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A atuação da Enfermagem na Pesquisa Experimental

Mini-curso da I Jornada Científica de Enfermagem “Enfermagem e as Interfaces do Cuidado” - UFAL, junho de 2014
by

Kátia Mayumi

on 3 July 2014

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Transcript of A atuação da Enfermagem na Pesquisa Experimental

Definição de um objeto de estudo determinado;
Levantamento de
hipóteses
sobre o objeto de estudo;
Seleção de
variáveis
capazes de influenciar o objeto de estudo;
Definição de formas de
controle e observação
dos efeitos produzidos pelas variáveis;
Emprego de rigorosas
técnicas de amostragem
para aumentar a possibilidade de
generalização das descobertas
realizadas com a experiência.
Pesquisa laboratorial x experimental
Pesquisa experimental
Pesquisa Básica
A interface da Enfermagem
O que é pesquisa experimental?
Expectativas
Avaliação da capacidade antioxidante
Plantas medicinais
Importância das plantas medicinais
Biodiversidade brasileira
Riqueza dos biomas brasileiros
Iniciativas governamentais

Abordagem etnodirigida

Revisão da literatura sobre o gênero e espécie: estudos etnobotânicos e etnofarmacológicos x estudos biológicos e farmacológicos comprovando o uso popular

Escolha da espécie e revisão da literatura
Tipos de pesquisa
Laboratório de Pesquisa em Tratamento de Feridas
Preparo dos extratos brutos
Gram +, Gram -, Fungos
Escolha e padronização das cepas microbianas
Padronização da densidade do inóculo tubo 0,5 da escala de Mc Farland (CLSI)
Avaliação da atividade antimicrobiana
Avaliação da atividade antimicrobiana e cicatrizante
Muito obrigada!
mayumikatia@gmail.com

Pesquisa aplicada: visa o desenvolvimento de conhecimento específico sobre um assunto definido e, geralmente, associado ao desenvolvimento de setores econômicos mediante aplicação direta dos resultados obtidos.

Qual a importância da enfermagem dentro desse campo de pesquisa?
Gera conhecimentos novos e úteis sobre um tema para o avanço da ciência, sem aplicação prática prevista e sem objetivos mercadológicos ou industriais.
http://www.ufrgs.br/cursopgdr/downloadsSerie/derad005.pdf
Objetivo: busca de espécies vegetais e/ou substâncias sintéticas com potencial para o tratamento de feridas cutâneas - avaliação do potencial antimicrobiano, cicatrizante e tóxico.
Enfermeiro: facilitador do processo do cuidado;
Envolvimento da enfermagem na consolidação dos objetivos de importantes iniciativas governamentais;
Estudos etnodirigidos em USF/UBS destacam a importância da comprovação farmacológica do uso popular;
Atuação na pesquisa básica: integração com outras disciplinas e intersecção com a assistência.
Ponto de partida: estudo pioneiro em Piranhas e Delmiro Gouveia: 187 plantas medicinais
Espécies endêmicas e com gêneros presentes na RENISUS
* Bauhinia: 300 espécies - folhas, casca do caule e caule - uso popular para diversos fins
* Potencial antimicrobiano de espécies do gênero
* Potencial antioxidante: relação efeito hipoglicemiante (estado hiperglicêmico produção de ROS)
* Lippia: 200 espécies - folhas e flores
* Uso popular para diversos fins e estudos comprovados de seus óleos essenciais
* Potencial antioxidante de espécies do gênero
* Potencial antimicrobiano comprovado de óleos essenciais e compostos fenólicos de LG
Multidisciplinaridade x interdisciplinaridade
Cada disciplina permanece com metodologia própria, não havendo resultado integrado.
Segundo Piaget, é quando a solução de um problema requer a obtenção de informações de uma ou mais ciências ou setores do conhecimento sem que as disciplinas evocadas sejam enriquecidas.
Há interação de diversos conhecimentos de forma recíproca e coordenada; perspectiva metodológica comum a todos; integração dos resultados; busca de soluções dos problemas através da articulação com as outras disciplinas.
LPqPN - Laboratório de Pesquisa de Química de Produtos Naturais (Profa. Lúcia Conserva)
LaFI - Laboratório de Farmacologia e Imunologia (Profa. Eliane Campesatto)
LPqRN - Laboratório de Pesquisa em Recursos Naturais (Prof. Emiliano Barreto)
EB: preparo concentrado de fluidos ou partes sólidas liquidificadas de tecidos vegetais

