Tinciones-Protozoario con lugol y Hongos con azul de algodon

Tinciones

¿Cómo se observan los protozoarios con lugol? ¿Porqué se hace el azul de algodón en hongos?

Aspectos teóricos

El tamaño de los microorganismos impide detectarlos a simple vista, por lo que es esencial el uso del microscopio.

Para aumentar el contraste de los microorganismos y lograr una mejor observación de los mismos, se emplean diferentes preparaciones

y técnicas de tinción.

Tinciones

Teñir los microorganismos proporciona suficiente contraste para poder visualizarlos con un microscopio de campo claro. Casi todos los colorantes son sales, es decir están formados por iones cargados.

Los protozoos son organismos microscópicos, unicelulares, heterótrofos, que viven en medios líquidos y que se reproducen por bipartición; Algunos: Rizópodos, Ciliados, Flagelados y Esporozoos.

Resolviendo

¿Cómo se observan los protozoarios con Lugol?

En la observación de ptotozoos con Lugol.

*Tiñe: Inclusiones de reserva (el

almidón azul, el paramilo rojo y

el glicógeno pardo), flagelos y

cilios (castaño rojizo)

citoplasma, núcleo, trofozoitos y

quistes

*Observaciones: De acuerdo con su contenido se tiñe:

Azul- almidón

Rojo- paramilo

Pardo- glicógeno

¡Para que se utiliza azul algodón en hongos?

Quistes de Balantidium spp. Examen microscópico directo a partir de heces de cerdo. A.- Examen en fresco con s.s 0,85%. 400x. B.- Coloración con lugol. 40x.

La tinción de azul algodón de lactofenol no es considerada una tinción diferencial, sin embargo, posee características tintoriales que permiten observar cada uno de los componentes fúngicos y apreciar fácilmente las estructuras para una adecuada identifi cación.

El fenol inactiva las enzimas líticas de la célula e impide que ésta se rompa; de igual forma,

destruye la flora acompañante e inactiva a la célula, quitándole el grado de patogenicidad; además, actúa como mordiente cuando se usa en combinación con colorantes. El ácido láctico preserva las estructuras fúngicas al provocar un cambio de gradiente osmótico con relación al interior fúngico, lo que genera una película protectora. El azul de algodón es un colorante ácido, que tiñe el citoplasma y la quitina presente en las células fúngicas, mientras que el glicerol mantiene húmeda la preparación.

Fotomicrografía de hongos filamentosos

con el método de azul algodón de lactofenol. Exserohilum sp. (izquierda); Mucor spp. (derecha) (aumento 40x).

Colorantes

Los Mordientes, son sustancias que aumentan la afinidad de la célula por el colorante. Suelen añadirse después del colorante en determinadas tinciones diferenciales.

Las tinciones diferenciales se utilizan para distiguir entre tipos de microorganismos (uso de dos colorantes). Se realiza una tinción primaria, y posteriormente una tinción de contraste (Gram) para teñir las células que no se hayan teñido previamente.

Los colorantes vitales permiten observar movilidad, así como algunos de sus organelos o inclusiones teñidas, sin daño aparente; estos se preparan en soluciones acuosas o alcohólicas muy diluidas.

Algunos pueden utilizarse a concentraciones que no matan las células con lo que permiten observar microorganismos vivos (Colorantes Vitales) pero la mayoría sólo son efectivos después de fijar los microorganismos, es decir cuando están muertos y adheridos al portaobjetos.