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Química Sanguínea y Biometría Hemática

Técnica de coloración de Wright

Tinción de Wright

Frotis Sanguíneo

  • Técnica histológica que sirve para diferenciar los tipos de células sanguíneas.
  • Los colorantes de uso corriente para células sanguíneas consisten en mezclas de colorantes ácidos y básicos.

Colorante de Wright

PREPARACIÓN DEL FROTE

Azul de metileno

Violeta de metileno

Colorantes básicos:

  • Azul de metileno
  • Azul de metileno policromado

Colorantes ácidos:

  • Eosina

  • Alcohol metílico

  • Solución buffer

TÉCNICA MANUAL CON DOS PORTA OBJETOS EN ÁNGULO

Técnica de coloración

plaquetas

neutrófilo

eosinófilo

  • Colocar el extendido de sangre secado al aire sobre un soporte de coloración o puente.
  • Cubrir el extendido por completo con el colorante con un número conocido de gotas y dejar actuar 5 a 7 min, para que se fije el extendido.
  • Colocar el mismo número de gotas de solución amortiguadora para diluir el colorante.
  • Mezclar ambas soluciones sobre el extendido soplando el portaobjetos, dejar actuar 10 min.
  • Lavar el colorante una vez transcurrido el tiempo por flotación.

eritrocitos

basófilo

linfocito

Interpretación

monocito

  • Los eritrocitos se tiñen de color rosado con la eosina.
  • Los núcleos de los leucocitos se tiñen metacromáticamente con azul de metileno.
  • El citoplasma de linfocitos y monocitos se tiñen de azul con el azul de metileno.
  • Los gránulos citoplasmicos de basófilos tienen afinidad hacia el azul de metileno y también son metacromáticos, en tanto que los gránulos de los eosinófilos tienen afinidad para el colorante ácido.

EXTENDIDOS DE SANGRE CORRECTO E INACEPTABLES

FROTE, FROTIS O EXTENDIDO

Anormalidades morfológicas

del eritrocito

Acantocito

Estomatocitos

Equinocitos

Esquistocito

Depranocitos

TÉCNICA CON CUBRE OBJETOS

Anisocitosis

Eritrocitos de diferentes tamaños

se observa macrocitosis y microcitosis a la vez.

Se puede observar en anemia o en pacientes transfundidos.

VELOCIDAD DE SEDIMENTACIÓN GLOBULAR VSG

Hipocromía

Policromasia

Esferocitos

eritrocitos

anisocitosis

ÍNDICES GLOBULARES MEDIOS

macrocitosis

microcitosis

Poiquilocitosis

Eliptocito

Diacrocitos

Es la preparación microscópica delgada y transparente extendida en un portaobjetos, obtenida de un líquido orgánico espeso o tejido semilíquido o pastoso.

Es una técnica fundamental en hematología, porque:

  • Diagnóstico correcto de una enfermedad.
  • Orienta al clínico para brindar un propedéutica adecuada.
  • Monitorea el proceso de recuperación del paciente.

Material a utilizar:

  • Aceite de inmersión
  • Microscopio óptico
  • Láminas portaobjetos
  • Pipeta
  • Sangre

VELOCIDAD DE SEDIMENTACIÓN GLOBULAR

VSG

BIOMETRÍA HEMÁTICA

  • Método de la resistencia eléctrica

  • Método de campo oscuro

Técnicas

  • Método de rayo laser

PROCEDIMIENTO

PROCEDIMIENTO Y RESULTADOS

  • HEMOGLOBINA

Recuento diferencial

  • CUENTA DE ERITROCITOS

  • Aspirar la sangre con la pipeta de Thoma hasta a marca 0.5 y llenar con líquido de Gowers hasta la marca "101" .
  • Agitar durante 3 minutos en ángulo rectoal eje longitudinal de la pipeta.
  • Soplara para eliminar de 3 a 5 de las primeras gots de la pipeta.
  • Llenar la camara contadora Neubauer mediante goteo parejo único del líquido debajo del cubreobjetos.
  • Esperar 4 minutos, esto para dejar sedimentar los eritrocitos.

Hombres: 5000000a 6000000 millones/mm3

Mujeres: 4500000 a 5500000 millones/mm3

Se determina por la formación del complejo cianometahemoglobina, por medio del reactivo de Drabkin.

