Teste Limite
- Animais adultos, jovens, saudáveis e de estirpes laboratoriais de uso corrente devem ser empregados.
- Fêmeas devem ser nulíparas (que nunca teve filhotes) e não-grávidas.
- 8 a 12 semanas de idade .
- Peso compreendido num intervalo de ± 20% do peso médio dos animais previamente expostos.
Seleção das espécies de animais
A espécie preferida é o rato, mas podem ser utilizadas outras espécies de roedores.
Os animais podem estar enjaulados
por grupos de dose, mas o número de animais em cada gaiola não deve interferir com a observação clara.
Fêmeas são geralmente ligeiramente mais sensíveis.
https://www.google.com.br/search?q=animais+enjaulados+por+grupo+deSkCeQ_AUIBig B#imgrc=_mhDiHMjca--bM%3A
.
A iluminação deve ser artificial, com sequências de 12 horas de luz e 12 horas de escuridão.
Condições de alojamento e alimentação
Quando o teste é efetuado com machos deve ser fornecida justificação adequada.
Utilizado principalmente em situações em que o analista tem informação indicativa de que a substancia não apresenta toxicidade acima das doses limite regulamentadas.
- Temperatura 22°C (±3°C).
- A umidade relativa: mínimo 30% e de preferência não superior a 70%, exceto durante a limpeza do quarto.
- Objetivo 50% a 60%.
- Dietas convencionais de laboratório podem ser utilizadas com suprimento ilimitado de água potável.
Preparo dos animais
Animais escolhidos ao acaso.
Mantidos nas suas gaiolas durante pelo menos 5 dias antes das dosagens para permitir a aclimatação às condições laboratoriais.
O volume não deve exceder 1ml /100g de peso corporal.
https://www.google.com.br/search?q=animais+enjaulados+por+grupo+de+doses&espv=2&biw=1366&bih=623ite=webhp&source=lnms&tbm=isch&sa=X&ved=0ahUKE wjnssj86oXMAhXICpAKHXSkCewQ_AUIBigB#tbm=isch&q=preparo+de+animais+para+testes&imgdii=jFk8mBXVFEOwVM%3A%3BjFk8mBXVFEOwVM%3A%3Bv3hVgcYkYpBPTM%3A&imgrc=jFk8mBXVFEOwVM%3A
Soluções aquosas, 2ml /100g de peso corporal.
As doses devem ser preparadas pouco tempo antes da administração, devendo ser conhecida a estabilidade do produto.
Informação sobre a toxicidade da substância:
Obtida a partir de conhecimento sobre os compostos semelhantes ou misturas semelhantes já testadas, levando em consideração a identificação e porcentagem dos componentes conhecidos e sua importância toxicológica.
- É recomendado a utilização de uma solução aquosa ao invés de uma solução em óleo , ou por outro meio.
Preparo das doses
- Substâncias de ensaio devem ser administradas num volume constante através da variação da concentração na preparação da dose.
O volume máximo de líquido que pode ser administrado de uma só vez depende do tamanho do animal de ensaio.
Dados
Devem ser fornecidos dados sobre a cada animal.
Caso haja pouca ou nenhuma informação sobre a sua toxicidade, o teste deve ser realizado.
- Todos os dados devem ser resumidos em um quadro, indicando, para cada grupo de experiência:
- o número de animais utilizados,
- o número de animais que apresentam sinais de toxicidade,
Descrição do método
- o número de animais encontrados mortos durante o ensaio ou abatidos por intervenção humana,
- evolução temporal dos efeitos tóxicos e reversibilidade ;
- o tempo da morte de cada animal e uma descrição;
- resultados da autópsia.
Relatório de ensaio
A substância de teste.
Veículo (se for o caso): Justificação da escolha do veículo, que não seja água.;
Animais de ensaio: Espécie / estirpe utilizada; condições microbiológicas dos animais, quando conhecido;
Resultados
Número, idade e sexo dos animais (incluindo, quando necessário, uma justificação para o uso de machos em vez de fêmeas);
Origem e condições de alojamento e
- Tabela dos dados de resposta e da dose para cada animal ;
dieta.
