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Tecnicas de Analisis de Ácidos Nucleicos

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Eduart Henriquez

on 28 November 2012

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Transcript of Tecnicas de Analisis de Ácidos Nucleicos

Que son los ácidos nucleicos? Técnicas de análisis de ácidos nucleicos Los ácidos nucleicos son grandes polímeros formados por la repetición de monómeros denominados nucleótidos, unidos mediante enlaces fosfodiéster. Algunas moléculas de ácidos nucleicos llegan a alcanzar tamaños gigantescos, con millones de nucleótidos encadenados. Tipos Técnicas de Análisis de los ácidos nucleicos
ELECTROFORESIS La electroforesis es una técnica para la separación de moléculas según la movilidad de estas en un campo eléctrico. Usos Revela la presencia de ADN
El tamaño aproximado de los fragmentos presentes en la muestra. Esta técnica es utilizada en muchos experimentos utilizados en la Genetica molecular Pasos para una Electroforesis Paso 1.1: Preparar una solución de sacarosa a una concentración de el 1% Paso1.2: Calentamos las solución hasta el punto de ebullición Paso 1.3: Lo vaciamos en un recipiente conocido como Bandeja de Electroforesis Paso 2.1: Introducimos la bandeja de electroforesis en una de mayor tamaño llamada cámara de electroforesis y le agregamos abundante solución buffer Paso2.2 Preparamos las muestras de ADN que se colocaran dentro de los orificios del Gel de sacarosa.

Usando una micro pipeta mezclamos la muestra con un Buffer de carga La función del Buffer de carga es inpedir que el ADN no flote en la solución, también el color verde del buffer de carga permite localizar la muestra trasparente del ADN Paso2.3En otro de los orificios del Gel de sacarosa también añadiremos una muestra que también tiene buffer de carga conocida como Marcador de peso molecular El marcador de peso molecular posee fragmentos de ADN de tamaño conocido Paso3: Una vez colocadas las muestras de ADN dentro de los orificios del Gel de sacarosa, sellamos las cámara de electroforesis que esta a su vez contiene dos electrodos (+ y -) y esta a su vez esta conectada a una fuente de poder que generara entre 50-100V EL ADN presenta una carga neta Negativa debido a las presencia de grupos fosfatos Cuando aplicamos voltaje en la cámara de electroforesis el ADN migrara de el polo negativo al positivo Enramado de sacarosa 30 min. a 1 hora Paso4: Colocamos el Gel en una solución que contiene bromuro de etidio El bromuro de etidio es un agente mutagénico muy peligroso El Bromuro de etidio tiene la propiedad de emitir fluorescencia cuando cuando se le aplica luz ultravioleta Recomendaciones!
Utilizar gafas anti-UV y guantes para este tipo de practica Paso5: Se coloca el Gel sobre una lampara UV para observar una serie de bandas fluorescentes en el gel mta A mta B marcador de peso molecular Resultados del analisis Tipos de electroforesis

Electroforesis capilar
Electroforesis en gel
Electroforesis proteica
Electroforesis bidimensional Electroforesis en Gel
CROMATOGRAFÍA DE INTERCAMBIO IÓNICO Es el método más utilizado para la separación de ácidos nucleicos. El mecanismo básico es el intercambio reversible de los iones en solución con los grupos funcionales unidos covalentemente a una fase estacionaria insoluble llamada resina. Gracias Por su atención
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