Soutenance TN09

Sigurlaug Skírnisdóttir

Viggó Þór Marteinsson

Pauline Vannier

Tout le laboratoire de Matis

Karim El-Kirat

Dominique Piget

Anne et Eugène

Remerciements

Chromatographie d'affinité

• Séparation des protéines par une interaction spécifique.
• IMAC (immobilized metal affinity chromatography) avec une colonne Nickel.

http://biochimiedesproteines.espaceweb.usherbrooke.ca/5e1.html

fig.6

fig.8

fig.7

Exemple de purification

Travail effectué

aar4696C1 (55kDa)

A

1 2 3 4 5

extraction, purification et tests enzymatique

clonage du gène

E

Vérification de l'expression

Purification et identification de la fraction contenant l'enzyme

B

C

D

116

97.2

66.4

55.6

42.7

34.6

27.0

fig.10

1 2 3 4 5 6 7 8 9

Ligne 1: Surnageant NEB10

Ligne 2: Débris cellulaire NEB10

Ligne 3: Ladder

Ligne 4: Surnageant aar4696C1

Ligne 5: Débris cellulaire aa4696C1

116

97.2

66.4

55.6

42.7

34.6

27.0

Ligne 1: Surnageant NEB10

Ligne 2: Débris cellulaire NEB10

Ligne 3: Ladder

Ligne 4: Surnageant aar4696C1 avant purification

Ligne 5: Fraction A

Ligne 6: Fraction B

Ligne 7: Fraction C

Ligne 8: Fraction D

Ligne 9: Fraction E

fig.9

fig.11

sul3466Rx1 (52kDa)

A

1 2 3 4 5 6 7 8 9

Vérification de l'expression

C

B

Run sans imidazole dans le Binding Buffer.

--> Une protéine avec faible affinité s'accroche.

Run avec 20mM d'imidazole dans le Binding Buffer.

--> Une protéine avec faible affinité ne s'accroche pas.

E

D

B

D

fig.13

C

fig.15

140

100

70

50

40

35

25

15

10

Ligne 1: surnageant NEB10

Ligne 2: débris cellulaire NEB10

Ligne 3: Ladder

Ligne 4 à 6: surnageant sul3466Rx1

Ligne 7 à 9: débris cellulaire sul3466Rx1

1 2 3 4 5 6 7 8

fig.4

1 2 3 4 5 6 7 8

fig.5

fig.12

100

70

50

40

35

25

15

Ligne 1: Surnageant NEB10

Ligne 2: Surnageant aar4696C1 avant purification

Ligne 3: Fraction A

Ligne 4: Fraction B

Ligne 5: Fraction C

Ligne 6: Fraction D

Ligne 7: Fraction E

Ligne 8: Ladder

fig.16

140

100

70

50

40

35

25

Ligne 1: surnageant NEB10

Ligne 2: Ladder

Ligne 3: Surnageant sul3466Rx1 avant purification

Ligne 4: Fraction A (flow trough)

Ligne 5: Fraction B

Ligne 6: Fraction C

Ligne 7: Fraction D

Ligne 8: Fraction E

fig.14

Résultats

Soutenance TN09 - Matís

Liste des enzymes

1er septembre 2015 - 12 février 2016

fig.17

Louis Bourlon

fig.3

Tuteurs Matís: Sigurlaug Skírnisdóttir, PhD

Viggó Þór Marteinsson, PhD

Tuteur UTC: Karim El-Kirat

Conclusion

MicroB3



• “Microbial Biodiversity, Bioinformatics and Biotechnology".
• Janvier 2012 - Janvier 2016.
• Analyse de l'ecosysteme marin et applications biotechnologique.

• De nombreux problèmes, et donc de nombreux enseignements.
• Stage en fin de projet, amenant peut être de la précipitation.
• Un processus complexe et intéressant, avec notamment la purification IMAC.
• Découverte du monde de la recherche.
• Satisfaction aussi bien au niveau du travail que des progrès scientifique et linguistique.



fig.2

Matís

• Entreprise gouvernementale créée en 2007.
• Environ 100 employés.
• Biotechnologie / alimentaire.
• Travail au sein de la branche "Microbiologie".

fig.1