Loading presentation...

Present Remotely

Send the link below via email or IM

Copy

Present to your audience

Start remote presentation

  • Invited audience members will follow you as you navigate and present
  • People invited to a presentation do not need a Prezi account
  • This link expires 10 minutes after you close the presentation
  • A maximum of 30 users can follow your presentation
  • Learn more about this feature in our knowledge base article

Do you really want to delete this prezi?

Neither you, nor the coeditors you shared it with will be able to recover it again.

DeleteCancel

Make your likes visible on Facebook?

Connect your Facebook account to Prezi and let your likes appear on your timeline.
You can change this under Settings & Account at any time.

No, thanks

TURBIDIMETRÍA-NEFELOMETRÍA

No description
by

JESSICA LALALEO

on 15 December 2014

Comments (0)

Please log in to add your comment.

Report abuse

Transcript of TURBIDIMETRÍA-NEFELOMETRÍA

3.- Detección de la luz dispersa
¿CÓMO SE PUEDE MEDIR LA LUZ DISPERDADA?

La dispersión de la luz se puede medir por turbidimetría o por nefelometría.

4.-Turbidimetría
¿QUÉ ES?
Es una técnica analítica basada en la dispersión de la luz cuando atraviesa partículas en suspensión.

2.-PRINCIPIOS
Fenómeno de separación de las ondas de distinta frecuencia al atravesar un material.
Incluye una interacción entre el rayo luminoso incidente y la partícula con la que choca.
5.-Nefelometría
Es un procedimiento analítico que se basa en la dispersión de la radiación que atraviesan las partículas de la materia.

7.-Instrumental
El sistema genérico consta de:
Fuente de energía radiante.
Colimador.
Selector de longitud de onda.
Cubeta
Sistema de detención.

TURBIDIMETRÍA-NEFELOMETRÍA
z,mcnxzkjcs

cmzlmc
INDICE
1.INTRODUCCION
2. PRINCIPIOS
3.DETECCION DE LUZ DISPERSADA
4. TURBIDIMETRIA
5.NEFELOMETRIA
6.APLICACIONES CLINICAS DE LA TURBIDIMETRIA Y NEFELOMETRIA
7. INSTRUMENTAL
8.ASPECTOS PRACTICOS
8.1 Comparación de métodos
8.2 Sensibilidad
8.3 Efecto matriz
8.4 Longitud de onda
8.5 Tipos de análisis
8.6 Ejecución de las técnicas

FACTORES DE LOS QUE DEPENDE LA DISPERSIÓN DE LA LUZ
1. Tamaño de la partícula

2. Dependencia de la longitud de onda
3. Influencia de la concentración
4. Influencia de la distancia del detector
8.-Aspectos prácticos
6.-Aplicaiones clínicas de la turbidimetría-nefelometría
¿CON QUÉ MUESTRAS NOS PERMITEN TRABAJAR ESTAS TÉCNICAS?

8.1.COMPARACIÓN DE LOS DOS MÉTODOS.
8.2.SENSIBILIDAD
8.1.COMPARACIÓN DE LOS DOS METODOS.
La elección entre turbidimetría y nefelometría depende de la aplicación que se de a la técnica y del instrumental de que se disponga.

Hasta hace poco la nefelometría era mejor técnica, actualmente la perfección alcanzada por los espectrofotómetros han dado a las técnicas turbidimétricas gran auge, ya que han ganado en sensibilidad.

Además en el espectrofotómetro se pueden realizar gran cantidad de determinaciones además de la turbidimétricas.

Factores para elección entre turbidimetría y nefelometría:
Intensidad de la radiación transmitida (Turbidimetría) o dispersada (Nefelometría) con la intensidad de la radiación procedente de la fuente.

Tamaño de las partículas dispersantes.

8.2.SENSIBILIDAD
Nefelómetro: la sensibilidad depende de la lectura del blanco y del ángulo de detección.

