Introducing
Your new presentation assistant.
Refine, enhance, and tailor your content, source relevant images, and edit visuals quicker than ever before.
Trending searches
Se obtienen por un proceso de clonación y amplificación por cultivo
Mayor especificidad
Bicatenarias
Mayor tamaño y sensibilidad
Marcadores
MÉTODOS DIRECTOS
MÉTODOS INDIRECTOS
Más utilizados
Fósforo-32
Se utilizan en técnicas como Nothern blot
Tiritio
La detección del hírido se realiza mediante autorradiografía
El marcaje de la sonda se produce introduciendo nucleótidos radiactivos que contienen alguno de estos isótopos
Se consigue una gran sensibilidad
Más utilizados
Biotina
La detección del híbrido requiere métodos indirectos de revelado basados en:
Digoxigenina
Moléculas de gran tamaño que se acoplan a los nucleótidos
- La afinidad química de moléculas
- En métodos inmunológicos
Su sensibilidad es menor
MARCAJE
ESQUEMA
Necesitaremos:
Se utiliza para:
- Marcar sondas de ADN bicatenario obtenidas normalmente por tecnología de ADN recombinante
- ADNasa I
- ADN polimerasa I bacteriana
- Mezcla de desoxirribonucleótidos trifosfato, uno de ellos está marcado con un isótopo radiactivo o hapteno
La ADNasa I a bajas concentraciones y en presencia de cationes de magnesio rompe enlaces fosfodiéster entre dos nucleótidos consecutivos de la cadena al azar, produce mellas.
La ADN polimerasa I intenta reparar las mellas. Para ello gracias a su actividad exonucleasa 5'->3', va eliminando nucelótidos uno a uno desde la mella hacia el extremo 3'.
A la vez, gracias a su actividad polimerasa 5'->3', incorpora desoxirribonucleótidos en el extremo 3'-OH libre de la mella sintetizando ADN complementario a la hebra intacta
Los nuevos nucleótidos que incorpora se toman del medio de reacción y uno de ellos está marcado. Así, la ADN polimerasa desplaza la mella a lo largo de la cadena de ADN sustituyendo nucleótidos sin marcar por nucleótidos marcados
ATENCIÓN
En este vídeo se ve de una forma muy simple y sencilla lo que ocurre en esta técnica.
Métodos más utilizados:
PURIFICACIÓN
Eliminación de los nucleótidos libres marcados para evitar el ruido de fondo o interferencias en los resultados de las técnicas de hibridación
- Cromatografía por exclusión de tamaño
- Cromatografía de adsorción