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Presentacion Seminario de Graduación

Bosquejo presentación
by

Elizabeth Alun Mellado

on 12 October 2014

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Transcript of Presentacion Seminario de Graduación

ANÁLISIS FILOGENÉTICO DE TRES MORFOTIPOS DE LA

SANGUIJUELA GIGANTE,
Americobdella valdiviana

PHILIPPI, 1872 (ANNELIDA: HIRUDINEA), DE LA PROVINCIA DE VALDIVIA
Elizabeth Alun Mellado
INTRODUCCIÓN
Americobdella valdiviana
PHYLUM ANNELIDA
HIPÓTESIS
OBJETIVO GENERAL
OBJETIVOS ESPECÍFICOS
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
Evaluar los distintos
morfotipos
observados en
Americobdella valdiviana
mediante
análisis filogenético
molecular
1. Obtener secuencias de Citocromo oxidasa I de diferentes morfotipos de
Americobdella valdiviana
.

2. Comparar mediante análisis filogenéticos las secuencias obtenidas, con aquellas de sanguijuelas registradas en GenBank.

3. Determinar si los distintos morfotipos de
Americobdella valdiviana
corresponden a especies diferentes.
CLASIFICACIÓN
Annelida
Polychaeta
Clitellata
Echiura
Sipuncula
Oligochaeta
Hirudinida
Branchiobdellida
(Hickman
et al
, 2009)
(Philippi, 1872)
2014
Americobdella valdiviana
presenta varios morfotipos, con distintas variedades de colores.

En un árbol filogenético, los taxones correspondientes a los morfotipos observados en
Americobdella valdiviana
, aparecerán separados como grupos monofiléticos, con altos valores de soporte.
MATERIAL Y MÉTODOS
MATERIAL Y MÉTODOS
Colecta de especímenes
Para una práctica identificación en el laboratorio a cada individuo se le asignó una letra, dependiendo del lugar de procedencia. (Tabla 1).
Aislamiento DNA genómico
Amplificación gen mitocondrial COI
Análisis filogenético de Máxima Parsimonia
Árbol más parsimonioso 2994 pasos.


Los morfotipos de
A. valdiviana
aparecen como un grupo monofilético bien soportado.


La secuencia de
A. valdiviana
de Genbank aparece basal dentro de este grupo


Aparece como grupo hermano de las Familias Hirudinidae y Semiscolicidae.

(Llancahue)
(Chan Chan)
(Chan Chan)
(Paillaco)
Análisis filogenético de Máxima Verosimilitud
Los morfotipos de
A. valdiviana
aparecen como un grupo monofilético bien soportado.

La secuencia de
A. valdiviana
de Genbank aparece más relacionada a los morfotipos de Chan chan

Aparece como grupo hermano la familia Xerobdellidae.
(Chan Chan)
(Chan Chan)
(Paillaco)
(Llancahue)
Análisis filogenético de Inferencia Bayesiana
(Chan Chan)
(Chan Chan)
(Paillaco)
(Llancahue)
¡GRACIAS
TOTALES!

Aislamiento DNA genómico
Extracción de tejido
Protocolo de extracción Fenol-cloroformo (Sambrook
et al
.,1989)
Electroforesis
(Gel Agarosa 1%)

Visualización
(Transiluminador UV)
Fotografía digital
Amplificación DNA mitocondrial
PCR
PCR gradiente temperatura y concentración

