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METODOS DE INVESTIGACION EN NEUROCIENCIAS

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Adriana Gómez

on 15 January 2015

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MÉTODOS DE INVESTIGACIÓN EN NEUROCIENCIAS
Lesiones/ Ablación
En medicina, ablación es la destrucción completa de un órgano o de un tejido, mediante una intervención quirúrgica, o por medios físicos o compuestos químicos.

Lesión
es un cambio anormal en la morfología o estructura de una parte del cuerpo producida por un daño externo o interno.

Ablación experimental
Esta tecnica se basa en la extirpación o destrucción de una parte del encéfalo de un animal de laboratorio. y no implica la extracción del tejido cerebral, aunque no se descarta.
Ácido caínico
La lesión se produce por la inyeccion intra-cerebral de un aminoácido excitatorio. y se ablanda mas específicamente con (6-HD).
lesiones temporales
Pueden ser con anestésico local o un farmaco llamado "MUSCIMOL", con el primero, no se permite los potenciales de acción en los axones. y con el segundo se estimula los receptores GABA (principal neurotransmisor inhibitorio en el encéfalo). y por ultimo también se puede enfriar el tejido nervioso con un instrumento llamado criodo.
Estereotáxico
El tejido cortical se extrae
por succión a través de una pipeta
de cristal de punta fina,
manejada manualmente.
Lesiòn por aspiraciòn.
Lesiones por radiofrecuencia
El calor que emana la corriente
destruye el tejido. El tamaño y 1a forma de la lesión vienen
determinados por la duración y la intensidad de la corriente, así como por la configuración de la punta del electrodo.
Cortes con bisturí
Es una de las técnicas
que se utilizan para suprimir la conducción de mensajes por un nervio o por una vía nerviosa.


Lesiones bilaterales y unilaterales
Los efectos comportamentales de las lesiones unilaterales (Iesiones restringidas a una mitad del encéfalo) son mucho más leves que las lesiones bilaterales simétricas (lesiones
que afectan a ambos lados del encéfalo), sobre todo en especies no humanas. De hecho, los efectos comportamentales de lesiones unilaterales de algunas estructuras cerebrales
pueden ser difíciles de detectar.
Bloqueo por frío o bloqueo criogènico
Cuando se bombea un refrigerante por medio de una criosonda las neuronas cercanas a su punta se enfrían hasta que dejan de disparar.
MÉTODOS HISTOLÓGICOS
"HISTO" Se refiere a tejido cerebral
Después de producir una lesión cerebral y haber observado sus efectos en la conducta del animal, se debe rebanar y marcar el cerebro de manera que al observar esto al microscopio la ubicación de la lesión puede verse con toda claridad.
Fijación Y Corte
Si se pretende conservar la forma que presenta el tejido al momento de la muerte del organismo a fin de estudiarlo, es preciso destruir las enzimas autolíticas antes de que lo conviertan en una masa informe e impedir que las bacterias o el moho lo descompongan.
Una vez que se fija el cerebro, es preciso cortarlo en rebanadas (o secciones) muy delgadas y teñir varias estructuras celulares a fin de percibir los detalles anatómicos.
Los cortes son realizados con un micrótomo
1.-Un cuchillo
2.-Plataforma
3.-Mecanismo para moverse lo preciso.
la plataforma cuenta con un accesorio que congela el cerebro hasta endurecerlo, a fin de poderlo cortar en secciones delgadas.
Después de cortar el tejido, hay que colocar las secciones en portaobjetos para observarlas al microscopio.

Después puede teñirse el tejido sumergiéndolo por completo en distintas soluciones químicas.
Por último, se vierte una pequeña cantidad de líquido transparente conocido como medio de montaje sobre las secciones ya marcadas y se cubre todo el cubreobjetos con un cristal muy delgado.

TINCIÓN:

Al observar al microscopio una sección no teñida del tejido cerebral puede distinguirse las siluetas de algunas masas celulares grandes y los haces de fibras más prominentes, pero no los detalles finos.
Los investigadores crearon una gran cantidad de tinciones distintas, con las cuales identifican sustancias específicas dentro o fuera de la célula.


En el siglo XIX, Franz Nissl, un neurólogo alemán, descubrió que un tinte conocido como azul de metileno podría utilizarse para teñir los cuerpos celulares del tejido cerebral.
conocida como sustancia de Nissl, se compone de ARN, ADN, y las proteínas asociadas presentes en el núcleo y dispersas, en forma de gránulos, en el citoplasma.
El descubrimiento de las tinciones de los cuerpos celulares permitió identificar masas nucleares en el cerebro.
Existen muchos tintes para teñir los cuerpos celulares presentes en secciones del cerebro, pero el más usado es la violeta de cresilo.
La tinción no es selectiva para los cuerpos celulares nerviosos; todas las células, neuronas y glías se tiñen por igual. Corresponde al investigador distinguir una de otra, de acuerdo con su tamaño, forma y localización.


