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El papel de la proteína de choque térmico DnaK en la determi

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on 18 December 2013

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Transcript of El papel de la proteína de choque térmico DnaK en la determi

El papel de la proteína de choque térmico DnaK en la determinación del espectro molecular de mutaciones en
Escherichia coli
: plegamiento y robustez mutacional
INTRODUCCIÓN
Mutación
Sinónima
No sinónima
Mecanismos de robustez
OBJETIVOS
Introducción de un plásmido con el sistema DnaK en
E. coli
K12 MG1655
∆mutS
Acumulación de mutaciones en condiciones de sobre-expresión del sistema DnaK
Evaluación de parámetros biológicos
Secuenciación genómica y caracterización de mutaciones
Determinar la capacidad amortiguadora del sistema DnaK
MATERIALES
Plásmido
Bacteria
Medios
Escherichia coli
DH5α
Escherichia coli
K12 MG1655
∆mutS
LB
Cm
Ara
Agar
MATERIALES Y MÉTODOS
RESULTADOS
Presencia de plásmido
Expresión de DnaK
Anomalías
Tasas de crecimiento
Líneas seleccionadas
37ºC
42ºC
1.1
1.2
8.3
1.6
8.4
10.5
Western líneas seleccionadas
Conclusiones
La cepa ∆S0 con el plásmido pKJE7 sobre-expresa el sistema DnaK y permite la acumulación de mutaciones deletéreas en mayor medida que sin el plásmido.

La acumulación de mutaciones deletéreas es mayor cuanto más estrés térmico se aplica.

DnaK, al igual que GroEL, amortigua el efecto deletéreo de mutaciones en sus proteínas clientes, permitiendo que acumulen más mutaciones, que podrían estar implicadas en neofuncionalización (por cambios morfológicos observados y cambios en las tasas de crecimiento), respecto a las proteínas no clientes.

Mutaciones acumuladas
37ºC
42ºC
Materia prima de la
evolución
Paisaje adaptativo
¿Cómo se producen los grandes saltos adaptativos?
Amortiguación de mutaciones
Redundancia funcional
Plegamiendo de proteínas
Sistema DnaK
Tasa de fijación de mutaciones
Controles
OBJETIVOS
MATERIALES Y MÉTODOS
RESULTADOS
CONCLUSIONES
Cooperación de chaperonas en
E. coli
Ancestrales
Líneas evolucionadas 85 pases
Pase 85
DnaK facilita la fijación de mutaciones en sus clientes
Muchas gracias por vuestra atención
Víctor Berlanga Laparra
Mayor acumulación de mutaciones
85 pases
1700 generaciones
genoma
4.640.000 nucleótidos
Clientes > No clientes
TFC
Victor Berlanga
- Selección
- Comprobación de la indentidad de la bacteria
- Secuenciación genómica
INTRODUCCIÓN
37°C
42°C
37°C
42°C
37°C
42°C
Amortiguación de mutaciones por GroES/EL y Hsp90.
¿DnaK?
Sobre-expresión de GroES/EL y DnaK en bacterias endosimbiontes
¿Papel de DnaK?
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