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- auch Microarrays oder Genchips genannt
- Plättchen aus Glas, Plastik, Silikon oder Gold
- Plättchen in Felder unterteilt (Zellraster)
- gibt Auskunft darüber, welche Gene zu einem bestimmten Zeitpunkt in der Zelle aktiv sind
- liefert Informationen über Funktionszustand und Regulation bestimmter Gene
- liefert Informationen über den Einfluss endogener und exogener Faktoren
- Fluoreszenzsignal kann mit Messgerät qualitativ und quantitativ ausgewertet werden
- gibt an wie hoch die Expression in der Zelle ist
Verschiedene Arten
- Dna Microarrays
- Protein Microarrays
- Gewebe Microarrays
- Antikörper Microarrays
Spotted Arrays
Situ Arrays
Sonden werden auf Array aufgebracht und immobolisiert
Oligos werden in situ via Photolithographie auf dem Array direkt synthetisiert
- 10.000 Gene auf einem Chip
- Oberfläche aus beschichtetem Glas
- hohe Sensitivität
- niedrige Spezifität wegen vieler Fehlhybridisierungen
Oligo Chips
- 9.000 Gene auf einem Chip
- Oberfläche aus beschichtetem Glas oder Sizilium
- sind in Felder angeordnet
- jeder Spot erkennt ein Gen
- Kleine Glasplättchen, die in Felder unterteilt sind
- DNA Sequenzen werden durch PCR vervielfältigt
- Länge von 20 Nukleotiden
- In jedes Feld PCR-Kopien (einzelsträngig) am Glas befestigt
- Durch einen Laborroboter
(vgl. Tintenstahldrucker)
-Feine Düsen in Lösung mit Kopie der DNA für bestimmtes Feld
-Punktmuster mit 500.000 Feldern
- In jedem Feld kleine DNA-Molekül-Gruppe mit bestimmter Sequenz
Hybridisierung
- Zuvor isolierte RNA mit reversen Transkription zu cDNA
- cDNA wird mit Farbstoff markiert
- cDNA auf Objektträger auftragen und erhitzen
- Denaturierung -> Doppelstränge zu Einzelsträngen
- cDNA die sich nicht gebunden hat, wird nach Hybridisierung abgewaschen
- Markierte cDNA lagert sich an
- Enstandene cDNA-Chips trocknen lassen
- Bereit zur Auswertung
- DNA Chips welche alle Gene des menschlichen Genoms enthalten
- DNA auf verschiedene Allele oder Genexpressionsmuster untersucht
- zur Feststellung genetisch bedingter Krankheiten oder Anlagen dazu
-ermöglicht vorsorge gegen Ausbruch dieser Krankheiten
-ethisch umstritten (könnte Angst schüren)
-Einsetzen von Chips=Untersuchen von 100-1000 Genen
-Krebsforschung
-Muster der Genomen wird sichtbar
-mRNA beider Typen isoliert
-mithilfe von Transkriptase in DNA umgewandelt und markiert
-Gemisch in Chips gegeben und analysiert
mRNA-Molekül= Transkriptom
-Früherkennung von Krebs
-Lebensmittelherstellung z.B Joghurt
-rechtlich vorgeschriebene Qualitätskontrollen auf Krankheitserreger
Danke für eure Aufmerksamkeit