FACTORES
1. Tamaño de la partícula
La luz dispersada depende de la relación entre el tamaño de esta y la longitud de onda de la luz incidente.
Cuando el tamaño de la partícula es intermedio, la luz aparece dispersa hacia delante (dispersión de Rayleigh) en distintos ángulos, lo que favorece las medidas nefelometrías.
2. Dependencia de la longitud de onda
La intensidad de la luz dispersada es inversamente proporcional a la longitud de onda elevada a la cuarta potencia; lo que quiere decir que a menor longitud de onda de excitación, obtendremos mayor sensibilidad en las medidas
3. Influencia de la concentración
La intensidad de la luz dispersada es directamente proporcional al peso molecular de las partículas y a su concentración en la solución.
4. Influencia de la distancia del detector
La intensidad de la luz dispersada es inversamente proporcional a las distancia del detector elevado al cuadrado; por lo que cuanto más cerca este el detector de la cubeta, mayor sensibilidad obtendremos.
No existe una formula universal que permita calcular la concentración de las partículas en suspensión a partir de la medición de la luz dispersada (similitud con fluorimetria)
Dispersión de Rayleigh
8.3.Efecto matriz.
8.4.longitud de onda.
8.5.Tipos de análisis.
8.6.Ejecución de las técnicas.
8.3.Efecto matriz.
La matriz de un espécimen, es por tanto, el conjunto de todos sus componentes exceptuando el componente a estudiar.
Tanto en los reactivos como en el suero pueden existir partículas que produzcan una dispersión de luz no deseada y por tanto una interferencia analítica.

Esto ocurre con las lipoproteínas y quilomicrones de los sueros lipémicos , por ejemplo, se puede observar mediante el empleo de técnicas cinéticas. También las partículas de suciedad pueden producir dichos efectos → (efecto matriz).

8.4.longitud de onda.
Según la ley de Rayleigh, la intensidad de la luz dispersada aumenta cuando disminuye la longitud de onda.
Los sueros con los que trabajamos contienen proteínas, y componentes que absorben la luz a determinadas longitudes de onda. Las proteínas tienen un pico de absorción por debajo de 300 nm, y los cromógenos del suero tienen otro pico de absorción entre 400 y 425 nm. Los instrumentos tienden por ello a trabajar a λ de 320 a 380 nm.

Interesan λ no absorbibles y bajas. Ejemplo: I=340 nm.

Espectro de la luz solar
8.5.Técnicas de análisis.
A PUNTO FINAL
Tras procesar la muestra se deja pasar un tiempo para que se formen los agregados.
Después se mide la dispersión de la luz de la muestra y se resta a la obtenida con el blanco (contiene solo reactivos).
Por último se mide la concentración de Ag que está presente interpolando el valor anterior sobre una curva de calibración obtenida con los datos de una serie de diluciones de un “Ag patrón”.

VARIABLES QUE INFLUYEN EN LA TÉCNICA

1. INTRODUCCIÓN

1.-Tecnicas analíticas
1.1.No espectroscópicas
1.1.1.Basadas en la dispersion de la luz (Light scattering)
Turbidimetría
Nefelometría

¿QUÉ SON?
La turbidimetría y la nefelometría son técnicas analíticas basadas en la dispersión de la luz producida partículas de una sustancia en suspensión.

¿QUÉ OCURRE?
Cuando un rayo de luz monocromática, polarizada y colimada (paralelos) atraviesa una suspensión homogénea de partículas :
Una parte de la energía es reflejada regularmente
Otra parte es difundida, es decir reflejada en todas las direcciones: DISPERSADA
Otra parte es absorbida
Otra parte es transmitida

LA DISPERSIÓN LUMINOSA
En una determinación cuantitativa de un compuesto determinado todos los factores citados van a ser constantes excepto la concentración
TURBIDÍMETRO

NEFELOMETRO

¿QUÉ MIDE EL TURBIDÍMETRO?
El turbidímetro va a medir la disminución de la luz transmitida a través de una suspensión de partículas utilizando para ello un espectrofotómetro (detector en la misma dirección del haz de luz, se mide A o %T)

¿QUÉ VA A MEDIR EL NEFELOMETRO?
Mide la luz dispersada en dirección distinta a la luz emitida (generalmente
con ángulos que oscilan entre 15 y 90°)
¿QUÉ SE MIDE?
Mide la reducción de la intensidad de la luz en su paso a través de una suspensión, a causa de las partículas presentes en ésta, y cuantifica la luz residual transmitida.

FUNCIONAMIENTO
¿CÓMO SE MIDE?
El aparato utilizado para la medida es el espectrofotómetro.
La luz transmitida se mide a 0o del haz incidente es decir en su misma dirección.
Se puede medir como tanto por ciento en transmitancia (%T) o como absorbancia (A).

