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Laboratorio de Proteínas

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Nubia Buenahora

on 13 September 2013

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Transcript of Laboratorio de Proteínas

Laboratorio de Proteínas
Fundamento teórico
Desnaturalización de proteínas.
Preguntas
1. ¿Cómo se manifiesta la desnaturalización de la clara de huevo?
Desnaturalización de Proteínas
Reacciones coloreadas específicas
Colocamos en un tubo de ensayo 3ml de solución de albúmina al 1-2%. En otro tubo un pedazo de la capa de la cascara del huevo. Esta práctica consiste en determinar la composición de una fina capa que se encuentra adherida a la cáscara del huevo por su parte interior. A cada tubo añadimos 4-5 gotas de solución de CuSO4 al 1%. y 3ml de solución de NaOH al 20%.


Reacción Xantoproteica
Tenemos clara de huevo en un vaso de precipitado. Tomamos una muestra con una jeringuilla y la vertemos en un tubo de ensayo. Añadimos el HNO3 y calentamos, una vez cambie de color añadimos NH3 otra vez.
En el caso de haber proteínas en la clara de huevo, al añadir HNO3 y calentarlo, ésta debe tomar un color amarillo suave, y al añadir NH3 nuevamente deberá tomar un tono anaranjado.

Las proteínas se desnaturalizan cuando pierden su estructura tridimensional y así el característico plegamiento de su estructura.
Las proteínas experimentan una modificación en la que se agregan átomos o moléculas, como el cobre, zinc e hierro.
Una vez que finaliza este proceso, la proteína comienza a plegarse sin alterar su secuencia de forma que los residuos hidrófobos de la proteína quedan encerrados dentro de su estructura y los elementos hidrófilos quedan expuestos al exterior.Si la forma de la proteína es alterada por algún factor externo (por ejemplo, aplicándole calor, o ácidos), no es capaz de cumplir su función celular. Éste es el proceso llamado desnaturalización.
Reactivo de Biuret
Es aquel que detecta la presencia de proteínas en sustancias de composición desconocida.
Está hecho de hidróxido de sodio (NaOH) y sulfato cúprico (CuSO4). El reactivo, de color azul, cambia a violeta en presencia de proteínas, y vira a rosa cuando se combina con polipéptidos de cadena corta.
Clara de huevo
Hidróxido de sodio al 20%
Sulfato cúprico al 1%
Reactivo de Millón
Preparación
Se prepara disolviendo una parte de mercurio (Hg) en una parte de ácido nítrico (HNO3). De esta manera se forma Nitrato de mercurio Hg2(NO3)2 el cual en un medio fuertemente ácido reacciona con el grupo -OH de la tirosina produciendo una coloración roja característica.


El Reactivo de Millon es un Ensayo químico que sirve para saber si existe tirosina en la solución, si esto es así se genera un coágulo blanco que por calentamiento pasa al rojo.

Reacción Xantoproteica
Hidrólisis de proteínas
Es un método que se puede utilizar para determinar la presencia de proteínas solubles en una solución, empleando ácido nítrico concentrado. La prueba da resultado positivo en aquellas proteínas con aminoácidos portadores de grupos aromáticos, especialmente en presencia de tirosina.
Es una reacción cualitativa. Por ende determina la presencia o no de proteínas. Para cuantificar se usa otra reacción, como la de Biuret.
La hidrólisis de proteínas es la ruptura de la estructura primaria, es decir la ruptura de la secuencia de una proteína.



La hidrólisis de las proteínas termina por fragmentar las proteínas en aminoácidos.



Existen 3 tipos de hidrólisis :



Hidrólisis ácida
Hidrólisis básica
Hidrólisis enzimática
Materiales
1 huevo
Leche
Gelatina sin sabor
Hidróxido de sodio
Vaso de precipitado
Alcohol etílico
Reactivo de Biuret
Albúmina
HNO3
NH3
HCl

