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PRUEBAS DE FAGOCITOSIS

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by

Sergio Bolio

on 9 October 2014

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Transcript of PRUEBAS DE FAGOCITOSIS

PRUEBAS DE FAGOCITOSIS
NBT
ANIONES DE BOMBA OXIDATIVA
APLICACIONES CLÍNICAS
FAGOCITOSIS DE LEVADURAS
Quimioluminiscencia
Prueba de la reducción de dihidrorodamina (DHR)
Mide la respuesta oxidativa de los fagocitos ante estímulos solubles y particulados.
También detecta anormalidades de los leucocitos de los pacientes con CGD y en los casos de deficiencias en lactoferrina y en mieloperoxidasa.
Utiliza un quimioluminómetro o un contador de centelleo con la opción QL.
Base: liberación de energía por los intermediarios inestables de la reacción:

Radicales Libres de Oxigeno
vs
Sustratos oxidables
Emisión de radiación electromagnética producida por una reacción química.
Técnica que mide la explosión oxidativa (o estallido respiratorio) intracelular.
Se realiza mediante citometría de flujo
Base: Los fagocitos reducen el DHR a un compuesto fluorescente en individuos sanos.
Ventajas:
Detección de enfermedades recesivas.
Detección de madres portadoras.
Análisis de monocitos y neutrófilos por separado.
Nitroazul de tetrazolio
(Nitro blue tetrazolium)
Dx de EGC
- Oxidasa de NADPHE
< Producción de EROS
Supervivencia de Mo
¿Qué pasa?
Procedimiento
Ejemplo
Fundamento
Fagocito + Antígeno (Levadura)
Tinción de May Grünwald
BIBLIOGRAFÍA
Incubación
Conteo
http://www.iralabs.com/eDocs/EPUB0142.pdf
http://epidemiologiamolecular.com/exploracion-respuesta-celular/#_Toc255664948
http://www.medigraphic.com/pdfs/alergia/al-2013/al133b.pdf
http://www.medigraphic.com/pdfs/bioquimia/bq-2004/bq042d.pdf
http://depa.fquim.unam.mx/inmunologia/temprevisados/evaluarinmuno.ppt
http://www.protocol-online.org/prot/Protocols/In-vitro-Phagocytosis-Assay-of-Macrophages-3460.html

Indicador
Procedimiento
Interpretación
ESTABLECER EL GRADO DE LA RESPUESTA INMUNOLÓGICA
Índice fagocítico
Materiales
Agar Papa Dextrosa.
Tinción de May Grünwald.
Células de levadura (Saccharomyces cerevisiae).
Sol. Ác. Tánico 1%.
DMEM Hams F-12 medium sin rojo fenol.
Buffer fosfato salino.
"Concentrado de fagocitos".
DETERMINAR EL ÍNDICE FAGOCÍTICO, % DE LISIS
CAPACIDAD DE DIGERIR AGENTES PATÓGENOS
FUNCIONALIDAD DE LOS POLIMORFONUCLEARES NEUTRÓFILOS
Levaduras fagocitadas
objetivo 10X
Dos neutrófilos con levaduras en su interior
Levaduras fagocitadas
objetivo 40X
Dos neutrófilos con levaduras en su interior
Levaduras fagocitadas
objetivo 100X
Un polimorfo con muchas levaduras
Levaduras fagocitadas
objetivo 100X
La variación en la coloración evidencia a los distintos grados de digestión.
Levaduras fagocitadas
objetivo 100X
La digestión está casi completa. Núcleo del neutrófilo: Levaduras: casi decoloradas.
Desarrollo
Levadura
Fagocitos
+ Agar
+ Buffer
+ DMEM
Contar
Incubar / Seleccionar
+ AT
+ Buffer
+ Tinción
Observar
1000x
Aplicación del test de fagocitosis de levadura:
Enfermedad granulomatosa crónica
Deficiencia de glucosa-6-fosfatodeshidrogenasa
Deficiencia de mieloperoxidasa
Síndrome de Job
Síndrome de Chédiak-Higashi (LYST)
Inmunodeficiencias secundarias.

Aplicación clínica de la prueba de prueba de reducción de NBT:
Enfermedad granulomatosa crónica
Deficiencia de glucosa 6 fosfato deshidrogenasa
NHR
Enfermedad Cronica Granulomatosa
LIGADA AL X
recesiva
Defecto en la subunidad gp91-phox, brazo corto del cromosoma X
PREGUNTAS
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