- Tabelas de peso corporal e alterações do peso corporal;
Condições de ensaio
Procedimento
- Sobre a formulação da substância de ensaio, ;
- Data e hora da morte, se antes do sacrifício previsto;
- Evolução temporal do aparecimento de sintomas de toxicidade e sua reversibilidade, para cada animais;
- Resultados da autópsia e resultados histopatológicos para cada animal, se disponíveis.
- Relativos à administração da substância de ensaio, incluindo volumes de dosagem e tempo de dosagem;
- Detalhes de alimentos e a qualidade da água (incluindo tipo de dieta / fonte, fonte de água);
- Justificativa para a escolha da dose inicial.
- Um ensaio-limite de uma dose de 2000 mg/kg de peso corporal pode ser realizado com seis animais três animais por etapa.
- Excepcionalmente, um ensaio-limite de uma dose de 5000 mg/kg pode ser efetuado com três animais.
- No caso de existir probabilidade de que os resultados do ensaio terem relevância direta para a protecção da saúde humana ou animal.
- Se a mortalidade for relacionada com a substância teste, mais testes precisam ser realizados.
Data e comunicação
Administração das doses
A substância de ensaio é administrada em dose única por sonda gástrica, utilizando um tubo estomacal ou uma cânula de intubação adequada.
https://www.google.com.br/search?q=administra%C3%A7%C3%A3o+da+dose&source=lnms&tbm=isc h&sa=X&ved=0ahUKEwjY5cHx5IvMAhUJkZAKHTaXAvkQ_AUICCgC&biw=1600&bih=767#imgrc=V5yYN5u-7Ne5wM%3A
Nos casos em que uma dose única não for possível, a dose pode ser administrada em frações menores ao longo de um período não superior
a 24 horas.
Os animais devem ser sujeitos a jejum antes da dosagem.
https://www.google.com.br/search?q=administra%C3%A7%C3%A3o+da+dose&source=lnms&tbm=isch& sa=X&ved=0ahUKEwjY5cHx5IvMAhUJkZAKHTaXAvkQ_AUICCgC&biw=1600&bih=767#imgrc=V5yYN5u-7Ne5wM%3A
Após o período de jejum, os animais devem ser pesados e a substância, administrada.
Utilização da dose de 5000 mg/kg de peso do corpo:
- No caso da identificação de substâncias que tem risco relativamente baixo de toxicidade aguda, mas que, em determinadas circunstâncias, podem representar perigo para populações vulneráveis.
- Após administração da dose, os alimentos podem ser retidos: por mais 3 a 4 horas para ratos e 1 a 2 horas para camundongos.
O ensaio de animais na Categoria 5 do GHS (2000-5000mg / kg) só deve ser considerado quando há uma forte probabilidade de que os
resultados tenham uma relevância direta para
proteger a saúde humana, animal ou para
o ambiente.
- Se a dose é administrada em frações ao longo de um período, pode ser necessário fornecer comida e água.
Se não existir informações sobre a substancia, por razões ética ao animal, a dose inicial deve ser 300 mg / kg de peso corporal.
O intervalo de tempo entre os grupos de tratamento é determinado pelo início, duração, severidade e sinais tóxicos.
O tratamento dos animais com a próxima dose deve ser adiado, até que se esteja seguro da sobrevivências dos animas previamente tratados.
Número de animais e doses
Nível de dose para ser usado inicialmente é selecionado a partir de 4 doses fixas: 5, 50, 300 e 2000 mg/ kg de peso corporal.
A dose inicial deve ser aquela que é mais provável para produzir mortalidade em alguns dos animais tratados.
Nenhum teste adicional é necessário;
É necessária a administração da mesma dose a mais 3 animais no próximo nível de dose superior ou no nível de dose imediatamente inferior;
Fonte: https://www.google.com.br/search?q=testes+com+animais+oecd&es pv=2&biw=13 66&b ih= 667&sou rce=lnms&tbm =isch &sa=X&ved=0ahUKEwj0iJ ub4YTMAhUD7yYKHS8jDrwQ_AUICCgD#imgrc=dg3gRucyTks-MM%3A
- Utilizar um número mínimo de animais por etapa;
- A substância deve ser administrada por via oral a um grupo de animais em uma das doses definidas;
https://www.google.com.br/search?q=administra%C3%A7%C3%A3o+via+oral&espv=2&biw=1366&bih=623&source=lnms &tbm=isch&sa=X&ved=0ah UKEwj9sf3E4YTMAhUFxSYKHde7A_wQ _AUIBigB#tbm=isch&q=administra%C3%A7%C3%A3o+via+oral+em+animais&imgrc=Nst9mCIi2OWwlM%3A
- A substância é testada num procedimento sequencial;
- Cada etapa utiliza três animais do mesmo sexo (normalmente fêmeas);
- A ausência ou presença de mortalidade relacionada com a substância determinará a etapa seguinte;
Procedimento
Princípios do teste
Os animais devem ser observados individual-
mente após a dosagem, pelo menos uma vez durante os primeiros 30 minutos e periodicamente durante as primeiras 24 horas, com atenção especial durante as primeiras 4 horas e, diariamente por um total de 14 dias .
