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Digno és, Senhor, de receber glória, e honra, e poder; porque tu criaste todas as coisas, e por tua vontade são e foram criadas.

Apocalipse 4:11

Tecnologia do DNA Recombinante

Biologia 1 -

Profª Juliana Braga

Insulina

Banting e Best descobriram a insulina em 1921, purificando-a do pâncreas de um cão. O hormônio, produzido e secretado pelas células beta das ilhotas pancreáticas (ou Ilhotas de Langerhans), é responsável por regular o uso e armazenamento de alimentos, principalmente carboidratos.

Insulina

Até a década de 1980, os pâncreas dos animais abatidos nas fazendas eram levados para Indianápolis, em um prédio onde futuramente seria a garagem da Eli Lilly & Co., a primeira empresa a produzir insulina em larga escala

Produção de Insulina (recombinante)

Vídeo: Técnica do DNA Recombinante

Vídeo

Plasmídios

Os plasmídios foram descobertos na década de 60 - Resistência bacteriana pelo processo de conjugação entre bactérias (transferência de genes da doadora para a receptora).

Plasmídios e Enzimas de Restrição

Enzimas de Restrição

Produzidas naturalmente por bactérias como um mecanismo de defesa contra DNA exógeno, estas enzimas cortam o DNA em locais específicos (os sítios de restrição), baseando-se na sua sequência de nucleotídeos.

Enzimas de Restrição

Produção do DNA Recombinante

Em 1972 - Herbert W. Boyer (Universidade da Califórnia), Stanley N. Cohen (Universidade de Stanford) uniram-se para recombinar a molécula de DNA de plasmídios (híbridos) e estudar a resistência bacteriana a antibióticos.

O DNA do sapo e o DNA bacteriano se ligam às ligases, incorporam-se nas células de E. coli e proliferam. As células, que contêm um novo plasmídeo recombinante sapo-bacteriano, basicamente com resistência à tetraciclina, já que o DNA do sapo não contém nenhum gene de resistência a antibióticos, foram identificadas por análise química de ácidos nucleicos.

experimento

Conclusão

Conclusâo

&

Bibliografia

# Os plasmídios são um dos principais vetores de clonagem, sendo um veículo ideal para transportar os fragmentos de DNA para dentro da bactéria.

# As enzimas de restrição tornaram-se importantes ferramentas para o desenvolvimento da tecnologia do DNA recombinante.

Vídeo: Engenharia Genética

Vídeo

Bibliografia

https://profissaobiotec.com.br/insulina-recombinante-como-afetou-vida-dos-pacientes/

https://cienciainformativa.com.br/pt_BR/biofarmacos-da-insulina-ao-tratamento-de-cancer/

http://apuntesbiologiamol.blogspot.com/2014/04/primeros-experimentos-de-la-ingenieria.html

Biologia 1 - Livro 3 - "Tecnologia do DNA Recombinante" - SAS - 2020

Aplicações da Tecnologia do DNA Recombinante

A tecnologia do DNA Recombinante abrange uma ampla variedade de técnicas e estratégias moleculares que são empregadas na análise genética molecular básica e na biotecnologia.

Aplicações

Parte 2

Exemplos;

# Técnica de PCR;

# Eletroforese;

# Southern blotting;

# Técnica de Fingerprint;

# Clonagem;

# Transgenia (OGM).

# CRISPR/Cas 9.

Técnica de PCR

A Reação em Cadeia da DNA Polimerase, mais conhecida pela sigla PCR, foi desenvolvida nos anos de 1980 e também revolucionou diversas áreas da biologia e da medicina

Técnica de PCR

A técnica é muito sensível, possibilitando a amplificação de DNA a partir de uma quantidade mínima de amostra. Essa característica tem proporcionado a aplicação da técnica não apenas na pesquisa básica, mas também na pesquisa aplicada, como nos testes de identificação genética, medicina forense, diagnóstico de doenças infecciosas, controle de qualidade industrial, entre outros.

Karry Mullis (1944-2019) - Inventor da Técnica de PCR, Nobel de Química 1993

Eletroforese

A técnica de separação dos fragmentos de DNA mais utilizada é a eletroforese através de géis de agarose.

Eletroforese

APLICAÇÕES DA ELETROFORESE:

Ciência forense– para comparar o DNA encontrado no local do crime com o de possíveis suspeitos.

Genética– teste de paternidade, diferenciação de espécies ou linhagens e engenharia genética.

Microbiologia– detecção de diferentes patógenos como vírus, bactérias e fungos.

Bioquímica– detecção da expressão de proteínas.

Southern Blotting

APLICAÇÕES:

Identificar mutação ou rearranjo gênico na sequência do DNA;

No diagnóstico de doenças causadas por defeitos genéticos;

Identificar agentes infecciosos.

A metodologia consiste na fragmentação do DNA em pedaços menores, através de uma eletroforese, seguindo-se a transferência para uma membrana e a detecção do fragmento de DNA de interesse por hibridação com uma sonda específica.

.

Southern Blott

Fingerprint

É uma técnica em que se utiliza um padrão de bandas absolutamente individuais, similar a um código de barras, chamado de ‘impressões digitais de DNA’ (DNA fingerprinting), em analogia às dos polegares.

Fingerprint

Aplicado em:

Genética Forense

*Teste de paternidade;

* Soluções de Crimes.

Transgenia (OGM)

Transgenia é o processo de alteração do material genético de uma espécie pela introdução de uma ou mais sequências de genes provenientes de outra espécie, mediante o emprego de técnicas de engenharia genética

Transgenia

Clonagem

A clonagem é um processo artificial pautado na reprodução de cópias genéticas (organismos idênticos) de determinados seres vivos através de um filamento de DNA.

Ela surgiu no ano de 1996 através da ovelha Dolly, o primeiro mamífero clonado.

CRISPR/Cas9

O CRISPR é considerado uma técnica de biologia molecular utilizada para edições genômicas.

CRISPR/Cas 9

Através dessa técnica de edição molecular, pequenos fragmentos do DNA de vírus patogênicos podem ser inseridos no genoma das bactérias, entre os trechos repetidos, criando memórias no sistema imunológico semelhante ao processo desencadeado por vacinas.

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