PROCEDIMIENTO:

  • Marcar dos tubos de ensayo de 13x100 con la letras B (blanco) y la letraP (problema).
  • Depositar en cada tubo 5 ml. del reactivo de Drabkin.
  • Con una pipeta Shali con boquilla se aspira la sangre hasta la marca 20
  • Se limpia el exceso de sangre y se afora a la marca 20.
  • Se deposita en el tubo con la letra P, aspirando y soplando varias veces sobre el reactivo hasta que quede homogenea la mezcla.
  • Se deja reposar por 10 minutos
  • Su dencidad óptica se mide ne el espectrofotómetroa 540 nm , obteniendo un valor qeu lo multiplicamos por el facto 36.8 y se reporta en gramos/100 ml.

Mujeres: 13.5- 17 g/100 ml.

Hombres: 15.5- 20 g/ 100 ml.

ELECTRÓNICO

  • El paciente acuda a la toma de muestra en ayuno de 8 horas.

  • Extraer de 5 a 10 ml de sangre venosa con el sistema vacutainer en un tubo de tapa lila (con anticoagulante EDTA <<Ácido etilendiaminotetraacético >>)

electrónico

manual

¿Qué es la Biometría Hemática?

20%

1%

  • Es una prueba para evaluar la respuesta inflamatoria de patologías infecciosas y no infecciosas.
  • Es inespecífica pero de gran utilidad ya que su aumento es siempre un signo de enfermedad.
  • La VSG también se correlaciona con la actividad de la enfermedad y puede ser útil para el seguimiento de ciertas afecciones.

Hombres: 45-57 %

Mujeres: 42-48%

HEMOGRAMA

HEMATOCRITO

  • Se efectúa mediante la técnica del microhematocrito.
  • Se recoge la sangre mediante un capilar y se llena hasta las 3/4 partes del tubo y se inclina para acelerar su llenado.
  • Se tapa uno de los extremos con plastilina o se flamea con un cerillo para sellarlo.
  • Se coloca en la microcentrífuga clínica, con ka parte cerrada sobre la empaquetadura de la mismoa y se pone la tapa.
  • Se centrifuga a 16000rpm durante 5 minutos
  • con una escala o regla se mide desde la superficie de separación de la plastilina hasta el menisco del plasma.
  • Se mide ek paquete globular y se determina el porcentaje que le corrsponde.

Es el conjunto de pruebas de laboratorio clínico para el estudio cualitativo y cuantitativo de los elementos que forman la sangre.

Interpretación de los resultados:

La VSG varía según edad y sexo

  • En niños es inferior a 10 mm.
  • En adultos varones menor de 10 mm.
  • En mujeres adultas menor de 15 mm.

Procedimientos:

  • Wintrobe-Una muestra de sangre venosa anticoagulada con EDTA
  • Técnica en capilares (Velocidad de microeritrosedimentación)

-pequeña muestra sanguínea por punción venosa o en el talón

Los resultados de la velocidad de sedimentación VSG se eleva en:

La VSG puede aparecer disminuida en:

  • Descenso de proteínas en el plasma (por problemas hepáticos o renales)
  • Disminución del fibrinógeno
  • Fallos cardiacos
  • Policitemia

  • Anemia intensa
  • Artritis reumatoide
  • Enfermedades renales
  • Enfermedades autoinmunes (Lupus eritematoso)
  • Enfermedades tiroideas
  • Embarazo
  • Fiebre reumática
  • Infecciones agudas
  • Mieloma múltiple
  • Polimialgia reumática
  • Sífilis
  • Tuberculosis
  • Vasculitis

Universidad Nacional Autónoma de México

Facultad de Estudios Superiores Iztacala

Química Sanguínea

¿DUDAS?

TÉCNICA MANUAL: GLUCOSA

Técnica manual

Solución ortotoluidina

Reactivos

Determinación de Glucosa:

Suero control

  • Muestra de sangre de punción venosa
  • Dejar que coagule
  • Una vez coagulada la sangre, proceder a la obtención del suero centrifugado a 2,500 rpm durante 5 minutos

Colesterol

  • Con ayuda de la pipeta Pasteur separar el sobrenadante, y transferirlo a un tubo de 13x100 limpio y seco. (problema)

  • Pertenece a un grupo de compuestos orgánicos llamados esteroides.
  • La tasa total del organismo depende del balance entre aporte y pérdida del mismo.
  • El aporte es la suma de colesterol que se absorbe procedente de la dieta y del que se sintetiza en el organismo
  • La pérdida tiene lugar mediante su transformación en ácidos biliares, hormonas o su excreción.