- O período de recuperação deve ser determinado pelas reações tóxicas, e pode ser prolongado, se considerado necessário.
- Exceto quando for necessário que se retire o animal do estudo (por estarem mortos em razão de proteção dos outros animais ou os que já são encontrados mortos ).
- O período em que os sintomas de toxicidade aparecem e desaparecem são importantes, sobretudo se houver uma tendência para sinais de toxicidade retardada .
- No entanto, a duração de observação não devem ser fixada de forma rígida.
- Todas as observações são registradas sistematicamente em uma ficha individual para cada animal.
Observações adicionais serão necessários se os animais continuaram a apresentar sinais de toxicidade :
https://www.google.com.br/search?q=fundos+escuros+paraslides&espv=2&biw=13 66&bih=667&sourc e=lnms &tbm=isch&sa=X& ved=0ahUKEwj_gInE9o fMAhWGUZAKHWB2B EcQ_AU IBigB#tb m=isch&q=animais+mortos+ou+moribundos+coelhos&imgrc=g6u8KLlvBPiDFM%3A
alterações na pele e pêlos , olhos e mucosas, do aparelho respiratório, circulatório, autônomo e sistema nervoso central, e atividade somatomotora e do comportamento.
A atenção deve ser dirigida à observação de tremores, convulsões, salivação, diarreia, letargia, sono e coma.
- Quando os animais são mortos ou são encontrados mortos , o momento da morte deve ser registrado com a maior precisão possível.
https://www.google.com.br/search?q=fundos+escuros+paraslides&espv=2&biw=1366&bih=667&source=lnms &tbm=isch&sa=X& ved=0ahUKEwj_gInE9ofMAhWGUZAKHWB2BEcQ_AUIBigB#tbm=isch&q=animais+mortos+ou+moribundos+coelhos&imgrc=g6u8KLlvBPiDFM%3A
Patologia
- Todos os animais de teste (incluindo os que morreram durante o ensaio ou que foram retirados do estudo por razões de bem-estar do animal ) devem ser submetidos a autópsia.
Peso Corporal
Todas as alterações patológicas devem ser registradas para cada animal.
O exame microscópico de órgãos que mostrem sinais de patologia grave em animais que sobreviveram 24 ou mais horas, também deve ser considerado, pois pode fornecer informa-
- O peso individual dos animais deve ser determinado pouco antes de que a substância em estudo ser administrada , e acompanhado semanalmente .
ções úteis.
- As alterações de peso devem ser calculados e registrados. No final do ensaio os animais sobreviventes são pesados e sacrificados.
https://www.google.com.br/search?q=rato+gordo+e+magro&espv=2&biw=1366&bih=623 &source=lnms&tb m=isch&sa=X&ved =0ahUKEw ibyNyqiIjMAhUKF5AKHbRGChgQ_AUIBigB#i mgrc=E-tjA0XuDzw7OM%3A
Observações
Referências
OECD GUIDELINE FOR TESTING OF CHEMICALS Acute Oral Toxicity – Acute Toxic Class Method. Disponível em:< https://ntp.niehs.nih.gov/iccvam/suppdocs/feddocs/oecd/oecd_gl423.pdf>. Acesso em 26 de Março de 2016.
O laboratório deve considerar todas as informações disponíveis sobre a substância teste antes de efetuar o estudo, incluindo:
- a identificação da estrutura química e propriedades físico-químicas; da substância;
- o resultado sobre a toxicidade de qualquer outro teste in vivo in vitro;
- dados toxicológicos sobre substâncias estruturalmente afins, e utilizações previstas da substância.
