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Contribution à l’étude des activités biologiques de cinq huiles essentielles et leurs composés majoritaires : Relation avec le système quorum sensing (QS) chez Pseudomonas aeruginosa

Présenté par : Haïfa Ben Messaoud

Sous la direction de : Dr. Bechr Hamrita

Dr. Majdi Snoussi

Plan

INTRODUCTION

ETUDE BIBLIOGRAPHIQUE

ETUDE PHYTOCHIMIQUE

Analyse de la composition chimique des huiles essentielles

PLAN

ETUDE BIOLOGIQUE

Partie I : Evalution de l'activité anti-microbienne des huiles essentielles et leurs composés majoritaires

Partie II : la recherche d'une éventuelle synergie entre quelques huiles en combinaison

Partie III : Effet des huiles essentielles sur les principaux facteurs de virulence chez P.aeruginosa

Partie IV : l'étude de l'effet des huiles essentielles sur le protéome bactérien

CONCLUSION ET PERSPECTIVE

Inroduction

Introduction

Inroduction

Les maladies infectieuses constituent un sérieux problème de santé publique où l'utilisation des antibiotiques devient un mythe.

Cette situation permet l'émergence des bactéries résistantes aux antibiotiques.

"la résistance antimicrobienne est une urgence de santé mondiale qui va sérieusement compromettre les progrès de la médecine moderne".

  • Une augmentation des dépences médicales.

  • Un accroissement des hospitalisation.

  • Une augmentation de mortalité.

Recherche des altérnatifs phytothérapeutiques à base des susbstances naturelles, notamment les huiles essentielles.

Mission 1

L'évaluation de l'effet anti-microbien des huiles essentielles et leurs composés majoritaires sur une panoplie de microorganismes.

L'impasse thérapeutique

le coût.

La diminution de la biodiversité végétale.

Mission 2

Recherche d'une éventuelle synergie entre:

  • HE-HE
  • HE-ATB

La dose indépendante

La cytotoxicité

Le mode d'emploi

MICROBIOTE

C'était la réduction du pouvoir infectieux des bactéries sans les détruire, ainsi que la protection du microbiote par le biais des huiles essentielles anti-QUORUM SENSING .

Mission 3

Evaluer l'effet des huiles essentielles sur le système quorum sensing chez P. aeruginosa.

étude bibliographique

Etude bibliographique

Définition

Huiles essentielles : sont les composés odorants, volatils de plantes aromatiques, fabriqués normalement par un groupe spéciales de cellules.

Huile essentielle

Propriétés

Anti-microbiennes

cannelle, clou de girofle, laurier...

Anti-oxydante

eucalaptus, orange amère, lavande, origan, thym...

Anti-inflammatoire

clou de girofle, lavande, sauge...

Anti-cancer

menthe, gingembre, cumin, camomille, citron, thym...

Apaisante

mandarine, lavande, camomille, bois de rose, oranger...

Monographie

Famille des Zingiberacea

Plantes médicinales largement utilisée en médecine traditionnelle dans des diverses maladies.

Famille des Liliaceae

Leurs huiles essentielles reflétent des activités antimicrobiennes, anti-oxydantes, anti-inflammatoires, anti-insecticide...

Famille des Apiaceae

Leurs bienfaits seront liés aux compositions chimiques qu'elles contiennent, notamment les monterpènes et les sesquiterpènes.

Famille des Rutaceae

Définition

QUORUM SENSING

*un mécanisme de communication cellulaire *dépendant de la densité bactérienne.

*repose sur la synthèse, la diffusion, la détection et la réponse à des petites molécules signale appelées « autoinducteurs »

Quorum sensing

Mécanisme

Chez PAO1

Formation du biofilm

Bioluminescence

Mobilité

Protéase + élastase

Etude phytochimique

Composition des HEs

Détermination de la composition chimique des huiles étudiées

  • Matériel

GC/MS

  • Méthode

Résultats et disussion

Nos résultats sont peu similiares à ceux trouvés dans la littérature. (Barra, 2004) a mentionné qu'il existe des facteurs endogènes et exogènes qui affectent la composition chimique des huiles essentielles.

Etude biologique

Activité biologique

Activité anti-microbienne

  • Matériel

Partie I

  • Méthodes

Qualitative : diffusion des disques

Quantitative : microdilutuion

Qualitative

Diffusion sur gélose

Résultats et discussion

Quantitative

Détermination de la concentration minimale inhibitrice (CMI) et létale (CML)

*Incubation à 37°C pendant 24h

*lecture visuelle de la CMI

(Snoussi et al., 2008)

Résultats

Tests de synergie

Synergie : (A+B)>effet A+effet B

Addition : (A+B)=effet A +effet B

Partie II

Antagonisme : (A+B) <effet A ou effet B

Indifférence : (A+B)=effet A ou effet B

Lahlou, 2004

Test 1

Combinaison HE-HE

  • Matériel
  • Méthode

Quantitative : détermination de la concentration minimale inhibitrice (CMI) et létale (CML)

Résultats et discussion

HE1+HE2< effet HE1+effet HE2

Effet antagoniste

Test 2

Combinaison HE-ATB

  • Matériel
  • Méthode

Qualitative : technique de diffusion de disque

Résultats et discussion

Activité anti-QS

  • Matériel

Partie III

  • Méthodes

Descriptives : Activité anti-pyocyanine

Activité anti-swarming

Colorométriques : Activité anti-élastolytique

Activité ani-protéolytique

Activité 1

Activité anti-pyocynine

Préparation du milieu minimum glycérol alanine

Ajout des différentes concentrations des huiles essentielles

Inoculation puis incubation

Observation visuelle

Résultats et discussion

500.................................................10 µg/ml

D'après les résultats obtenus, nous recomondons d'utiliser les huiles essentielles de façon dose dépendante pour inhiber l'un des facteurs de virulence exprimé par PAO1

Activité 2

Activité anti-swarming

5 µL d’une culture fraiche de PAO1 préparée à DO600=0,1 ont été déposés sous forme de goutte au centre des boîtes.

Préparation d’un milieu LB semi solide auquel différentes concentrations d’huiles essentielles (10, 50, 150, 300 et 500 µg/ml) ont été ajoutées.

Incubation des boîtes à 37°C pendant 24h.

Résultats et discussion

Activité 3

Activité anti-enzymatique

Résultats et discussion

Pour cloturer ces activités, on note que les huiles essentielles notamment celles utilisées dans notre étude ont un pouvoir miraculeux pour bannir les principaux facteurs de virulence chez P.aeruginosa.

Analyse protéomique

  • Matériel

Partie IV

  • Méthode

SDS-PAGE

Conclusion

Dans ce contexte, l'aromathérapie, l'art de soigner par les huiles essentielles est rebreveté par notre étude.

Espérant...

Conclusion

les industries pharmaceutiques ne mettent pas les bâtons dans les roues pour remplir leurs caisses.

les vertus des plantes sont exploités et mises au service de la santé des patients par les lobbistes.

Les scientifiques tunisiens exploitent leurs travaux archivés sur les plantes médicinales.

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