Técnica Manual: Colesterol

Reactivo de colesterol

reactivos

Patrón de colesterol 250mg/100mL

  • Con ayuda de la pipeta Pasteur separar el sobrenadante, y transferirlo a un tubo de 13x100 limpio y seco. (problema)

  • Agitar fuertemente cada tubo e incubar a 37°C durante diez minutos
  • Leer en espectofotómetro a 640nm los tubos 2 y 3, ajustando a cero con el tubo 1 (Blanco)

Concentración de colesterol del patrón ( mg/mL) – F

Lectura (absorvancia) del patrón del colesterol)

Valor de referencia:

150-250 mg/100mL

  • Mezclar cada tubo por agitación y colocarlos e baño maría a ebullición durante 10 minutos
  • Enfriar los tubos en agua, agitar y leer en espectofotómetro a 630 nm
  • Leer en absorvancia
  • Cálculos:
  • Concentración en mg del suero control – F
  • Lectura del suero control
  • Valor de referencia: 60-110 mg/100 mL

Creatinina sérica

Técnica manual: creatinina

Agua destilada

Reactivos

Patrón de creatinina

Reactivo para creatinina (picrato alcalino)

  • Con ayuda de la pipeta Pasteur separar el sobrenadante, y transferirlo a un tubo de 13x100 limpio y seco. (problema)
  • Agitar y dejar reposar a temperatura ambiente durante 10 minutos
  • Leer los tubos 2 y3 en el espectofotómetroa 520 nm ajustando a cero con el tubo 1

  • Concentración en mg del suero control químico- F
  • Lectura del suero control químico
  • Valor de referencia: 0.5- 1.5 mg/ 100 mL

  • Deriva de la creatinina del tejido muscular.
  • Se encuentra distribuida en el agua total del cuerpo
  • Depende de la masa corporal de cada individuo
  • Un excedente se da en presencia de :
  • Enfermedades musculares severas
  • Distrofia muscular
  • Atrofia
  • Miositis
  • Hipertiroidismo
  • Evaluación de función renal

El examen le dará al médico información sobre:

  • Detección de diabetes mellitus
  • Hiperglicemia
  • Hiperglicemia emocional
  • Secreción de adrenalina
  • Lesiones cerebrales
  • Intoxicaciones por monóxido de carbono

  • Cómo están funcionando los riñones y el hígado.
  • Niveles de azúcar, colesterol y calcio en la sangre.
  • Niveles de sodio, potasio y cloruro (electrolitos).
  • Niveles de proteínas.

  • Es un grupo de exámenes de sangre que suministran información acerca del metabolismo del cuerpo.
  • El examen de química sanguínea; se hace con el fin de detectar alteraciones en los niveles de glucosa, colesterol, HDL (lipoproteínas de alta densidad), urea, ácido úrico, triglicéridos, creatinina, sodio, calcio, potasio, cloruro.

Cobas c111

Resultados

  • Técnica: Fotometría de absorción (Cobas c111)

Hombres: >60 <100 mg/dl, Mujeres: >60 y <100 mg/dl

gl

Adultos/Ancianos: <200 mg/dl, Niños: 120-200 mg/dl

Chol

Hombres:>45 mg/dl, Mujeres: >55 mg/dl

HDL

Hombres:40-160 mg/dl Mujeres:35-135 mg/dl

Trgl

Materiales:

  • Cobas c111
  • Muestras rotuladas
  • Gradilla
  • Reactivos
  • Agua desionizada

Crea

Hombres: 0.6-1.2 mg/dl, Mujeres: 0.5-1.1 mg/dl

UA

Hombres: 4-8.5 mg/dl, Mujeres: 2.7-7.3 mg/dl, Niños: 2.5-5.5mg/dl

Hemoglobina glicosilada:

  • No diabéticos: 2,2-4,8%
  • Diabéticos bien controlados: 2,5-5,9%
  • Diabéticos con control aceptable: 6-8%
  • Diabéticos mal controlados: >8

Procedimiento:

  • Teclear el número de folio de la muestra correspondiente con las pruebas solicitadas. Introducir la muestra en el área de muestras. El área de muestras tiene capacidad para 8 tubos de ensaye.
  • Se puede retirar la muestra que haya terminado de ser pipeteada para poder introducir otra.
  • Al terminar la jornada, imprimir resultados, sacar el disco de reactivos y colocarlo dentro del refrigerador a una temperatura de 2-8°C, cambiar las cubetillas utilizadas por nuevas.
  • Reportar si hay anormalidad en suero (lipémico, hemolizado, ictérico) y resultados obtenidos.