Procedimiento
Tomamos albúmina, leche y gelatina; y cada uno es colocado en 3 tubos de ensayo de esta manera
Que a cada uno de estos se le adicione muestras de 2 o 3 ml de ácido clorhídrico (HCl), Alcohol etílico o se le lleve a baño maría para de esta manera observar experimentalmente los efectos de la desnaturalización .
Observaciones
Baño María
Albúmina
Leche
Gelatina
Ácido clorhídrico
Albúmina
Leche
Gelatina
Alcohol
Albúmina
Leche
Gelatina
Al cambiar la temperatura, la proteína de la albúmina se coagula y toma un color blanco.
Cambia la temperatura pero a parte de esto no se observa ningún otro cambio.
Se observan partículas pequeñas que se van precipitando hasta llegar al fondo del vaso.
Al entrar en contacto con el ácido y debido al cambio de pH la proteína se desnaturaliza y aparecen grumos.
La proteína se desnaturaliza, se presenta un cambio irreversible en su color y el ácido clorhídrico actúa catabolizando sus estructuras
Su composición espacial cambia, por lo tanto la proteína de la gelatina sin sabor se desnaturaliza.
Leche con las diferentes sustancias a experimentar
Adición de los agentes de cambio: Ácido y Alcohol
Vaso de precipitado con albúmina y una muestra de alcohol etílico
Procedimiento
Observaciones
Reactivo de Biuret
Al realizar esta práctica con la cáscara y la albúmina del huevo en ambos se presenta el color característico de un resultado positivo en el reactivo de Biuret, este incluye toda la gama del color morado. La diferencia se encuentra en el tono de color que adquieren estas partes del huevo.
La cáscara toma un color rosado mientras que la albúmina obtiene uno morado, permitiéndonos aplicar y sacar nuestras conclusiones por medio de la experimentación de lo teóricamente ya conocido: Entre más morado o más fuerte sea el color adquirido, la proteína cuenta con más aminoácidos.
CuSO4 (Sulfato de cobre)
NaOH (Hidróxido de sodio)
No olvides agitar!
Se añade el reactivo a la cáscara y la albúmina de huevo
La albúmina del huevo vira a morado
La cáscara del huevo vira a rosado
Efectivamente, la albúmina presentó estas descripciones en los momentos dados, comprendiéndose así la presencia de proteínas en la clara de huevo.
Calentamos el tubo de ensayo con HNO3 y albúmina
A este tubo de ensayo le agregamos más HNO3 y adquiere un color anaranjado
Conclusiones
A través del cambio de color de la clara que es transparente y líquida pero después de la desnaturalización se torna opaca y blanca. Esta desnaturalización es irreversible.

A través de su cambio de aspecto causado por la modificación de la interacción de la proteína.
2. ¿Cuál de los tres agentes utilizados tiene mayor poder de desnaturalización?
Teóricamente sería el baño María porque cuando la temperatura es elevada, se aumenta la energía cinética de las moléculas, así, desorganizando la envoltura acuosa de las proteínas y por lo tanto, desnaturalizándolas. Pero al observar los resultados de nuestros experimentos podríamos elegir al ácido clorhídrico por haber, en todos los casos, causado la desnaturalización de las sustancias.
3. ¿Cómo podríamos saber que una sustancia desconocida es una proteína?
Aplicando el reactivo de Biuret o la reacción Xantoproteica en una muestra en un laboratorio y revisando el viraje de la sustancia después de que alguno de estos sea aplicado. La diferencia entre estos dos reactivos radica en la mayor precisíon de el reactivo de Biuret al depender la cantidad de proteína de la tonalidad de su color, mientras que en la reacción Xantoproteica sólo se afirma o niega la presencia de proteínas en la muestra.
4. ¿Qué coloración da la reacción del Biuret?
Color violeta, indicando la presencia de proteínas
5. ¿Una proteína coagulada podría dar la reacción del Biuret?
Sí, una proteína coagulada podría dar la reacción de Biuret porque el reactivo reacciona con cualquier proteína en estado líquido o sólido.
6. Si se realiza la reacción del Biuret sobre un aminoácido como la Glicina ¿es positiva o negativa? ¿Por qué?
La glicina no reacciona con el reactivo de Biuret porque está en forma libre y no hay enlaces peptídicos con los que pueda reaccionar este reactivo. De esta manera la glicina dio una prueba negativa.
Gracias a los reactivos y todas las pruebas realizadas se pudo comprobar que la albúmica es una proteína.
La desnaturalización provoca diversos efectos en la proteína como los cambios en las propiedades hidrodinámicas de ésta que aumentan la viscosidad y disminuyen el coeficiente de difusión.
La desnaturalización provoca una drástica disminución de su solubilidad, ya que los residuos hidrofóbicos del interior aparecen en la superficie.
Gracias a la desnaturalización una proteína pierde sus propiedades biológicas ya que resulta contando únicamente con su estructura primaria.
Los agentes que provocan la desnaturalización actúan catabolizando sus estructuras: cuaternaria,terciaria, secundaria, hasta la primaria. Incluyendo liberación de energía.
Los temas en áreas como la biología por más que sean variados, siempre vienen enlazados entre ellos. De tal forma que la mayoría de temáticas tienen su correspondiente práctica experimental por la cual aplican conocimientos y se intenta llegar a otros por la vía de la observación
Existen diferentes factores neutralizantes como la polaridad del disolvente, la fuerza iónica, el pH y la temperatura.
La desnaturalización disminuye la solubilidad de una sustancia ya que deja los residuos hidrófobos fuera de su estructura o expuestos al exterior.
Es muy interesante adquirir un conocimiento de esta manera ya que los datos teóricos y los recogidos por los sentidos se mantienen, y entre los dos se dan coherencia para una mejor comprensión de la información
Entre mayor sea la cantidad de aminoácidos de una proteína, más fuerte o intenso será el tono del morado en el reactivo de Biuret
NubiaVanessa
Buenahora Quinto
Sulfato de cobre
Cuchara
Tubos de ensayo
Reactivo de Millon
Jeringa plástica
Agua destilada
Filtro de tela
Pastilla de cuajo
El efecto que causa el alcohol es "cortar" la leche, dándole un aspecto más viscoso
En la gelatina no se observa ningún cambio, esta no se desnaturaliza, por lo tanto mantiene su estructura.
El cambio de temperatura no crea ningún cambio notorio en la gelatina sin sabor, por lo tanto, esta no se desnaturaliza.
Y
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