¿DE QUÉ DEPENDE LA SENSIBILIDAD DEL MÉTODO?

Dependerá principalmente de la exactitud y sensibilidad del aparato.

¿PARA QUE SE UTILIZA?
Se suele utilizar para soluciones concentradas (para que haya una buena disminución de la luz transmitida). Ejemplo: determinación de proteínas totales en suero, LCR u orina.

¿EN QUÉ SE BASA?
La turbidez es la propiedad óptica de una muestra que hace que la radiación sea dispersada y absorbida mas que transmitida en línea recta a través de la muestra.

¿QUÉ ES?
¿CÓMO FUNCIONA?
NEFELOMETRÍA
Esta dispersión no supone la pérdida neta de potencia radiante, solo es afectada la dirección de la propagación, porque la intensidad de la radiación es la misma en cualquier ángulo.

¿DE QUÉ DEPENDE LA INTENSIDAD DE ESTA RADIACIÓN?


El número de partículas suspendidas
Tamaño
Forma
Índices refractivos de la partícula
Medio dispersante
Longitud de onda de la radiación dispersada.

PRINCIPALES FACTORES DE LOS QUE DEPENDE EL PROCEDIMIENTO


1.-La concentración
2.-Tamaño de la partícula 
3.-Longitud de onda

CONCENTRACIÓN
LA LONGITUD DE ONDA

De la que depende también la sensibilidad del método .
Generalmente las muestras se iluminan con luz blanca.Puesto que la luz detectada en el ángulo de dispersión 0 en ausencia de partículas con un fondo negro, es nula.

¿CÓMO SE MIDE?

El aparato que se utilizan para la medición es el nefelómetro.
Es un aparato diseñados exclusivamente para esta técnica.
Tiene un sistema de detección situado un ángulo fijo de lectura. ( 90˚)

¿PARA QUÉ SE UTILIZA?

Se utilizan principalmente para medir concentraciones específicas de colonias de bacterias en algún medio de cultivo, o de muchas proteínas utilizando el principio de dispersión luminosa molecular.

APLICACIONES

4.-También existe la posibilidad de analizar la presencia en líquidos biológicos de parámetros de combustión del tabaco como por ejemplo la nicotina que puede analizarse por precipitación con ácido wolframosilícico y, en presencia de nornicotina, por precipitación con yodo mercuriato de potasio.
6.-En hematología se utilizan también en algunos contadores de células sanguíneas para distinguir los distintos tipos de células de la sangre.

Kits para la determinación de :
α 1- Glicoproteína ácida u orosomucoide: Se utiliza para el diagnostico de enfermedades reumáticas . Es una proteína típica de fase aguda.

9.-Otra aplicación es el análisis de enzimas que actúan sobre determinados sustratos.
Una suspensión estable se mezcla con la muestra (suero, LC y orina) que contiene la enzima.
La turbidez se relaciona con la concentración de la enzima.

1.-Una de las aplicaciones más extendidas de la turbidimetría al análisis de rutina es en bacteriología
Control de crecimiento bacteriano:

2.-También se usa ampliamente en instrumentos automatizados que miden sensibilidad de antibióticos:

3.-En análisis bioquímico
La turbidimetría se utiliza en:
La determinación de aminoácidos
La determinación de Vitaminas
La determinación de proteínas totales en suero, LCR u orina (haciendo que las proteínas precipiten con TCA o ácido sulfosalicílico).
Para determinar la velocidad de sedimentación de partículas de distintos tamaños.
La nefelometría se utiliza en:
Análisis de proteínas
En la determinación de glucógeno, β- y γ- globulinas en suero y plasmas sanguíneos
Otros ejemplos son la determinación de ribonucleasa, sulfatos en orina.

5.-En analizadores de coagulación
Debido a que las células sanguíneas poseen un tamaño suficiente como para dispersar la energía radiante visible, debido a ello se han construido un buen número de instrumentos que se basan en los procesos de dispersión de la radiación.

7.-En Inmunoquímica: Inmunoturbidimetría e inmunonefelometría
Se han fabricado kits para :
IgA, IgG, IgM, complemento: C3, C4 , y factor reumatoide
La albúmina, transferrina, 2-macroglobulina, haptoglobulina

8.-La nefelometría además se usa para la determinación de algunos fármacos, los cuales se miden utilizando esta técnica conjuntamente con Inmunoquímica.

