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VO 130909 mod 4.8 0918 4.9.2 1031 FADE IN

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on 23 April 2014

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Current State
1.2 Introducción
2. Justificacion
3. Hipotesis y objetivos
4. Material y Métodos (I)
Análisis de la longitud telomérica
en leucocitos
de pacientes con cáncer de mama
Arantxa Garcia
Laboratorio de Genética Molecular y Radiobiología
Centro Oncológico de Galicia
1. Introducción
2. Justificación del estudio
3. Hipótesis y Objetivos
4. Material y Métodos
5. Cronograma y plan de trabajo
6. Experiencia del equipo investigador
7. Aspectos ético-legales
8. Plan de difusión de los resultados
9. Memoria económica
4.1 Ámbito de estudio
4.2 Periodo de estudio
4.3 Tipo de estudio
4.4 Estrategia de búsqueda bibliográfica
4.5 Criterios de inclusión
4.6 Criterios de exclusión
4.7 Mediciones y Variables
4.8 Secuencia temporal de las mediciones
4.9 Estrategia para las mediciones
4.10 Justificación del tamaño muestral
4.11 Análisis estadístico
4.12 Limitaciones del estudio
PCR convencional:
- Cualitativa (si o no)
- Técnicas de detección adicionales
1.1 Introducción
4.1 Ámbito de estudio
4.2 Periodo de estudio
2.1 Incidencia
Ca de mama 30% del total
1 de cada 8 mujeres
Diagnosticados 22.000 casos nuevos
2.2 Implicaciones terapéuticas
Acortamiento
acelerado del telómero
2.3 Impacto del estudio
La >ía, en alguna fase del tto, recibirán QT
Efecto sistémico
- tumor
- tejidos sanos (regeneración activa)

Marcador informativo
¿del daño?
¿de la capacidad de renovación?
"Se van a producir cambios en la longitud telomérica de las células de los tejidos sanos de los pacientes tratados con QT"
PRIMER OBJETIVO
"Comparar la longitud telomérica de los leucocitos entre el grupo de pacientes mujeres con cáncer de mama con un grupo control de mujeres sanas"
SEGUNDO OBJETIVO
"Determinar la posible modificación de la longitud telomérica en los leucocitos del grupo de pacientes
antes, durante y tras el tto adyuvante"
4.3 Tipo de estudio
3.2 Óbjetivos
3.1 Hipótesis
PRIMER OBJETIVO
"Mujeres con cáncer de mama con mujeres sanas"
"Estudio casos-controles"
SEGUNDO OBJETIVO
"Mujeres con Ca de mama"
"Estudio observacional de seguimiento prospectivo"
2 años
4. Material y Métodos
4. Material y Métodos (III)
- Mujeres mayores de edad (40-65 a).
- Consentimiento informado.
4. Material y Métodos (IV)
4.7 Mediciones
a.- Variables sociodemográficas
Edad participante
Peso
Talla
Superficie corporal
Enfermedades reumatológicas
score de Charlson
b.- Variables antropométricas
d.- Antecedentes obstetrico-ginecológicos
c.- Variables médicas
Edad: menarquia y menopausia
Bioquímica y hemograma
Cuantificación del ADN
Apartados del estudio
4. Material y Métodos (VIII)
4.11 Análisis estadístico
Análisis
Univariado
Análisis
Bivariado
Análisis
Multivariado
Variables cuantitativas:
Media ± DT
Variables cualitativas:
Valor absoluto y porcentaje (95% IC)
Análisis de datos independientes
T de Student o Test de Mann-Whitney
Chi-cuadrado
Análisis de datos pareados:
T de datos pareados o Test de Wilconson
McNemar
Análisis multivariado de
regresión logística o lineal múltiple


Cp
of unknown sample
Inicial concentration
of unknown sample
Relaciona cada el Ct de la muestra con el log de la [ADN].
Si eficiencia = 100% la pendiente a= -3.32
y = ax + b
Cp = a log [ADN] +b
PCR en tiempo real:
- Cuantitativa
- Técnicas de detección simultanea a la amplificación
- Procesamiento de la muestra.
- Lisis celular
- Aislamiento del ADN

4.9.1 Extracción de ADN
4.9.2 Análisis genético
4. Material y Métodos (VI)
4.9. Estrategia de las mediciones
Secuencia temporal de las mediciones