*NOTA: Durante la jornada será necesario vaciar el contenedor de desechos, llenar el contenedor de agua desionizada, cambiar cubetillas y reactivo en medida que el equipo lo solicite.

  • Encender el Cobas c111, comprobar que haya agua desionizada suficiente en el contenedor, colocar correctamente el disco de reactivos, desproteinizar la aguja con el activador y el desproteinizante correspondiente.
  • Revisar el número de pruebas que se pueden realizar con la cantidad de cada uno de los reactivos.
  • Comprobar que haya cubetillas suficientes disponibles.
  • Introducir controles de calidad de cada uno de los reactivos al Cobas c111, y si así lo requiere, también los calibradores.
  • Centrifugar los tubos de ensaye rotulados con su respectiva muestra de sangre venosa a 3,500 rpm. durante 10 minutos.

Urea

Alumnos:

*Casañas Frutos Moisés

*Cornejo Alvarez Samanta

*Sánchez Sánchez Alejandra

*Sandoval González Emirith Pamela

*Soria Pérez Yoselyn Vianey

  • Es el principal producto del metabolismo de las proteínas
  • Se deriva de los grupos amino de los aminoácidos
  • El hígado es el más importante de la síntesis de urea

Proteínas totales del suero: albúmina y globulina

Técnica manual: urea

  • Con ayuda de la pipeta Pasteur separar el sobrenadante, y transferirlo a un tubo de 13x100 limpio y seco. (problema)

Técnica manual: Proteínas totales

  • Incubar a 37°C durante 20 minutos en baño maría, después agitar todos los tubos
  • Agregar 8 mL de agua destilada a cada uno de los tubos
  • Agitar perfectamente los tubos, invirtiendolos varias veces
  • Leer los tubos dos y tres en el espectómetro
  • Cálculos:
  • Concentración en mg /100 Ml de suero control químico – F
  • (lectura de suero control químico)(0.95)
  • Valor de referencia: 15 – 50 mg / 100mL

Reactivo de Biuret

Reactivos

Patrón de proteínas g/100 mL

NaOH al 3%

  • Con ayuda de la pipeta Pasteur separar el sobrenadante, y transferirlo a un tubo de 13x100 limpio y seco. (problema)

  • Dejar reposar a temperatura ambiente durante 15 minutos. Después agitar los tubos y leer a 545 nm en el espectómetro.
  • Cálculos
  • Concentración del patrón de proteínas g/100 mL – F Lectura del patrón de proteínas
  • Valor de referencia: 6.2- 8.5 g/100 mL

TÉCNICA MANUAL: ALBÚMINA

Reactivo verde de bromocresol

  • Pueden ser:
  • Enzimas
  • Proteínas de transporte
  • Anticuerpos
  • Factores de coagulación
  • Se clasifican en albúminas y globulinas según su grado de solubilidad
  • Su disminución puede ser causada por
  • Hemorragias
  • Desnutrición
  • Deprivación proteica prolongada

Reactivos

Patrón de albúmina de concentración conocida

Agua destilada

  • Con ayuda de la pipeta Pasteur separar el sobrenadante, y transferirlo a un tubo de 13x100 limpio y seco. (problema)

  • Mezclar por inversión y leer en espectómetro a 630 nm

Leer absorvancia

  • Cálculos:

F- Concentración el patrón e albúmina g/100mL

Lectura del patrón de albúmina

  • Valor de referencia: 3.6 – 5.0 g/100 mL

¡GRACIAS!

Biol. Adrián Elier Maldonado Hernández

Bibliografía:

 Levinson-Mac F. Diagnóstico clínico de laboratorio. 2ªediciòn. Buenos Aires: El Ateneo; 1962.

 Pagana P. Guía de pruebas diagnósticas y de laboratorio. 5ª edición. Madrid España: Elsevier.

 Rosales BL, Galicia RH. Manual de prácticas de hematología. 1ra edición. México, D.F: Instituto Politécnico Nacional; 1998.

 Gómez DA, Prerez J. Hematología: La sangre y sus enfermedades. 2da edición. México DF: Mc Graw Hill; 2009.

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