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LEQs01E01

Primer experimento de la tesis
by

Aitor Patiño Diaz

on 14 June 2013

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Transcript of LEQs01E01

Inmovilización de una proteína recombinante de T. cruzi sobre superficies de Grafito
Electroquímica
Seminario del
grupo

Br. Aitor Patiño
¿Que es lo nuevo de este trabajo?
Este trabajo de grado es la continuación de una línea de investigación del Laboratorio de Electroquímica junto al de Enzimología de Parásitos, el precedente es la tesis de Maiz Padrón.
La principal diferencia entre ambos es la superficie electródica, de Carbón Vítreo a Grafito.
Intentamos desarrollar un immunosensor con miras al diagnóstico in situ de pacientes reales en zonas rurales de nuestro país.
Si se demuestra la factibilidad de la superficies de grafito como parte del sistema de transducción biológico, se abren las puertas a sistemas de detección masiva de bajo costo.

Justificación
La enfermedad de Chagas-Mazza es una enfermedad silente para la cual no existe cura.
El único control epidemiológico posible es la prevención y diagnóstico oportuno.
Las técnicas de diagnóstico mas empleadas en la actualidad involucran a personal especializado en el uso del instrumental de laboratorio y/o equipos costosos.
La mayoría de las mismas requieren un extenso tiempo de análisis.
Mediante protocolos descritos por el L.E.P es posible diagnosticar, por técnicas de biología molecular , inequívocamente la presencia del parásito en humanos.
Estrategia
Caracterizar la respuesta de cada componente del ensamblaje molecular requerido para el diagnóstico del mal de Chagas mediante técnicas electroquímicas.
Debido a las características físicas del grafito, detalles en su fabricación y demás factores. Es necesario caracterizar cada electrodo de este material.
Pretendemos evaluar la respuesta, etapa por etapa del inmunosensor-to-be para determinar unos parámetros ideales de operación.
La técnica empleada será la voltametría cíclica.
Gracias a una serie de experimentos previos se lograron optimizar las condiciones de operación asi como el tratamiento óptimo del electrodo de grafito
CV
Evaluar un sistema bien reportado, de cinética simple, rápida y reversible con propiedades redox bien definidas.
El ferrocianuro de potasio es un candidato ideal.
Esta cupla se va a determinar por voltametría cíclica en un medio reportado (KNO3) y en el Buffer de Incubación de Anticuerpos (PBS, phosphate buffer saline [NaCl]=0,13M [Na2HPO4*2H20]=0,005M [KH2PO4]=0,0015M pH=7,2) para cumplir con la estrategia planteada.
Metodología Experimental
Lijar el electrodo en lijas 400, 500 y 1000 en "8", 40 veces c/u
Pulirlo en Alúmina 0,3 um y 0,05 um, en "8" 80 veces.
Sonicarlo por 30 s
Desgasificar las soluciones a evaluar por 5 minutos.
La activación (de ser el caso) se realiza mediante una cronoamperometría en H2SO4 a 1,8V por 60 s.
Entre cada experimento se repitieron las etapas del tratamiento del electrodo.
El tratamiento con Tritón X-100 (de ser el caso) se realiza por sumersión del electrodo en una solución 0,003% por 30 s
Respuesta del Grafito en KNO3
Respuesta del Grafito Activado (KNO3)
Respuesta del Grafito Con Tritón
ref: P.J. Elving, D.L Smith- The Graphite Electrode
Respuesta del grafito activado con tritón (KNO3)
Resultados
Iniciales
"Finales"
PBS Sin Activar Sin tritón
PBS activado sin tritón
PBS activado con Tritón
PBS sin activar con Tritón
Resultados PBS
Resultados KNO3
Full transcript