GPC

Ayırma Mekanizmasına Göre

• Adsorbsiyon Kromatografi
• Dağılma (Partition) Kromatografi
• İyon-değiştirme Kromatografi
• Jel geçirgenlik veya Jel süzme Kromatogtafi
• Zone elektroforez
• Afinite (veya Bioafinite) Kromatografi
• Chiral Kromatografi

Hareketli Faza Göre

• Sıvı Kromatografisi (LC)
• Gaz Kromatografisi (GC)

Hareketli Faza Göre

Uygulanan Tekniğe Göre

• Kolon Kromatografi
• Düzlem Kromatografi (İnce tabaka kromatografi, TLC; kağıt kromatografi, PC)

Kullanım Amacına Göre

• Analitik Kromatografi (Kalitatif kromatografi, Kantitatif kromatografi)
• Preperatif Uygulamalar ( karışımlardan saf madde elde etme)

JEL GEÇİRGENLİK KROMATOGRAFİSİ

Molekül büyüklüklerine göre proteinleri ayırmada kullanılan en uygun ve en etkili yöntem, jel geçirgenlik kromatografisidir. Genel adıyla dışarılama kromatografisi olarak da bilinen bu kromatografide duran faz, polimer yuvalarına su emdirilip oluşturulan bir jel, yürüyen faz sıvıdır.

Bu metotta bir kolona kuvvetli hidratize olmuş polimer materyal Sefadeks, Sefaroz gibi bir poliakrilamid türevi olabilir. Jel partikülleri değişik büyüklükte porlara sahip şekilde hazırlanabilir.

PRENSİP

Dolgu maddesinin porlarından daha büyük moleküller porlara girmeden kolon boyunca ilerleyip çıkar. Daha küçük moleküller büyüklüğü sahip olanlar ise porların içerisine girer ancak kolon sürekli akış sayesinde tekrar pordan çıkar ,tüm kolonda bu şekilde hareket eder.

Kolondan, küçülen molekül büyüklüğüne doğru molekül çıkışı gözlenecektir.

Toplanan fraksiyonlarda da moleküler büyüklüğüne göre giderek daha küçük moleküller toplanacaktır.

Cihazın Bölümleri

Pompa: Çözücüyü sabit bir basınç ve akış

hızında sisteme verir. GPC’de her zaman

izokratik hareketli faz uygulaması yapılır.

Enjeksiyon Valfi: Örnek çözeltisinin hareketli

faza karışmadan sisteme verilmesini sağlar.

Verilen örnek miktarı HPLC’ye göre daha

fazla olabilir

Kolon: Molekül büyüklüğüne göre ayırım

yapacak olan sabit fazı içerir. Daha kaliteli bir

ayırım için birden fazla kolon ardarda

bağlanarak kullanılabilir

Dedektör: Çıkan polimerin miktarını belirler.

Kolonlar

GPC kolonları genellikle çapraz bağlı, çözünmeyen stiren ve divinil

benzen kopolimerlerinden oluşur.

Bu kopolimerler çözücü ile deforme olmayacak sert bir yapıya

sahiptir.

Kolon Özellikleri

Kısa kol

• Uzunluk çap oranı düşük
• Akış hızı yüksek
• Türbülans düşük
• Tamamen homojen örnek uygulaması ve tampon akışını yakalamak zor
• Karlılık düşük

Uzun kol

• Uzunluk çap oranı yüksek
• Lineer akış yakalanır
• Homojen örnek yüklemesi yapılabilir
• Kolonun tümünde aynı akış hızı yakalanır
• Kararlılığı yüksek ayrımı daha fazladır

Dedektörler

Konsantrasyon dedektörleri

• Refraktif indeks

• UV

• Işık saçılımı

• Kütle

• Infrared

Molekül ağırlığına duyarlı dedektörler

• Viskometre

• Işık saçılımı

Veri Analizi

Birbirine yakın molekül ağırlığına

(büyüklüğüne) sahip polimerler

bir pik olarak çıkarlar.

• Ne kadar farklı pik varsa o kadar

farklı zincir uzunluklarına sahip

polimerler var demektir.

• İç standart kullanılarak,

harcanan çözücü hacminden

molekül büyüklüğü de

hesaplanabilir.

Veri analizi (devam)

• Elde edilen pikin keskinliği molekül ağırlığı dağılımının az olduğunu gösterir. Başka bir deyişle, o aralıkta çıkan bütün zincirler eşit uzunlukta demektir.

• Molekül ağırlığı dağılımı fazla olduğunda pik yayvanlaşır.

Ayrılmak istenilen molekülün karakterine ve molek...

