Jablosnski (1935)
Marketing
Fundamentos
Características
Características
Propiedad que tienen ciertos elementos químicos (fluoróforos, fluorocromos) de absorber una longitud de onda determinada y luego emiten otra luz de una mayor longitud de onda.
Es un fenómeno de luminiscencia de vida corta, emitida simultáneamente con la excitación.
Moléculas
Fluoróforo: Parte de una molécula que le imparte la propiedad de fluorescencia
Fluorescencia: Marcador colorante fluorescente empleado en investigación para crear contraste en zonas determinadas de los especímenes.
El fluorocromo de elección es FITC (Isotiocianato de Fluoresceína) por ser barato, tiene un alto rendimiento cuántico y es relativamente hidrofílico. Desventaja la rápida pérdida de la fluorescencia bajo una intensa iluminación .
FITC es derivado del Xanteno es un compuesto orgánico heterocíclico de color amarillo.
La fluoresceína absorbe luz azul y emite luz verde.
Fluoróforo y Fluorocromos
Fluoróforo: Parte de una molécula que le imparte la propiedad de fluorescencia, compuestos heterociclicos o hidrocarburos poliarómaticos
Fluorocromos
Marcador colorante fluorescente empleado en investigación para crear contraste en zonas determinadas de los especímenes.
Tejidos y células
Tejidos
Se utilizan tejidos principalmente de roedores , los riñones o el hígado del ratón.
Se describen el uso de células de cultivo de tejidos en monocapa .(1974 Parker y Kerby)
Hoy en día , el sustrato de elección para la detección de ANA es Células Hep-2 que han sustituido el uso de tejidos de roedores y más recientemente la prueba comercial ANA.
HEP-2
Las células epiteliales humanas (HEp-2), originarias de un carcinoma laríngeo humano, permiten el reconocimiento de más de 30 patrones nucleares y citoplásmicos diferentes que se dan por más de 50 autoanticuerpos diferentes están asociados con diversas condiciones autoinmunes.
HEP-2
Equipos
Equipos
Microscopios
Microscopios
Microscopios utilizan luz incidente o luz transmitida ya sea halógeno o lámparas de Hg.
Tipos
Tipos y patrones
HR
Muestras
Muestras
Patrones
Patrones
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Aplicaciones
HR
ELFA
ENZYME LINKED FLUORESCENT ASSAY
Ensayo de fluorescencia ligado a enzima
Metodología basada en inmunoensayo tipo sandwich de un solo paso con detección de fluorescencia.
Otras técnicas
HR
Componentes
1. SPR (Solid Phase Receptacle ) esla fase sólida y esta recubierto con Ac monoclonal anti humano.
2. Las tiras contienen el conjugado (ac momoclonal con fosfatasa alcalina) , el sustrato 4-MUP ( 4 methyl umbelliferil phosphate ) y DEA fluorescente (Diethanolamine) y los buffers o tampones.
Componentes
Medición
La reacción ocurre en el SPR mediante la formación del sandwinch con el conjugado actúa como fase sólida de la reacción.
El sustrtato 4-MUP es hidrolizado por la enzima a 4 methyl umbelliferone que se mide a 450 nm.
La intensidad de la fluorescencia es inversamente proporcional a la concentración de antígenos de la muestra.
Medición
Aplicaciones
Mini vidas y Vidas
Equipos
Este sistema VIDAS utiliza la técnica ELFA, combinando el método ELISA con una lectura final en fluorescente azul, asegurando excelentes resultados en materia de sensibilidad y especificidad.
Todas las etapas de la prueba se realizan automáticamente por el sistema.