4. Material y Métodos (VII)
4.10 Justificación del tamaño muestral
Bases de datos generales
4. Material y Métodos (II)
4.4 Estrategia de búsqueda bibliográfica
4. Material y Métodos (IX)
4.12 Limitaciones del estudio

4.5. Criterios de inclusión
4.6. Criterios de exclusión
4.5 Criterios de inclusión
4.5 Criterios de inclusión
Bases de datos especializadas
en revisiones sistemáticas
- Mujeres mayores de edad (40-65 a).
- Consentimiento informado.
- Diagnóstico AP Ca Mama.
- Estadio TN M0.
- Tto adyuvante:
QT secuencial antraciclinas-taxanos.
4.6 Criterios de exclusión
- Mujeres expuestas a radiaciones ionizantes.
- Mujeres con antecedentes de neoplasias previas.
4.6 Criterios de exclusión
- Mujeres con enfermedad neoplásica recurrente,
metacrónica o sincrónica.
- Casos incidentes sometidos a tto neoadyuvante.
- Casos incidentes con indicación de tto
adyuvante con HT y/o RT.
T1 (ANTES de Tto)
Ciclo 1
4 ciclos de
antraclicinas +
ciclofosfamida
Ciclo 4
Ciclo 2
Ciclo 3
T2 (antes del Ciclo 2)
T4 (1ªrevisión)
T3 (antes del Ciclo 1)
Ciclo 4
Ciclo 3
T5 (2ª revisión)
4 ciclos de
taxanos
Seguimiento
Previo a Tto
T1
Variables:
- Socio-demográficas
- Antropométricas
- Médicas
- Obstetrico-ginecológicos
- Comorbilidad
Análisis:
- Clínico básico
- Genético-molecular
T2-T5
Análisis:
- Clínico básico
- Genético-molecular
Sesgos de
selección
Sesgos de
información
Sesgos de
confusión
Derivados de
la presencia de terceras variables
- Información sobre variables relacionadas con el evento de interés.
- Análisis multivariado de regresión logística.
Derivados de
como se obtuvieron los datos
Derivados de
los criterios de inclusión

- Entrenamiento de los observadores.
- Procedimientos estandarizados.
- Instrumentos.
- Calibrados...

- Comparación de resultados con
estudios similares.
El N ha sido calculado para detectar diferencias en la longitud telomerica
pero NO para el resto de las variables
(fines exploratorios ante el posible efecto sobre las mediciones genético-moleculares)
GRUPO DE PACIENTES
GRUPO CONTROL
f.- Análisis clínico básico
Longitud telomérica
PRIMER OBJETIVO
"Mujeres con cáncer de mama con mujeres sanas"
TIPO DE ESTUDIO
"Estudio casos-controles"
TAMAÑO MUESTRAL
Grupo Control N = 25
Grupo de Pacientes N = 25
SEGUNDO OBJETIVO
"Mujeres con Ca de mama"
TIPO DE ESTUDIO
"Estudio observacional de seguimiento prospectivo"
TAMAÑO MUESTRAL
Grupo de Pacientes N = 25
Seguridad 95%
Poder estadístico 80%
ante un planteamiento bilateral
Detección diferencias
5 kb/genoma diploide
Detección diferencias
2 kb/genoma diploide


5. Cronograma y plan de trabajo
6. Experiencia del equipo investigador
7. Aspectos ético-legales
8. Plan de difusión de los resultados
9. Memoria económica
2.- Cuando se acorta el telómero?
3.- Cuanto tiene que acortarse
para entrar en senescencia?
4.- Se acorta de forma progresiva?
5- Que factores influyen en el tamaño y acortamiento del telómero?
1.- Como es la estructura de un telómero?
(B) GRUPO DE PACIENTES
(A) GRUPO CONTROL

T1
Variables:
- Socio-demográficas
- Antropométricas
- Médicas
- Obstetrico-ginecológicos
- Comorbilidad
Análisis:
- Clínico básico
- Genético-molecular

g.- Análisis genético-molecular
e.- Comorbilidad
Edad de los progenitores en el momento de la concepción
T1
(Reclutamiento)
a + toxicidad , + daño
a + daño, + muerte celular
a +muerte celular, + renovación tisular
a + renovación tisular, + tasa de división/replicación
T2
(10 meses ± 2)
T2
Análisis:
- Clínico básico
- Genético-molecular
estrés oxidativo
estrés replicativo
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