Métodos Químicos/Farmacológicos
*Utilizados por psicofarmacólogos
Su estrategia consiste en administrar fármacos que aumentan o disminuyen, según sea el caso, el efecto de un neurotransmisor determinado y observar las consecuencias comportamentales.
Vías de Administración
1) Se le dan al sujeto con los alimentos
2) Se le inyectan a través de una sonda en el estómago (inyección intragástrica)
3) Se inyectan hipodérmicamente
o en la cavidad peritonal del abdomen (inyección intraperitoneal)
o en un músculo grande (inyección intramuscular)
o en el tejido graso bajo la piel (inyección subcutánea)
o en una vena grande de superficie (inyección endovenosa)

Estás vías periféricas frecuentemente presentan un problema, es que muchos fármacos no atraviesan fácilmente la
barrera hematoencefálica.

Para superar este problema, se practica una cirugía estereotáxica en la cual se implanta una
cánula
, que es un fino tubo hueco y por medio de él se inyectan los fármacos en pequeñas cantidades.
Lesiones químicas selectivas
Existe una manera de provocar lesiones selectivas, se inyectan unos venenos neurales conocidos como
neurotoxinas
que tienen afinidad a ciertos componentes del sistema nervioso.

o Acido caínico o acido iboténico – es administrado en micro-inyecciones y lo absorben los cuerpos celulares que están cerca del extremo de la cánula y destruye únicamente esas neuronas, dejando ilesas a las demás, incluso a las que atraviesan sus axones por esa región cerebral.

o 6-hidroxidopamina – es absorbida únicamente por las neuronas que liberan noradrenalina y dopamina, dejando ilesas a otras neuronas en el lugar de la inyección.

Medida de la actividad química

1) Técnica de 2-desoxiglucosa

2) Diálisis cerebral

Localización de neurotransmisores y receptores en el encéfalo

Para comprender la función psicológica de un neurotransmisor es necesario averiguar su localización en el encéfalo.

1)
Inmunocitoquímica
: cuando se inyecta un animal con una proteína extraña, su organismo tiene una respuesta inmunitaria, produce anticuerpos que se unen a la proteína y ayudan al organismo a eliminarla o destruirla. La inmunocitoquímica es un procedimiento para detectar estas neuroproteínas en el encéfalo. Se marcan sus anticuerpos con una tinción y se exponen las secciones cerebrales a estos anticuerpos marcados. Las regiones cerebrales donde se acumula el tinte señalan la localización de la neuroproteína que se está estudiando.

2)
Hibridación in situ
: Requiere de los siguientes pasos, primero se obtienen hebras de ARN hibrido con la secuencia de bases complementaria a la del ARNm que dirige la síntesis de la neuroproteína que interesa. Las hebras de ARN se marcan con un tinte y se exponen a las secciones cerebrales, éstas se unen a las hebras de ARNm complementarias, señalando la localización de las neuronas que liberan la neuroproteína investigada.

Para ello, el tejido nervioso debe sumergirse en un fijador; Como la formalina que detiene la autolisis, endurece el tejido mas suave y frágil, y mata cualquier microorganismo que pudiera destruirlo.
Genéticos
Este método es de mucha utilidad puesto que los genes son los primeros responsables del organismo.
La genética juega un papel importante en el desarrollo fisiológico de las personas.
Estudios con GEMELOS
*Gemelos monocigóticos y dicigóticos
*Gemelos concordantes y discordantes

Gracias estos estudios se ha determinado que algunas enfermedades mentales son de rasgo hereditario y también se ha encontrado que estos factores genéticos influyen en características individuales
Estudios sobre ADOPCION.

Sirve para evaluar el carácter hereditario de un rasgo de comportamiento concreto.
Los rasgos de este comportamiento estan influidos por factores genéticos o ambientales.

Mutaciones dirigidas/ Supresión de génes
Se altera un gen a tal manera que sea defectuoso, se inserta en una rata para observar y estudiar los efectos (en biología y fisiología) que tiene la falta de alguna proteína, o por el contrario la función que realiza alguna proteína por si misma
SUSTITUCION de genes
Se sustituye un gen por otro diferente o exactament igual,
Conclusión

Adriana Gómez
Daniela Salinas
Lizzeth Barajas
Mindalay Sanchez
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