Uso de solventes adequados para a remoção dos componentes ativos da espécie vegetal.
Evaporação de todo ou quase todo o solvente.
1. Definir partes da planta que serão utilizadas

3. Trituração

5. Filtração e remaceração

2. Secagem

4. Escolha do solvente e maceração
6. Destilação

Retirada da matéria-prima vegetal, incluindo seus princípios ativos, realizada em recipiente fechado, em temperatura ambiente, durante um período prolongado, sob a agitação ocasional.
7. Obtenção dos extratos brutos

Exemplo
Universidade Federal de Alagoas / UFAL
Escola de Enfermagem e Farmácia / ESENFAR
I Jornada Científica de Enfermagem “Enfermagem e as Interfaces do Cuidado”
Maceió, 03 de julho de 2014

A atuação da Enfermagem na Pesquisa Experimental
Kátia Mayumi Caffaro
Andressa Letícia Lopes da Silva - 8ºP
Joice Fragoso da Silva Oliveira - 8ºP

Diâmetros 7 mm
10 mL Agar/placa
Extrato a 10% - 50 microlitros/poço
Controles:
C- DMSO ou Cremophor a 10%
C+: Ceftriaxona, Ciprofloxacina e Fluconazol (CLSI, 2012)
TRIPLICATA
Incubação a 35ºC por 24h e 48h
Técnica da difusão em meio sólido a partir de orifício
>16mm
13-15mm
<12mm

(ALMEIDA, 2011)
Microdiluição em caldo para a determinação da CIM
A: 200 microlitros do extrato
B-H: 100 microlitros caldo Muller Hinton (2x)
Transferência 100 microlitros do extrato até H
Incubação a 35ºC por 18h
TRIPLICATA
LEITURA: 20 microlitros TTC a 0,5% e reincubação por 3h
Cor vermelha: crescimento microbiano
Ausência: ação inibitória do EB
1,0 mg/mL
0,5 mg/mL
0,25 mg/mL
0,125 mg/mL
0,0625 mg/mL
0,03125 mg/mL
C-
C+
A

B

C

D

E

F

G

H
CE
0,015625 mg/mL
Grupo de pesquisa CNPq: Núcleo de Pesquisa e Inovação Tecnológica em Tratamento de Feridas


Linha de pesquisa do PPGENF / UFAL


Docentes e colaboradores
Profs. Lysete Bastos / Regina Sales / Thaís Honório / Patrícia Sarmento
Ensaios
in vitro
Ensaios
in vivo
Aplicação de alíquotas de 2 microlitros da amostra e eluição em sistemas de solventes adequados


Solução metanólica [0,4mM]
CSR: capacidade sequestradora de radicais livres utilizando o radical sintético estável DPPH

DPPH• + AH ↔ DPPH-H + A•
CSR +
CSR: +
C+
+(-) catequina

C+: ácido ascórbico
Solubilização dos extratos em MEOH em diversas [ ] s
Leitura da absorbância de cada [ ] contra o MeOH esp. por 60'
CI50 = [amostra] necessária para reduzir em 50% a [DPPH inicial]
Avaliação da (cito)toxicidade
Ensaio colorimétrico do MTT: determinação da viabilidade celular;
Quantidade de cristais produzidos é diretamente proporcional ao nº céls viáveis.
Prospecção fitoquímica
Identificação das classes de constituintes químicos presentes nos extratos em estudo utilizando protocolo padronizado.
Metodologia com abordagem qualitativa.
Alíquotas de 1mg/mL de cada extrato.
Medicines Research Group
Professor Olivia Corcoran
Cicatrização de Feridas (Química)

Science Without Borders
University of East London

* Espectroscopia NMR;
* HPLC;
* TLC;
* Cromatografia de Coluna;
* Entre outros;

Science Without Borders
University of East London

Pesquisa experimental
Pesquisa básica
Agentes antimicrobianos
Plantas medicinais
Tratamento de feridas
Agentes antioxidantes
RENISUS
Prospecção fitoquímica
Ensaios in vitro
Toxicidade
Ensaios in vivo
Cicatrização
Enfermagem
Interdisciplinaridade
Ciência
Extratos brutos
(quanto aos procedimentos técnicos)
(quanto a sua natureza)

* Macrófagos linhagem celular J774 e EB [1,0, 0,1, 0,01 mg/mL];
* Incubação estufa CO2 a 5% - 48h;
* 47h: lise de 3 pçs 2 microlitros de Triton 100x para comparação de morte cel.;
* Leitura em espectrofotômetro: % céls vivas de acordo com a absorbância;
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