COI
LCO1490
(5’ -GGT CAA CAA ATC ATA AAG ATA TTGG- 3’)
HCO2198
(5’ -TAA ACT TCA GGG TGA CCA AAA AATCA- 3’)
Purificación y Secuenciación
(MACROGEN INC.)
Alineamiento
(CLUSTAL X2)
Análisis Filogenético
cuatro secuencias (tres morfotipos)
67 taxa (GenBank)
Máxima Parsimonia
(MP)
Máxima Verosimilitud
(ML)
Inferencia Bayesiana
(BI)
PAUP*
MrBayes
MATERIAL Y MÉTODOS
17.210 especies descritas (Zhang, 2011)
CARACTERÍSTICAS
Invertebrados protostomados
Forma vermiforme
Segmentados por metámeros
HÁBITAT
Marinos
Terrestres
Dulceacuícolas
ALIMENTACIÓN
Filtradores
Hematófagos
Depredadores, etc.
Glossiphoniidae
Xerobdellidae
Semiscolidae
En Chile...
Piscicolidae
PLASTICIDAD FENOTÍPICA

Diferentes Hábitat


Terrestre

Acuático
ONTOGENIA

Diferentes estados de desarrollo


Juvenil

Adulto
Los morfotipos de
A. valdiviana
aparecen como un grupo monofilético bien soportado.

La secuencia de
A. valdiviana
de Genbank aparece más relacionada con los morfotipos de ChanChan

Grupo hermano de la Familia Erpobdellidae.

Politomía entre Familias Hirudinidae, Semiscolecidae y Erpobdellidae.
(Phylum)
(Clase)
(Clase)
(Clase)
(Clase)
(Clase)
(Clase)
Americobdellidae
(Ringuelet, 1985)
(Borda & Siddall, 2004)
PHYLUM ANNELIDA
POLYCHAETA
OLIGOCHAETA
HIRUDINIDA
SubClase :
Hirudinea
Orden :
Arhyncobdellida
SubOrden:
Erpobdelliformes
Familia :
Americobdellidae
Género :
Americobdella
Especie :
Americobdella valdiviana
CLASIFICACIÓN
Americobdella valdiviana
(Philippi, 1872)
¿Corresponden los morfotipos de
A. valdiviana
a especies diferentes?

Si son varias especies, ¿cuántas hay?

¿Es posible delimitarlas filogenéticamente?
PREGUNTAS
1
2
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
3
Análisis
filogenéticos
y marcadores
moleculares
COI
(
Citocromo oxidasa subunidad
I)
MATERIAL Y MÉTODOS
PAUP*
Hsearch

100 réplicas

Adición de secuencias al azar

TBR
Hsearch

Modelo: AIC

Adición de secuencias al azar

TBR
Modelo: AIC

MCMC

Ngen: 50.000.000
Delimitación de especies
Alta variabilidad intraespecífica
Permite diferenciar entre especies.
Máxima Parsimonia
(MP)
Máxima Verosimilitud
(ML)
Inferencia Bayesiana
(BI)
Árbol con menos pasos.
Menor cantidad de cambios evolutivos.

Modelos probabilísticos para seleccionar el mejor árbol; la más alta probabilidad de reflejar el proceso evolutivo real
Maximiza la probabilidad de observar el árbol dado los datos y el modelo de evolución molecular.
HIRUDINIDA
Hematófagos
Hermafroditas
Acuáticas
MP
BI
ML
Análisis del clado
Americobdella valdiviana
con los tres métodos
Sin congruencia
Monofilia de los morfotipos
El
morfotipo de GenBank
AY425443
.
poliquetos
gusanos de tierra
sanguijuelas
Hipótesis acerca de estos morfotipos
Tercera Hipótesis:

Más de una especie
Perez-Losada et al, 2011
Hipótesis
Electroforesis DNA genómico de
Americobdella valdiviana
en tampón TAE 1X, teñido con SYBRGreen (1µg/mL).

C1
: estándar de tamaño molecular 100bp DNA Ladder (0.1 µg/µL)
C2:
morfotipo A
C3
y
C4
: morfotipo B(1) y B2
C5:
morfotipo C.
Electroforesis de los productos de PCR de
Americobdella valdiviana
, teñido con SYBRGreen (1µg/mL)
C1
: estándar de tamaño molecular 100bp DNA Ladder (0.1 µg/µL)
C2-C5
: morfotipos A, B (1; 2) y C respectivamente.
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