Fonte:https://www.google.com.br/search?q=calculo+de+dl50&espv=2&biw=1366&bih =667&source=lnms&tbm=isch&sa=X&ved =0ahUKEwi3q_XoyI PMAhWGiZAKHcyTBysQ_AUIBygC#tbm=isch&q=dl50&imgrc=hUH4_fTfEXWZFM%3A
- Um valor de DL50 pode ser determinado, apenas nos casos em que pelo menos duas doses resultam em
mortalidade superior a 0 e inferior
a 100%.
Testes toxicológicos
UNIVERSIDADE FEDERAL DE MINAS GERAIS
FACULDADE DE FARMÁCIA
Alunas:
Camilla Wiermann Rezende
Fabiola Leonardo de O. Campos
Maria Gabriela Martins Cruzeiro
Raquel Cherman Sampaio
Roberta dos Santos Rodrigues
Testes toxicológicos
Toxicidade aguda
Possibilita conhecer mecanismo de ação da substância;
Identifica possíveis órgãos e sistemas sensíveis;
Determina se os efeitos são reversíveis;
Substâncias testadas em diferentes espécies/linhagens de animais.
Considerações Iniciais
- Substâncias testes em doses que são conhecidas por causar dor e sofrimento óbvios .
- Animais moribundos, ou animais obviamente com dor ou mostrando sinais de sofrimento grave .
O que é a OECD
Fonte:https://www.google.com.br/search?q=ufmg&espv=2&biw=1366&bih=667&site=webhp&source=lnms&tbm=isch&sa=X&ved=0ahUKE wiA7MGK2oXMAhWHhJAKHXtTDv8Q_AUICCgD#tbm=isch&q=animais+moribundos&imgrc=FDcZ3vGdxl07KM%3A
Critérios para a decisão de sacrificar animais .
Toxicidade aguda
Testes toxicológicos
Fonte: www.oecd.org
Avalia a toxicidade produzida por substância-teste – administrada em 1 ou + doses – período até 24 hrs;
Observação de animais por 14 dias;
Indicada por via oral (considerar exposição humana);
Objetivo = caracterizar relação dose resposta que conduz ao cálculo da DL50;
Resultados obtidos – delineamento estudos de toxicidade sub-crônico (ESCOLHA DE DOSES);
Observações
Os testes toxicológicos não são planejados para demonstrar se um agente químico é seguro, mas sim para caracterizar que tipo de efeito tóxico uma substância química produz.
https://www.google.com.br/search?q=ratos+em+experimentos&biw=1440&bih=775&source=lnms&tb m=isch&sa=X&ved=0ahUKEwij6cKo34zMAhVFiJAKHQjwB5oQ_AUIBigB#imgrc=IpIKzymQEawRYM%3A
- Adaptada em março de 1996, como segunda alternativa para o teste convencional descrito no doc 421.
- Acordo internacional sobre os valores-limite de DL50.
OECD 423
- Procedimento gradual, reprodutível.
- Documento nº 423 de 17/12/2001 da OECD.
- Assunto principal: Orientação para testes em produtos/substâncias químicas.
- Objetivo :Estabelecer diretrizes para o método de toxicidade oral aguda de classe.
Fonte:https://www.google.com.br/search?q=ufmg&espv=2&biw=1366& bih=667&site=w ebhp&source=ln ms&tbm=isch&sa=X&ved=0ahUKEwiA7MGK2oXMAhWHhJAKHXtTDv8Q_AUICCgD#tbm=isch&q=objetivo&imgrc=gS6ETztTviSBFM%3A
- Organização para cooperação econômica e desenvolvimento.
- É responsável por estabelecer padrões internacionais para uma variedade de setores, da agricultura à impostos para a segurança de produtos químicos.
- Adaptada em março de 1996, como segunda alternativa para o teste convencional descrito no doc 421.
- Baseado na avaliação biométrica com doses fixas.
- Dependendo da mortalidade e/ou o estado dos animais, em média, 2-4 passos podem ser necessários para permitir a avaliação.
- Orientações para a seleção do método de ensaio mais apropriado - documento de Orientação em Testes de Toxicidade Oral Aguda citado como referência bibliográfica do guia 423.
OECD 423