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Transcript

DNA Chips

Christo,Emir

Was sind DNA Chips?

Was sind DNA Chips?

- auch Microarrays oder Genchips genannt

- Plättchen aus Glas, Plastik, Silikon oder Gold

- Plättchen in Felder unterteilt (Zellraster)

Funktion der Microarrays

Funktion

- gibt Auskunft darüber, welche Gene zu einem bestimmten Zeitpunkt in der Zelle aktiv sind

- liefert Informationen über Funktionszustand und Regulation bestimmter Gene

- liefert Informationen über den Einfluss endogener und exogener Faktoren

- Fluoreszenzsignal kann mit Messgerät qualitativ und quantitativ ausgewertet werden

- gibt an wie hoch die Expression in der Zelle ist

Verschiedene Arten

Verschiedene Arten

- Dna Microarrays

- Protein Microarrays

- Gewebe Microarrays

- Antikörper Microarrays

2 Typen

2 Typen

Spotted Arrays

Situ Arrays

Sonden werden auf Array aufgebracht und immobolisiert

Oligos werden in situ via Photolithographie auf dem Array direkt synthetisiert

cDNA Chips

- 10.000 Gene auf einem Chip

- Oberfläche aus beschichtetem Glas

- hohe Sensitivität

- niedrige Spezifität wegen vieler Fehlhybridisierungen

cDNA und Oligo Chips

Oligo Chips

- 9.000 Gene auf einem Chip

- Oberfläche aus beschichtetem Glas oder Sizilium

- sind in Felder angeordnet

- jeder Spot erkennt ein Gen

Aufbau und Herstellung der DNA Chips

Aufbau und Herstellung der DNA Chips

- Kleine Glasplättchen, die in Felder unterteilt sind

- DNA Sequenzen werden durch PCR vervielfältigt

- Länge von 20 Nukleotiden

- In jedes Feld PCR-Kopien (einzelsträngig) am Glas befestigt

- Durch einen Laborroboter

(vgl. Tintenstahldrucker)

-Feine Düsen in Lösung mit Kopie der DNA für bestimmtes Feld

-Punktmuster mit 500.000 Feldern

- In jedem Feld kleine DNA-Molekül-Gruppe mit bestimmter Sequenz

Hybridisierung

Hybridisierung

- Zuvor isolierte RNA mit reversen Transkription zu cDNA

- cDNA wird mit Farbstoff markiert

- cDNA auf Objektträger auftragen und erhitzen

- Denaturierung -> Doppelstränge zu Einzelsträngen

- cDNA die sich nicht gebunden hat, wird nach Hybridisierung abgewaschen

- Markierte cDNA lagert sich an

- Enstandene cDNA-Chips trocknen lassen

- Bereit zur Auswertung

Genomscanning

- DNA Chips welche alle Gene des menschlichen Genoms enthalten

- DNA auf verschiedene Allele oder Genexpressionsmuster untersucht

- zur Feststellung genetisch bedingter Krankheiten oder Anlagen dazu

-ermöglicht vorsorge gegen Ausbruch dieser Krankheiten

-ethisch umstritten (könnte Angst schüren)

Transkriptomanalyse

-Einsetzen von Chips=Untersuchen von 100-1000 Genen

-Krebsforschung

-Muster der Genomen wird sichtbar

-mRNA beider Typen isoliert

-mithilfe von Transkriptase in DNA umgewandelt und markiert

-Gemisch in Chips gegeben und analysiert

mRNA-Molekül= Transkriptom

Anwendungsbereiche

-Früherkennung von Krebs

-Lebensmittelherstellung z.B Joghurt

-rechtlich vorgeschriebene Qualitätskontrollen auf Krankheitserreger

Ende

Danke für eure Aufmerksamkeit

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