konfirmasi sifat pertumbuhan pada sapi Fries Holland

KESIMPULAN

1. Didapatkan konfirmasi mengenai keberadaan Gen IGF-1 pada sampel darah kedua sapi yang diujikan dengan panjang DNA 225-231 bp

konfirmasi sifat pertumbuhan pada sapi Fries Holland

2. Sifat pertumbuhan yang terkait gen IGF-1 diantaranya adalah produksi susu

dengan primer IGF-1 dan CSSM-18

3. Didapatkan konfirmasi mengenai keberadaan gen Callypige pada sampel darah kedua sapi yang diujikan tetapi untuk kuantitas dan kualitas nya belum dapat dikatakan baik

Naditya Fitriani Hasanah

FMIPA- BIOLOGI

UNIVERSITAS SEBELAS MARET

PEMBIMBING :

Prof. Ir. Endang Tri Margawati M.Agr. Sc.

Prof. Drs. Sutarno, M.Sc Ph.D

PROSEDUR KERJA

PENDAHULUAN

3. KUANTIFIKASI DNA

Gen

Callypige

Menurut Muladno (2010) konsentrasi minimal dsDNA yang baik untuk memulai suatu proses PCR adalah 50 ng/µl dengan kemurnian minimal antara 1.8 - 2.0

MIKROSATELIT

Bobot Pinggul

dan Paha

1. Pengambilan sampel darah & koleksi white blood cell

IGF-1

penambahan RCLB

Nama Sampel Kemurnian Konsentrasi

Sapi 1 1,781 91,7 ng/µl

Sapi 2 1,738 84,8 ng/µl

diamkan 10'

di vortex

disentrifuge (3500 rpm 4oC)

supernatan dibuang

penambahan TBS

CSSM-18

Mediator berbagai

pengaruh Biologi

MIKROSATELIT

mempengaruhi banyak sifat pertumbuhan

2. Protein lysis dan ekstraksi DNA

sampel DNA + Nacl Pekat

5. ELEKTROFORESIS & VISUALISASI

diSentrifuge

elektroforesis vertikal

supernatan dituang

dalam alkohol 96 % dingin

Master mix 1: Kappa

Mater mix 2 : PCR mix Non-instant

Suhu Annealing : 60oC

Prinsip Kerja

pita DNA dipancing degan pipet pasteur

dikeringkan dengan tissue Kimwipe

dicuci dalam alkohol 70 %

Pembuatan Master Mix PCR

dimasukkan ke dalam dH2O

berdasarkan pergerakan partikel bermuatan negatif menuju kutub positif.

Komposisi Master mix Kappa :

Sapi 1 116-134 bp

sapi 21 116-134 bp

elektroforesis horizontal

1. KAPPA @2 btl 12,5 µl

2. Primer (F) @2 btl 1,25 µl

3. Primer (R) @2btl 1,25 µl

4. DW @2 btl 6 µl

5. DNA Template @ 2 µl

Komposisi Master mix Non-instant :

CSSM-18 pada Sapi Fries Holland dengan variasi master mix

Sapi 1 116-134 bp

1. 10 x Buffer @1 µl

2. MgSO4 @0,5 µl

3. dNTP @1 µl

4. Primer (F) @0,3 µl

5. Primer (R) @0,3 µl

6. Taq Polimerase @ 0,2 µl

7.DW @5,7 µl

8. DNA Template

@1 µl

sapi 2 116- 134 bp

4. POLYMERASE CHAIN REACTION

Pembuatan Gel agarose dan ND PAGE 8 %

Komposisi gel ND PAGE 8%:

1. Acrylamide 40 @1,2 ml

2. H20 @ 3,6 ml

3. 5x TBE @1,2 ml

4. APS @ 100 µl

5. TEMED @5 µl

Master mix : Kappa

Suhu Annealing : 58,8 oC

Komposisi gel agarose :

Pengenceran 6% agarose dengan aquades menjadi 1 % agarose

HASIL

&

PEMBAHASAN

Master mix : Kappa

Suhu Annealing : 60 o C

500 bp

sapi 2 225-231 bp

Suhu optimum annealing bagi marker IGF-1 adalah 58oC (www.marc.usda.gov)

CSSM-18 pada Sapi Fries Holland yang gagal terlihat

200 bp

100 bp

sapi 1 225-231 bp

IGF-1 pada Sapi perah Fries Holland

gel : ND Page 8 %

suhu

Annealing : 60oC

Sapi 1 CSSM-18

Sapi 2 CSSM-18

Sapi 1 IGF-1

Sapi 2 IGF-1

IGF-1 dan CSSM-18

pada Sapi Fries Holland