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INGENIERIA DE MATERIALES II
Es empleado para determinar la sensibilidad de un agente microbiano frente a un antibiótico o quimioterápico.
En la actualidad se cuenta con diversos métodos para evaluar la actividad antimicrobiana
de sustancias sintéticas. Estos métodos se aplican mucho en el ámbito hospitalario como el caso del método de difusión de discos (KirbyBauer)
Un agar muy suave, puede producir falsa sensibilidad y a su vez, un agar muy duro, puede producir una falsa resistencia, al incidir en un cambio en la velocidad y distancia de la difunsión del antibiótico
También cambios en el pH, pueden producir falsa resistencia o falsa sensibilidad al incidir en la polaridad de los antibióticos. A la hora de preparar el medio de cultivo, este pH debe ser correctamente regulado.
Otro punto de gran importancia es la profundidad del agar, la cual debe ser exactamente de 4 mm. Un agar delgado, permite una mejor difusión de los antibióticos produciendo una falsa sensibilidad, pero también un agar con más de 4 mm de profundidad puede producir una disminución en la migración (difusión) del antibiótico con la consiguiente falsa resistencia
Sobre la superficie de una placa de agar Müller-Hinton (medio de cultivo rico, diseñado especialmente para hacer ensayos de sensibilidad) se inocula una cantidad estandarizada de bacterias, sembrándolas de forma uniforme para obtener después de la inoculación un "césped" bacteriano.
A continuación se colocan discos de papel de filtro impregnados con concentraciones conocidas de los diferentes antibióticos. La elección de los antibióticos a probar dependen del germen y del foco de infección
El antibiótico difundirá desde el papel filtro al agar de forma radial. Se incuba la placa durante 18-24 horas a 37 °C (respetar este parámetro, porque temperaturas menores pueden disminuir la velocidad del crecimiento del germen y la difusión del antibiótico, dando halos irregulares difíciles de medir), y luego se miden los halos de inhibición de desarrollo, interpretándose de acuerdo a tablas confeccionadas previamente.
Los resultados se expresan como: Sensible (S), Intermedio o Moderadamente sensible (I) y Resistente (R).
La técnica de difución en agar, presenta varias ventajas como:
a. es fácil de efectuar y de gran reproducibilidad
b. bajo precio
c. no requiere equipo especial
d. sus resultados son fácilmente interpretados por los clínicos
e. es muy flexible a la hora de escoger los antibióticos a probar.
Dentro de sus desventajas está el hecho de que brinda sólo información cualitativa. Otra desvetaja y la más importante, es que esta técnica debe ser modificada para poderla emplear en organismos fastidiosos o de crecimiento lento
Dentro de las posibilidades que se cuentan están: densidad del inóculo mal estandarizada, utilización de cultivos no puros, humedad o sequedad excesiva del medio de cultivo que puede conducir a un crecimiento demasiado confluente o pobre, y deterioro de los discos de aplicación.
Es un método solo cualitativo, orientado al tratamiento. No es aplicable a microorganismos de crecimiento lento ni a microorganismos anaerobios. Antibióticos como la polimixina o la vancomicina no tienen buena difusión en agar.