Doğrudan sıvılaştırma ile elde edilen biyo yağ analizleri, sıvılaştırma çözücüsünün müdahaleleriyle engellenir. Bu nedenle, çözücüyü biyo-yağdan çıkarmak için hazırlayıcı bir jel geçirgenlik kromatografisine (GPC) dayalı yeni bir analitik yaklaşım geliştirmiş ve oluşan biyo-yağ moleküleri boyuta göre birkaç fraksiyona ayrıldı. İncelenen biyo yağlar, guaiacol ve guaiacol / su karışımının reaksiyon ortamı olarak kullanılmasıyla çam ağacının sıvılaştırılmasıyla hazırlandı. Bu biyo yağlar fraksiyon haline getirilmiş ve daha sonra C ve H NMR, FTIR, C: H: O analizi ve karbon kalıntısı gibi çeşitli tekniklerle analiz edilmiştir. Sonuçlar, hidrotermal sıvılaştırma (suda sıvılaşma) ve hızlı piroliz yoluyla üretilen biyo yağlarla karşılaştırılmıştır. Analizler, biyo-yağın ürün dağılımı, bileşimi ve özelliklerinde büyük farklılıklar olduğunu göstermiştir. Örneğin, sıvılaştırma yağları, şeker benzeri bileşenlerde daha yağsız, piroliz yağına göre aromatik moleküllerde daha zengin göründü. Dahası, sıvılaştırma yağlarındaki aromatik içerik, bu tür bileşiklerin oluşturulması için karbonhidratların reaksiyona girdiğini gösterdi. Piroliz ile karşılaştırıldığında, sıvılaşma, oksijen bakımından daha yağsız biyo yağlar verdi, ancak daha çok ağır maddeler içeriklidir. Ağır ürünlerin daha yüksek konsantrasyonu, piroliz yağına kıyasla daha yüksek koklaşma eğilimine sahip sıvılaştırma yağlarına neden oldu. Sıvılaştırma deneyleri için reaksiyon koşullarının şiddet derecesi şu şekilde sıralanmıştır: Guaiacol <Guaiacol / su <Su.

Piroliz yağı, akışkan yataklı partiküller olarak kum kullanan sürekli bir akışkan yataklı reaktörde üretildi. Oluşan buhar, iki karşı akım sprey kondansatörü ve seri halinde yerleştirilmiş yoğun bir soğutucudan oluşan bir kondenser sistemine yönlendirildi. Yoğunlaşmayan gazlar toplandı ve kütle dengesinin kapatılması için analiz edildi. Üretilen kirlilik, başlangıçtaki kum miktarının toplam katı artıkına çıkarılmasıyla hesaplandı. Hızlı piroliz yağını elde etmek için yoğunlaştırıcılar karıştırıldı.

• GPC
• FTIR
• 13C NMR
• 1H NMR
• EA ve MCRT
• Gaz analizi
• GC-MS

Saflaştırma Hızlı Piroli Ayırma Karakterizasyon

işlemi

Yağların fraksiyonlanması GPC sistemi ile gerçekleştirildi. Enjeksiyon kapasitesini 1.5 ml'ye çıkarmak için çoklu çekme kiti yerleştirildi. Üç analitik sütunun yerine bir ön sütun ve bir kolon yerleştirildi.Numuneler, gerektiğinde THF içerisinde çözündürüldü (viskozitesini düşürmek için) ve daha sonra bir 0.45 um şırınga filtresi içinden süzüldü. Fraksiyonasyon, oda sıcaklığında 50 dakika boyunca gerçekleştirildi ve fraksiyonlar, bir fraksiyon kolektörü ile otomatik olarak toplandı. Bu elde edilen fraksiyonların THF'si vakumda (10-20 mbar) ve 35 ° C'de buharlaştırılarak izole edilen biyo-yağ fraksiyonları elde edildi

Çam agacı ve sıvılaştırıcı çözücü 45ml'lik otoklavda 300C'ye kadar yarım saat ısıtıldı ve ısıtma işleminden sonra oda sıcaklığında soğutuldu. sıvılaştırma ürünleri geri kazanıldı . ve oluşan bulamaç filtrelenip filtre kek oluşturuldu . filtre kekine kantitatif analiz yapıldı. Filtrelenmiş yıkma çözeltisi döner buharlaştırıcıda saflaştırıldı ve katran fazı elde edildi.HEm sıvı hemde katran fazının kombinine yağ adı verildi.

GPC fraksiyonlaması, moleküler büyüklükteki farklılıklarına dayanarak çözücünün biyo-yağdan temiz bir şekilde ayrılmasını sağlar. İzolasyondan sonra, biyo-yağ karakterize edilebilir ve diğer yağlarla karşılaştırılabilir. Buna ek olarak, ortaya çıkan biyo-yağ, ayrı ayrı analiz edilebilen, farklı moleküler boyuttaki birkaç fraksiyona ayrılabilir. GPC, biyo-yağ karakterizasyonu için geniş çapta kullanılmasına rağmen , fraksiyonlamasında hemen hemen kullanılmamıştır.