INSTRUMENTAL
FUENTE DE ENERGÍA RADIANTE

Se emplean diferentes tipo de lámparas: de halógeno, xenón, filamento de tungsteno y laser.
La ventaja del laser es que produce haces de luz estables, de intensidad adecuada a la técnica, bien colimadas y ancho de bandas muy estrechos.
COLIMADOR
Su función es conseguir que el haz de luz que incide en la muestra sea paralelo. Esto es necesario cuando la fuente de luz no es láser. Se puede usar un fluorímetro como nefelómetro teniendo la misma longitud el 2ª monocromador.

CUBETA
Donde se coloca la muestra.
Formas : pueden ser redondas o cilíndricas y cuadradas.
Volumen : pueden ser macrocubetas, semimicrocubetas o microcubetas.
Material : pueden ser vidrio, cuarzo, plástico.

TURBIDÍMETRO SENCILLO
NEFELÓMETRO
LAMPARA DE FILAMENTOS DE TUNGSTENO

LAMPARA DE LÁSER

LAMPARA DE XENÓN

LAMPARA DE HALÓGENO

COLIMADOR

SISTEMA SELECTOR DE LONGITUD DE ONDA

Puede ser de filtros o de monocromadores pero no es necesario cuando de usa como fuente de luz el láser.

SISTEMA DE DETECCIÓN

En el turbidímetro esta colocado en la misma dirección que el haz de luz incidente.
En el nefelómetro se con un ángulo que oscila entre los 15 y los 90o

¿PARA QUÉ ANALISIS SE
UTILIZARAN ESTAS TECNICAS?

Una de las utilidades de estas técnicas son para aquellos análisis en los que hay reacciones antígeno-anticuerpo, donde se distinguen tres etapas:
1.-Una primera, más lenta donde no hay casi variación en la dispersión lumínica.
2.-La segunda , donde hay un gran aumento en esta dispersión.
3.-Una ultima donde la dispersión se hace lenta hasta ser casi constante.

TECNICAS QUE PUEDEN MEDIR ESTAS REACCIONES

LA SEÑAL DE DISPERSIÓN OBTENIDA VA CRECIENDO A MEDIADA QUE EL TIEMPO AUMENTA

8.6 Ejecución de las técnicas
Trabajamos con suspensiones, con lo cual hay conseguir:
-Homogeneidad
-Reproducibilidad
-Estabilidad
Nos lleva a el uso de coloides protectores; sustancias solubles en agua de alto PM
Alcohol polivinílico y dioctil maleato son los más usado

Temperatura, que debe mantenerse constante.
Reconstitución de reactivos, ser precisos con las cantidades de cada uno.
Tiempo de reacción.
Estabilidad de las suspensiones.
Tamaño de las partículas.

SUSTANCIAS QUE SE MIDEN
POR ESTAS TÉCNICAS:

Tanto en orina, como sangre, LCR, estas técnicas son adecuadas para medir cualquier sustancia que se encuentre en ella, para la realización de pruebas inmunológicas.

Hemoglobina
Transferrina
IgG, IgM, IgA
Albúmina
Factores de complemento
Presencia de fármacos

PARTICIPANTES:
Diana Carolina Medrano Caicedo
Jessica Maritza Lalaleo Guangasi
Ruth Camacho Gaibor
Sheyla Miluska Gutierrez Mayuri
Anabela Maricela Molina Cabrera
Vania Solis Aguilar
Patricia Jara Robles
Vanessa Yajamín Andrango
Cristina Jimeno Fiestas
Loreto Rivero Chamorro
En esta técnica calculamos la velocidad con la que se forma el agregado.
La medida se realiza durante los primeros minutos, es decir, cuando tiene lugar el máximo de intensidad de luz dispersada respecto al tiempo.
La velocidad esta directamente relacionada con la cantidad de Ag de la muestra
No se necesita ni blanco de reactivos ni patrón.

ANÁLISIS CINÉTICO
SE OBSERVA COMO LA VELOCIDAD MAXIMA SE ENCUENTRA EN EL MOMENTO DE LA REACCIÓN DONDE TIENE LUGAR EL MAXIMO DE INTENSIDAD DE LUS DISPERSA CON RESPECTO AL TIEMPO.
Full transcript