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TRABAJO BIOLOGÍA MOLECULAR TEMA 1
EQUIPO 1
SONIA
JONATHAN
RUBÉN
LUCÍA B
LUCÍA A
MARÍA FP
AARÓN
y con esto...
Estructura del laboratorio de biología molecular
Estructura del laboratorio
La estructura del laboratorio de biología molecular está condicionada por la técnica principal.
La realización de una PCR implica:
- Preparación de reactivos
- Extracción y purificación de ADN de una muestra biológica
- Reacción de amplificación propiamente dicha
- Análisis de los productos de la reacción mediante electroforesis y documentación de
geles.
Estas actividades deben realizarse en un área de trabajo independiente y con su propio
equipamiento y material de trabajo.
Un laboratorio de biología molecular debe de tener, como mínimo, cuatro salas
independientes.
1. Sala de preparación de reactivos
Sala de preparación de reactivos
Se considera el área limpia, es decir, sin ADN. Además en ella se preparan todos los
reactivos que se van a utilizar en el laboratorio incluyendo la mezcla de reacción de
PCR. Es fundamental que no se contaminen y para ello es imprescindible que se
disponga de una cabina de bioseguridad.
2. Sala de preparación de muestras y extracción de ADN.
Esta es un área sucia, es decir, con ADN, por ello debe tener una presión negativa para
evitar una contaminación. Debe de contar con una cabina de bioseguridad y un
espectrofotómetro.
Sala de preparación de muestras y extracción de ADN
3. Sala de PCR
Esta sala dispone de termocicladores para realizar la PCR y otro espacio para añadir muestras de ADN.
Sala de PCR
4. Sala de Post-PCR
Sala de Post-PCR
Esta es un área sucia, en la cual tiene una importante fuente de contaminación.
Dispone de equipos de electroforesis.
Aquí un vídeo de una sala de laboratorio limpia
2. El flujo de trabajo
Proceso en el circuito de trabajo
Flujo de trabajo
Marca el sentido único de los procesos en el circuito de trabajo.
Debe ser unidireccional desde las áreas limpias hacia las sucias, se debe evitar el retorno de una sala a otra
Áreas de trabajo autónomas
Cada área de trabajo debe disponer de:
Su propia infraestructura básica: cabinas, centrífugas, baños termostatizados, neveras…
Material de trabajo
Micropipetas automáticas
EPI: guantes, batas desechables, gafas de protección…
Material fungible: tubos Eppendorf,gradillas, pipetas, puntas de pipeta y rotuladores
Las Condiciones de trabajo del laboratorio de biología molecular
Las condiciones de trabajo
Las condiciones de trabajo
Las Condiciones de trabajo
A parte de respetar las normas generales de un laboratorio biológico como es no beber, no comer y no fumar, hay que también establecer unas condiciones de trabajo específicas llamada técnica aséptica
Esta técnica consiste en unas normas para la manipulación de materiales en condiciones de esterilidad, para prevenir cualquier tipo de contaminación
La contaminación de las muestras
La contaminación de las muestras
La contaminación de las muestras es la introducción accidental en la muestra exógena que altera su pureza causando resultados erróneos
Los dos tipos de contaminantes más peligrosos son:
. Los ácidos nucleicos extraños a la muestra
. Las enzimas no deseadas que degradan ácidos nucleicos
Las fuentes de contaminación
Las fuentes de contaminación
Las fuentes de contaminación pueden ser por:
- contaminación cruzada
- Material no amplificado del medio ambiente
- Contaminantes procedentes del personal de laboratorio
- Contaminantes de las superficies de trabajo
- contaminación por productos amplificados
- contaminación de los reactivos comerciales y del material fungible
Las fuentes de contaminación
La contaminación cruzada
- Material no amplificado del medio ambiente
Ejemplo: Aerosoles generales durante la manipulación de las muestras
- Contaminantes procedentes del personal de laboratorio
Ejemplo: Células de descamación de la piel, pelo, etc…
- Contaminantes de las superficies de trabajo
Ejemplo: Los que se acumulan sobre las superficies de trabajo
Las fuentes de contaminación
Contaminación por productos amplificados
Generados mediante PCR en el propio laboratorio
Contaminación de los reactivos comerciales y del material fungible
La mayoría de fabricantes garantiza la esterilidad de sus productos pero el término estéril significa ausencia de microorganismos viables.
Algunos métodos de esterilización no garantizan
. La eliminación del ADN de los microorganismos
. La inactivación de enzimas, sobre todo las ARNasas
Para prevenir la contaminación algunas medidas son la separación de las áreas de trabajo y el flujo unidireccional.
La contaminación de reactivos y material fungible se puede evitar utilizando certificados como libres de nucleasas
La contaminación por ADN no se puede controlar por lo que es imprescindible controlar los reactivos
TÉCNICAS ASÉPTICAS ADAPTADAS AL LABORATORIO BIOLOGIA MOLECULAR.
TECNICAS ASEPTICAS
INTRODUCCION
CONJUNTO DE ACTIVIDADES PARA PREVENIR LA CONTAMINACION POR:
- MICROORGANISMOS
- ÁCIDOS NUCLEICOS
- NECLEASAS
MUCHAS DE ELLAS CUMPLEN PREVENIR CONTAMINACIÓN DE LA MUESTRA
UNA DOBLE FUNCIÓN
EVITAR LA CONTAMINACIÓN DEL TRABAJADOR
POR PRODUCTOS QUÍMICOS Y BIOLÓGICOS
LAVADO DE MANOS
LAVADO FRECUENTE DE LAS MANOS
- EL LAVADO FRECUENTE DE LAS MANOS ES LA NORMA DE HIGIENE BASICA CUANDO SE MANIPULAN MUESTRAS BIOLOGICAS Y REACTIVOS QUIMICOS, INDEPENDIENTEMENTE QUE SE UTILICEN GUANTES.
USO DE EPI
Los principales son guantes sin talco, mascarillas y batas.
Su uso debe compaginarse con prácticas de trabajo que
impidan su contaminación con las muestras manipuladas.
DESCONTAMINACION DE SUPERFICIE DE TRABAJOS
DESCONTAMINACION DE SUPERFICIE DE TRABAJOS
METODOS FISICOS METODOS QUIMICOS
IRRADIACION CON LUZ UV LAVADO CON SOLUCIONES DE
HIPOCLORITO DE SODIO U OTROS
REACTIVOS COMERCIALES.
PREVENCION DE CONTAMINACION CRUZADA AMBIENTAL
CABINAS DE BIOSEGURIDAD FASE II
- https://www.youtube.com/watch?v=_XTB5cOUftM
Puntas de micropipeta especiales:
evitan la contaminación de las pipetas automáticas por
aerosoles producidos al aspirar los fluidos.
- Puntas con filtro:son las más utilizadas.
tienen un filtro en su interior que impide que los
posibles aerosoles alcancen el cuerpo de la
pipeta.
- De desplazamiento positivo:tienen en su interior un embolo que las convierte en
microjeringas. tienen un vástago que
encaja en el émbolo.sube y baja en el interior de la punta
succionando y expulsando el fluido, sin que este toque en ningún momento el cuerpo
de la pipeta ni se produzcan aerosoles.
PREVENCION DE CARRYOVER
Es un problema en laboratorios de diagnóstico que
amplifican continuamente las mismas secuencias diana en un
nº muy elevado de muestras
La contaminación con cantidades muy pequeñas de estos
productos es suficiente para producir falsos positivos.
La norma principal para evitarla es no revertir nunca el flujo
de trabajo transportando muestras amplificadas
- Desde las áreas de PCR o post-PCR
- A las zonas de preparación de muestra y purificación de
ácidos nucleicos (pre-PCR).
RECURSOS HUMANOS
El uso eficiente de los recursos
El uso eficiente de los recursos
RECURSOS HUMANOS
El personal debe recibir nueva información.
Diseñar un plan de formación continuada para adecuar los conocimientos del personal a la rápida evolución de tecnología.
TÉCNICAS
TÉCNICAS
Todas las técnicas deben estandarizarse mediante procedimientos normalizados de trabajo que incluyan la especificación de controles necesarios.
GESTIÓN MEDIOAMBIENTAL
Gestión medioambiental
Debera contar con códigos de buenas prácticas para intentar reducir consumos de agua, electricidad, papel, etc.
Y garantizar el correcto reciclado de los residuos de tipo urbano.
EQUIPAMIENTO E
INFRAESTRUCTURA
Plan de mantenimiento
EQUIPAMIENTO E INFRAESTRUCTURA
Revisiones técnicas periódicas
REACTIVOS
Control de lotes y caducidad y almacenamiento correcto.
REACTIVOS
El laboratorio :
Muy especializado,
Costes elevados,
Infraestructuras,
Equipamientos,
Reactivos,
Gestión eficiente de los recursos.
Es imprescindible implantar estándares de calidad adecuada y desarrollar indicadores que permitan comprobar que son efectivos.
Lo ideal es que el laboratorio este certificado por una empresa acreditada.